藍莓中不可萃取多酚的提取方法技術

本發明專利技術涉及藍莓中不可萃取多酚的提取方法，屬于植物多酚提取技術領域。該提取方法包括以下步驟，制備藍莓渣、制備藍莓渣粉末、酸溶液浸泡、堿溶液浸泡、酶解、離心、萃取、收集提取物。本實發明專利技術所述的藍莓中不可萃取多酚的提取方法，本發明專利技術所提供的提取方法，操作步驟簡單，可以在同一容器中進行，無需反復收集提取物；采用弱濃度酸堿對物料進行處理，并利用乙酸乙酯和乙醇混合液萃取，方法溫和，可以最大限度的保留不可萃取多酚的生物活性，并且提高了提取率，對環境污染十分小。

【技術實現步驟摘要】
藍莓中不可萃取多酚的提取方法
本專利技術屬于植物多酚提取
，具體涉及藍莓中不可萃取多酚的提取方法。
技術介紹
藍莓，英文名稱：Blueberry，意為藍色漿果，屬杜鵑花科，越橘屬植物，果實呈深藍色，披白霜，近圓形，果肉細膩，果昧酸甜。藍莓果實中含有豐富的營養成分，具有防止腦神經老化、保護視力、強心、抗癌、軟化血管、增強人機體免疫等功能，營養成分高，被譽為“黃金漿果”，是世界糧農組織推薦的五大健康水果之一。藍莓果實中除了常規的糖、酸和維生素C外，富含維生素E、維生素A、維生素B、超氧化物歧化酶(SOD)、熊果苷、蛋白質、花青苷、食用纖維以及豐富的鉀、鐵、鋅、鈣等礦物質元素，維生素都高于其他水果，花青素、微量元素也很高，屬高氨基酸，高銅，高鋅，高鐵的果品。藍莓果實有極強的藥用價值及營養保健功能，藍莓能有效降低膽固醇，防止動脈粥樣硬化，促進心血管健康；有增強心臟功能、預防癌癥和心臟病的功效，能防止腦神經衰老、增強腦力；可以強化視力，減輕眼球疲勞。此外，藍莓還可以治療一般的傷風感冒、咽喉疼痛以及腹瀉等癥。此外，研究證明:藍莓具有抗突變、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化等作用，這些作用主要是由高含量的多酚所介導的。1981年，Haslam首次提出植物多酚這一術語，它將多酚分為單寧及其相關化合物(如單寧的前體化合物和聚合化合物)和聚黃烷醇類(含縮合單寧和相關化合物)兩大基本類型。多酚是植物體內復雜的酚類次生代謝產物，具有多元酚結構，主要存在于植物的皮、根、葉、殼及果肉中，具有抗氧化、清除自由基等功能。有關多酚的分類方法有很多種，類黃酮、花青素、酚酸等都屬于多酚。近幾年，國外學者根據多酚結合方式和萃取方法的不同，將其分為可萃取多酚(extractablepolyphenols，EPP)和不可萃取多酚(non-extractablepolyphenols，NEPP)，所謂可萃取多酚主要是指通過簡單的有機溶劑萃取或水就可以獲得的處于游離狀態的多酚，不可萃取多酚主要是指結合于細胞壁上的一些水合單寧酸和原花青素，需通過化學或者酶處理等方法，打破多酚物質與細胞壁結合的化學鍵，才將其分離出來的部分。目前對植物多酚的研究主要集中在EPP，而很少關注NEPP。如果考慮NEPP，水果中有益多酚如原花青素、鞣花酸、兒茶酚含量遠遠超出人們的估計。目前這些NEPP一直不被列為食物的營養組成，實際上這些NEPP是食物中具有生物活性的成分，可被結腸中細菌發酵，產生的代謝產物對人體十分有益。藍莓中含有較高的NEPP，由于萃取過程的限制，不可提取多酚被研究人員忽視；并且藍莓中的NEPP和膳食纖維蛋白綴合，使其提取難度增大。目前關于提取藍莓中NEPP大多采用物理輔助方法進行提取，提取方法處理步驟較多，提取效率較低，提取出的NEPP活性較低。有鑒于此，有必要提出一種藍莓中不可萃取多酚的提取方法。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種方法溫和、操作步驟簡單、提取率高、提取出的不可萃取多酚活性高、對環境污染小的提取藍莓中不可萃取多酚的方法。為了實現上述目的，所采用的技術方案是：藍莓中不可萃取多酚的提取方法，所述方法包括以下步驟：(1)制備藍莓渣：收集藍莓榨汁后的殘渣，并在常溫下干燥，得藍莓渣；(2)制備藍莓渣粉末：粉碎藍莓渣，得藍莓渣粉末；(3)酸溶液浸泡：將藍莓渣粉末浸泡在酸溶液中，其料液比是1g:100-120ml，浸泡11.5-12.5小時，浸泡溫度為3-5℃，得酸性浸泡液；(4)堿溶液浸泡：向酸性浸泡液中加入堿溶液，至浸泡液中氫氧根離子濃度為0.45-0.55mol/L，浸泡2.5-3.5小時，浸泡溫度為3-5℃，得堿性浸泡液；(5)酶解：向堿性浸泡液中滴加酸溶液，至pH值為3.7-3.8；再加入纖維素酶、果膠酶，至維素酶濃度為2-3U/ml，果膠酶濃度為50-55U/ml，進行酶解處理，酶解11.5-12.5小時，酶解溫度為38-42℃，得酶解溶液；(6)離心：將酶解溶液離心10-20min，轉速為7000-9000rpm，保留上清液；(7)萃取：用萃取劑萃取上清液，靜置分層后，上層為油相，下層為水相，收集水相；(8)收集提取物：蒸干水相，收集粉末，得所述不可萃取多酚。進一步的，所述步驟(2)中藍莓渣粉末過80-120目的篩子；所述步驟(3)中酸溶液是氫離子濃度為0.5-0.6mol/L的酸溶液；所述步驟(5)中滴加的酸溶液是氫離子濃度為3-5mol/L的酸溶液。進一步優選的，所述步驟(3)中酸溶液為鹽酸溶液；所述步驟(4)中加入的堿溶液為氫氧化鈉溶液；所述步驟(5)中滴加的酸溶液為鹽酸溶液。再進一步優選的，所述氫氧化鈉溶液為飽和氫氧化鈉溶液。進一步的，所述步驟(7)中上清液與萃取劑的體積比為1:4-5。進一步優選的，所述萃取劑是乙酸乙酯和乙醇混合液。再進一步優選的，所述乙酸乙酯和乙醇混合液是體積比為1:3-4的乙酸乙酯和乙醇混合液。進一步的，所述步驟(8)中蒸干水相采用真空旋轉蒸發的方法。進一步的，所述真空旋轉蒸發的溫度為70-75℃，真空度為0.01-0.09MPa。與現有技術相比，本專利技術的有益效果在于：1、本專利技術所提供的提取方法，操作步驟簡單，可以在同一容器中進行，無需反復收集提取物。2、本專利技術采用弱濃度酸堿對物料進行處理，并利用乙酸乙酯和乙醇混合液萃取，方法溫和，可以最大限度的保留不可萃取多酚的生物活性，使不可萃取多酚清除自由基的能力較強，并且提高了提取率。3、本專利技術采用鹽酸溶液和氫氧化鈉溶液來浸提藍莓渣，鹽酸和氫氧化鈉反應生成的是水和氯化鈉，不影響整體的操作過程，旋轉蒸發得到的絕大多數物質是多酚。采用其他的酸堿，需要用大孔吸附樹脂柱子，才可以減少無機鹽類及強離子、低分子化合物存在的影響，以達到分離、純化、除雜的目的。4、本專利技術的提取過程中用弱酸弱堿溶液，對環境污染十分小，有利于工業化生產與推廣。具體實施方式為了進一步闡述本專利技術藍莓中不可萃取多酚的提取方法，達到預期專利技術目的，以下結合較佳實施例，對依據本專利技術提出的藍莓中不可萃取多酚的提取方法，其具體實施方式、結構、特征及其功效，詳細說明如后。在下述說明中，不同的“一實施例”或“實施例”指的不一定是同一實施例。此外，一或多個實施例中的特定特征、結構或特點可由任何合適形式組合。在詳細闡述本專利技術藍莓中不可萃取多酚的提取方法之前，有必要對本專利技術中提及的相關材料和實驗儀器，以及名詞做進一步說明，以達到更好的效果。本專利技術中采用的材料為：纖維素酶：纖維素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶)是降解纖維素生成葡萄糖的一組酶的總稱，它不是單體酶，而是起協同作用的多組分酶系，是一種復合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、內切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等組成，還有很高活力的木聚糖酶。作用于纖維素以及從纖維素衍生出來的產物。本專利技術采用的是活力為10u/mg的纖維素酶。果膠酶：果膠酶由黑曲霉經發酵精制而得。外觀呈淺黃色粉末狀。果膠酶主要用于果蔬汁飲料及果酒的榨汁及澄清，對分解果膠具有良好的作用。果膠酶是一種生物酶，作用是促進果膠水解，常用于高中生物中植物體細胞雜交的去除細胞壁的過程。本專利技術采用的是活力為500u/mg的果膠酶。膠頭滴管又稱膠帽滴管，它是用于吸取或滴加少量液體試劑的一種儀器。移液管，用來準確移取一本文檔來自技高網...

【技術保護點】
藍莓中不可萃取多酚的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：(1)制備藍莓渣：收集藍莓榨汁后的殘渣，并在常溫下干燥，得藍莓渣；(2)制備藍莓渣粉末：粉碎藍莓渣，得藍莓渣粉末；(3)酸溶液浸泡：將藍莓渣粉末浸泡在酸溶液中，其料液比是1g:100?120ml，浸泡11.5?12.5小時，浸泡溫度為3?5℃，得酸性浸泡液；(4)堿溶液浸泡：向酸性浸泡液中加入堿溶液，至浸泡液中氫氧根離子濃度為0.45?0.55mol/L，浸泡2.5?3.5小時，浸泡溫度為3?5℃，得堿性浸泡液；(5)酶解：向堿性浸泡液中滴加酸溶液，至pH值為3.7?3.8；再加入纖維素酶、果膠酶，至維素酶濃度為2?3U/ml，果膠酶濃度為50?55U/ml，進行酶解處理，酶解11.5?12.5小時，酶解溫度為38?42℃，得酶解溶液；(6)離心：將酶解溶液離心10?20min，轉速為7000?9000rpm，保留上清液；(7)萃取：用萃取劑萃取上清液，靜置分層后，上層為油相，下層為水相，收集水相；(8)收集提取物：蒸干水相，收集粉末，得所述不可萃取多酚。

【技術特征摘要】
1.藍莓中不可萃取多酚的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：(1)制備藍莓渣：收集藍莓榨汁后的殘渣，并在常溫下干燥，得藍莓渣；(2)制備藍莓渣粉末：粉碎藍莓渣，得藍莓渣粉末；(3)酸溶液浸泡：將藍莓渣粉末浸泡在酸溶液中，其料液比是1g:100-120ml，浸泡11.5-12.5小時，浸泡溫度為3-5℃，得酸性浸泡液；(4)堿溶液浸泡：向酸性浸泡液中加入堿溶液，至浸泡液中氫氧根離子濃度為0.45-0.55mol/L，浸泡2.5-3.5小時，浸泡溫度為3-5℃，得堿性浸泡液；(5)酶解：向堿性浸泡液中滴加酸溶液，至pH值為3.7-3.8；再加入纖維素酶、果膠酶，至維素酶濃度為2-3U/ml，果膠酶濃度為50-55U/ml，進行酶解處理，酶解11.5-12.5小時，酶解溫度為38-42℃，得酶解溶液；(6)離心：將酶解溶液離心10-20min，轉速為7000-9000rpm，保留上清液；(7)萃取：用萃取劑萃取上清液，靜置分層后，上層為油相，下層為水相，收集水相；(8)收集提取物：蒸干水相，收集粉末，得所述不可萃取多酚。2.根據權利要求1所述的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張愛琳，許程劍，苗穎，張登科，郝程列，
申請(專利權)人：天津農學院，
類型：發明
國別省市：天津,12