【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于化學合成，具體涉及一種銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖及其合成方法。
技術介紹
1、公開該
技術介紹
部分的信息僅僅旨在增加對本專利技術的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。
2、銅綠假單胞菌(pseudomonas?aeruginosa)是一種革蘭氏陰性桿菌，菌體細長且長短不一，呈球桿狀或線狀，單極端生有鞭毛，無芽孢。該菌具有較強的環境適應性，廣泛存在于自然界、人體皮膚、呼吸道、消化道等，是臨床最常見的條件性致病菌之一(j.mol.biol.,2015,427,3628.；infect.epidemiol.med.,2016,2,25.)。銅綠假單胞菌的流行病學特征突出表現在以下兩個方面(pharmacotherapy,2005,25,1353.；j.crit.care.,2008,23,18.)：
3、第一：院內感染尤其是肺部感染的發病率不斷增加。其引起的肺部感染通常與機械通氣有關，導致了約20％的呼吸機相關性肺炎(vap)，vap是影響最高的院內感染之一，在重癥監護室內最常見，通常需要長期護理和治療，且死亡率較高。
4、第二：對常用抗菌藥物的耐藥率居高不下。由于銅綠假單胞菌外膜滲透率低，其對多種抗生素具有天然耐藥性，此外，該菌極易通過獲得外源性耐藥基因產生新的耐藥表型。
5、脂多糖(lipopolysaccharide,lps)作為銅綠假單胞菌重要的毒力因子之一，主要由脂質a、核心寡糖和o-抗原
6、從天然菌體中提取o-抗原寡糖的純化步驟較為繁瑣復雜，產品結構難以精準控制，同時有被熱源性物質污染的風險，給后續糖疫苗的研發帶來不便。利用化學合成方法制備的寡糖抗原，可避免上述情況的發生。此外，結構均一的合成寡糖抗原便于后續抗原結構的優化和構效關系研究，有利于質量更加可控、療效更佳的新型半合成或全合成糖綴合物疫苗研發。糖類化合物具有結構復雜性和多樣性，其化學合成難度較高。在銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖的合成中，稀有寡糖模塊的高效制備、糖苷鍵的位置選擇性與立體選擇性構建、特定位置官能團的引入與修飾等均是其化學合成的難點。
技術實現思路
1、為了解決現有技術的不足，本專利技術的目的是提供一種銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖及其合成方法。本專利技術通過單糖砌塊之間化學方法偶聯合成銅綠假單胞菌o11血清型的o-抗原三糖，合成砌塊包括利用l-巖藻糖胺、d-巖藻糖胺和d-葡萄糖砌塊，各單糖砌塊之間通過1,2-順式或1,2-反式糖苷鍵連接。首先，單糖砌塊之間通過位置選擇性與立體選擇性糖苷化偶聯組裝三糖骨架，隨后通過官能團修飾和保護基脫除等步驟得到目標三糖。同時，三糖的還原端連接臂末端組裝有自由氨基，為下一步的綴合免疫原性載體做準備。
2、為了實現上述目的，本專利技術是通過如下的技術方案來實現：
3、第一方面，本專利技術提供了一種銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖，具有如式i所示的結構：
4、
5、第二方面，本專利技術提供了一種如第一方面所述的銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖的合成方法，包括以下步驟：
6、
7、s1、化合物7和化合物10在二氯甲烷和乙腈混合溶劑中，以n-碘代丁二酰亞胺和三氟甲磺酸三甲基硅酯為活化劑反應生成化合物11；
8、s2、化合物11在二氯甲烷和水的混合溶液中，利用2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌將對甲氧基芐基進行脫除得到化合物12；
9、s3、化合物12和化合物3在二氯甲烷和乙醚的混合溶劑中，以n-碘代丁二酰亞胺和三氟甲磺酸三甲基硅酯為活化劑，糖苷化反應生成化合物13；
10、s4、在1,3-丙二硫醇和三乙胺的作用下，將化合物13中的疊氮基還原成氨基，隨后利用吡啶和醋酸酐將生成的氨基進行乙酰化得到化合物14；
11、s5、化合物14溶解于二氯甲烷溶液，向其中加入鋅粉和醋酸，將三氯乙氧羰酰基脫除后，將生成中間體溶解于吡啶中，加入醋酸酐生成乙酰氨基，再經氫氧化鈀催化的氫解反應脫除其中的2-萘甲基、芐基和芐氧羰基等保護基，得到具有如式i結構所示的銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖。
12、優選的，步驟s1中，二氯甲烷：乙腈為5:1～15:1(v/v)，反應溫度為-60～-20℃，反應時間為10～40min；
13、步驟s2中，反應溫度為室溫，反應時間為2～4h；
14、步驟s3中，二氯甲烷：乙醚為1:5～5:1(v/v)，反應溫度為-40～0℃，反應時間為20～60min；
15、步驟s4中，將化合物13中的疊氮基還原成氨基的反應溫度為室溫，反應時間為2～6h；乙酰化的溫度為室溫，反應時間為0.5～3.0h；
16、步驟s5中，三氯乙氧羰酰基脫除的反應溫度為室溫，反應時間為2～4h；生成乙酰基的反應溫度為室溫，反應時間為0.5～3.0h；氫解反應的溫度為室溫，時間為36～60h。
17、優選的，還包括化合物3的合成方法，包括以下步驟：
18、
19、s6、化合物1與二丁基氧化錫加入至甲苯中，加熱回流1～3h，冷卻后四丁基溴化銨和2-(溴甲基)萘在55～65℃下反應3～5h，得到化合物2；
20、s7、0℃條件下，化合物2與氫化鈉和溴化芐溶解于dmf中反應2～4h，反應過程中自然升至室溫，得到化合物3。
21、優選的，還包括化合物7的合成方法，包括以下步驟：
22、
23、s8、化合物4與二丁基氧化錫加入至甲苯加熱回流，反應混合物冷卻至室溫并減壓旋干后溶于dmf中，加入氟化銫、4-甲氧基芐氯和四丁基溴化銨反應，得到化合物5；
24、s9、化合物5與氫化鈉和溴化芐溶解于dmf中進行反應，得到化合物6；
25、s10、化合物6溶于吡啶和水的混合溶液與三乙胺和1,3-丙二硫醇反應，反應得到的中間體溶于四氫呋喃和水的混合溶液中與碳酸氫鈉和氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯反應，得到化合物7。
26、進一步優選的，步驟s8中，加熱本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種銅綠假單胞菌O11血清型O-抗原三糖，其特征在于，具有如式I所示的結構：
2.一種如權利要求1所述的銅綠假單胞菌O11血清型O-抗原三糖的合成方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，二氯甲烷：乙腈為5:1～15:1(v/v)，反應溫度為-60～-20℃，反應時間為10～40min；
4.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，還包括化合物3的合成方法，包括以下步驟：
5.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，還包括化合物7的合成方法，包括以下步驟：
6.如權利要求5所述的合成方法，其特征在于，步驟S8中，加熱回流時間為6～10h；加入氟化銫、4-甲氧基芐氯和四丁基溴化銨反應時反應溫度由0℃自然升至室溫，反應時間為8～16h；
7.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，還包括化合物10的合成方法，包括以下步驟：
8.如權利要求7所述的合成方法，其特征在于，步驟S11中，立體糖苷化反應的反應溫度為-10～10℃，時間為5～30min；
9.
10.如權利要求1所述的銅綠假單胞菌O11血清型O-抗原三糖和/或如權利要求9所述的糖綴合物在制備抗銅綠假單胞菌疫苗或治療銅綠假單胞菌感染藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖，其特征在于，具有如式i所示的結構：
2.一種如權利要求1所述的銅綠假單胞菌o11血清型o-抗原三糖的合成方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，二氯甲烷：乙腈為5:1～15:1(v/v)，反應溫度為-60～-20℃，反應時間為10～40min；
4.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，還包括化合物3的合成方法，包括以下步驟：
5.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，還包括化合物7的合成方法，包括以下步驟：
6.如權利要求5所述的合成方法，其特征在于，步驟s8中，加熱回流時...
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