一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基制造技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，包括上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％?5％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為5％?10％，胰島素2?10mg/L，L?谷氨酰胺，2?4mM，腐胺，1?10mg/L，黃體酮10?15ng/mL，葡萄糖，5?25mM，脂類(lèi)復(fù)合物，2?4mM，微量元素，1?5mg/L。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)采用無(wú)血清等動(dòng)物源的成分，以DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及添加劑兩大部分組成，能夠有效地避免因使用血清帶來(lái)的諸多的不利影響，無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)部添加人表皮生長(zhǎng)因子以及適當(dāng)添加促貼壁物質(zhì)、促生長(zhǎng)因子以及酶抑制劑等添加物，延長(zhǎng)人羊膜上皮細(xì)胞在體外的壽命，有效地?cái)U(kuò)增其數(shù)量，此外，保持其干細(xì)胞和上皮細(xì)胞的特性，提高干細(xì)胞和上皮細(xì)胞的質(zhì)量。

A Serum-free Medium for Human Amniotic Epithelial Cells

The present invention discloses a serum-free culture medium for human amniotic epithelial cells, including basic culture medium for epithelial cells and additives. The volume of the basic culture medium for epithelial cells is taken as a reference. The additive composition and content are fibronectin, volume ratio 2%5%, transferrin, volume ratio 5%10%, insulin 2_10mg/L, L_glutamine, 2_4;mM, rot, respectively. Amine, 1_10mg/L, progesterone 10_15ng/mL, glucose, 5_25mM, lipid complex, 2_4mM, trace elements, 1_5mg/L. The invention adopts animal-derived ingredients such as serum-free, and consists of DMEM/F12 basic culture medium and additives. It can effectively avoid many adverse effects caused by using serum. The serum-free culture medium is supplemented with human epidermal growth factor and additives such as adherence-promoting substances, growth-promoting factors and enzyme inhibitors to prolong human amniotic epithelial cells in vivo. External life expectancy, effective expansion of its number, in addition, to maintain the characteristics of its stem cells and epithelial cells, improve the quality of stem cells and epithelial cells.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基
專(zhuān)利技術(shù)涉及生物
，具體為一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基。
技術(shù)介紹
干細(xì)胞移植憑借其細(xì)胞來(lái)源豐富、不易感染、免疫原性低和并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)，已逐漸成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。人羊膜上皮細(xì)胞是位于人胎盤(pán)羊膜上立方體柱狀緊密排列的單層細(xì)胞，表達(dá)多種胚胎干細(xì)胞表面標(biāo)記，是一類(lèi)具有自我更新與多向分化潛能的成體干細(xì)胞，具有不表達(dá)端粒酶、無(wú)致瘤性、免疫原性低以及安全性好等優(yōu)點(diǎn)，因此具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。但是，目前對(duì)于人羊膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中其增殖以及分裂速度較胚胎干細(xì)胞要慢，因此在實(shí)際的人羊膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中其增殖分化的能力較差，導(dǎo)致擴(kuò)增數(shù)量不足，此外，傳統(tǒng)的對(duì)于人羊膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基是含有牛血清的培養(yǎng)基，由于血清成分復(fù)雜易帶入外源病毒等問(wèn)題易對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)增加阻礙，此外，市面上存在的無(wú)血清培養(yǎng)基無(wú)法很好地適應(yīng)人羊膜上皮細(xì)胞體外擴(kuò)增時(shí)的特點(diǎn)，進(jìn)而無(wú)法明確培養(yǎng)物的成分以及促進(jìn)人羊膜上皮細(xì)胞的順利分化，為此，我們提出了一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
專(zhuān)利技術(shù)的目的在于提供一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，以解決上述
技術(shù)介紹
中提出的問(wèn)題。為實(shí)現(xiàn)上述目的，專(zhuān)利技術(shù)提供如下技術(shù)方案：一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，其特征在于：以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％-5％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為5％-10％，胰島素2-10mg/L，L-谷氨酰胺，2-4mM，腐胺，1-10mg/L，黃體酮10-15ng/mL，葡萄糖，5-25mM，脂類(lèi)復(fù)合物，2-4mM，微量元素，1-5mg/L。優(yōu)選的，所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12(1：1，V/V)基礎(chǔ)培養(yǎng)基。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基的PH值控制在6.5-7.5之間。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基另添加有人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)1-10ng/mL。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基另外添加2-4mg/L的大豆胰酶作為酶抑制劑。優(yōu)選的，所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑按照特定體積比或含量混合在人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)之前構(gòu)成人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系。優(yōu)選的，所述人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)為人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系內(nèi)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是：1、該種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，采用無(wú)血清等動(dòng)物源的成分，以DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及添加劑兩大部分組成，基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能夠很好的供人羊膜上皮細(xì)胞體外擴(kuò)增過(guò)程中一系列的生命活動(dòng)，同時(shí)，能夠有效地避免因使用血清帶來(lái)的諸多的不利影響。2、該種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)部添加人表皮生長(zhǎng)因子以及適當(dāng)添加促貼壁物質(zhì)、促生長(zhǎng)因子以及酶抑制劑等添加物，改變培養(yǎng)基整體成分及形態(tài)，同時(shí)，延長(zhǎng)人羊膜上皮細(xì)胞在體外的壽命，保護(hù)人羊膜上皮細(xì)胞在體外擴(kuò)增過(guò)程，有效地?cái)U(kuò)增其數(shù)量，此外，保持其干細(xì)胞和上皮細(xì)胞的特性，保證了干細(xì)胞的質(zhì)量。具體實(shí)施方式下面將對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本專(zhuān)利技術(shù)一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本專(zhuān)利技術(shù)中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本專(zhuān)利技術(shù)保護(hù)的范圍。實(shí)施例一：專(zhuān)利技術(shù)提供一種技術(shù)方案：一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，其特征在于：以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為5％，胰島素2mg/L，L-谷氨酰胺，2mM，腐胺，1mg/L，黃體酮10ng/mL，葡萄糖，5mM，脂類(lèi)復(fù)合物，2mM，微量元素，1mg/L。所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12(1：1，V/V)基礎(chǔ)培養(yǎng)基。所述無(wú)血清培養(yǎng)基的PH值控制在6.5。所述無(wú)血清培養(yǎng)基另添加有人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)1ng/mL。所述無(wú)血清培養(yǎng)基另外添加2mg/L的大豆胰酶作為酶抑制劑。所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑按照特定體積比或含量混合在人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)之前構(gòu)成人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系。所述人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)為人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系內(nèi)。實(shí)施例二：專(zhuān)利技術(shù)提供一種技術(shù)方案：一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，其特征在于：以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比5％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為10％，胰島素10mg/L，L-谷氨酰胺，4mM，腐胺，10mg/L，黃體酮15ng/mL，葡萄糖，25mM，脂類(lèi)復(fù)合物，4mM，微量元素，5mg/L。優(yōu)選的，所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12(1：1，V/V)基礎(chǔ)培養(yǎng)基。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基的PH值控制在7.5之間。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基另添加有人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)10ng/mL。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基另外添加4mg/L的大豆胰酶作為酶抑制劑。優(yōu)選的，所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑按照特定體積比或含量混合在人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)之前構(gòu)成人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系。優(yōu)選的，所述人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)為人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系內(nèi)。實(shí)施例三：專(zhuān)利技術(shù)提供一種技術(shù)方案：一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，其特征在于：以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比3.5％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為7.5％，胰島素5mg/L，L-谷氨酰胺，3mM，腐胺，5mg/L，黃體酮12.5ng/mL，葡萄糖，15mM，脂類(lèi)復(fù)合物，3mM，微量元素，3mg/L。優(yōu)選的，所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12(1：1，V/V)基礎(chǔ)培養(yǎng)基。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基的PH值控制在7之間。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基另添加有人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)5.5ng/mL。優(yōu)選的，所述無(wú)血清培養(yǎng)基另外添加3mg/L的大豆胰酶作為酶抑制劑。優(yōu)選的，所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑按照特定體積比或含量混合在人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)之前構(gòu)成人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系。優(yōu)選的，所述人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)為人羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入人羊膜上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系內(nèi)。顯然，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)進(jìn)行各種改動(dòng)和變型而不脫離本專(zhuān)利技術(shù)的精神和范圍。這樣，倘若本專(zhuān)利技術(shù)的這些修改和變型屬于本專(zhuān)利技術(shù)權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本專(zhuān)利技術(shù)也意圖包含這些改動(dòng)和變型在內(nèi)。本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，包括上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，其特征在于：以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％?5％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為5％?10％，胰島素2?10mg/L，L?谷氨酰胺，2?4mM，腐胺，1?10mg/L，黃體酮10?15ng/mL，葡萄糖，5?25mM，脂類(lèi)復(fù)合物，2?4mM，微量元素，1?5mg/L。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，包括上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，其特征在于：以上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積作為基準(zhǔn)，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％-5％，轉(zhuǎn)鐵蛋白，體積比為5％-10％，胰島素2-10mg/L，L-谷氨酰胺，2-4mM，腐胺，1-10mg/L，黃體酮10-15ng/mL，葡萄糖，5-25mM，脂類(lèi)復(fù)合物，2-4mM，微量元素，1-5mg/L。2.如權(quán)利要求1所述的一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，其特征在于：所述上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12(1：1，V/V)基礎(chǔ)培養(yǎng)基。3.如權(quán)利要求1所述的一種人羊膜上皮細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，其特征在于：所述無(wú)血清培養(yǎng)基的PH值控制在6....

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周海軍，吳家波，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：廣州和能生物科技有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：廣東,44