【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體涉及過表達cygb的慢病毒載體在修復工程材料中的應用。
技術介紹
1、脂肪組織是人體最大的內分泌器官，在調節能量平衡和脂質穩態方面起著核心作用，并參與各種生理過程，如保護內臟器官、調節代謝和免疫等；因而，脂肪組織也成為軟組織修復重建的理想材料。目前，脂肪移植在修復術后或外傷性缺損、疤痕治療中被廣泛應用，但依然存在移植物存活率低、技術要求高、不可控并發癥、遠期穩定性差等問題。脂肪組織工程的出現被認為是一種極具潛力的新治療策略，在植入物功能及移植物存活率方面具有較強的可塑性，如何在體內形成與正常脂肪組織相似的組織工程脂肪是有待克服的臨床問題。
2、脂肪組織工程主要由種子細胞、誘導因子和支架構成，脂肪干細胞(adipose-derived?stem?cells，adscs)由于具有優先分化為脂肪細胞的能力，被認為是脂肪組織工程中種子細胞的最優選擇，其優良的自我增殖活性和脂肪生成對于維持組織穩態、促進細胞更新和促進自我修復至關重要。
3、細胞珠蛋白(cytoglobin，cygb)基因是人體固有的保護性蛋白，對機體無毒副作用。細胞珠蛋白最初由kawada等在大鼠hsc中發現，其在硫代乙酰胺脅迫誘導的纖維化肝臟星狀細胞(hsc)中表達明顯增加，因而起初被命名為hsc激活相關蛋白(stellate?cellactivation-associated?protein，stap)。蛋白測序表明它屬于新的一類含血紅素的六配位蛋白(hexacoordinate?globin?super-famil
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于利用過表達cygb的慢病毒載體修飾脂肪干細胞，促進脂肪干細胞增殖及成脂分化，形成組織工程脂肪，作為植入材料修復組織缺損。
2、本專利技術提供一種過表達cygb的慢病毒載體在修復組織缺損的工程材料中的應用。
3、在一種具體的實施方式中，所述組織缺損為皮膚軟組織缺損。
4、在一種具體的實施方式中，所述過表達cygb的慢病毒載體為h-plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-cygb-ha，其中，plvx為慢病毒載體，cygb由cmv啟動子驅動表達，egfp-2a-puro基因由ef1a啟動子驅動表達，且有綠色熒光和嘌呤霉素抗性。
5、在一種具體的實施方式中，所述cygb的序列如seq?id?no.1所示，所述過表達cygb的慢病毒載體的序列如seq?id?no.2所示。
6、在一種具體的實施方式中，所述過表達cygb慢病毒載體的構建方法具體為：利用同源重組將人源cygb連接至plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-mcs慢病毒載體中，構建得到過表達cygb的慢病毒載體。
7、本專利技術還提供一種包含過表達的cygb慢病毒載體的脂肪干細胞在修復組織缺傷的工程材料中的應用。
8、在一種具體的實施方式中，所述過表達cygb的慢病毒載體為h-plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-cygb-ha，其中，plvx為慢病毒載體，cygb由cmv啟動子驅動表達，egfp-2a-puro基因由ef1a啟動子驅動表達，且有綠色熒光和嘌呤霉素抗性。
9、在一種具體的實施方式中，所述cygb的序列如seq?id?no.1所示，所述過表達cygb的慢病毒載體的序列如seq?id?no.2所示。
10、在一種具體的實施方式中，包含過表達cygb慢病毒載體的脂肪干細胞的制備方法，包括以下步驟：
11、步驟(1)、利用同源重組將人源cygb連接至plvx-ef1a-egfp-2a-puro-cmv-mcs慢病毒載體中，構建得到過表達cygb的慢病毒載體；
12、步驟(2)、利用pspax2和pmd2.g對所述過表達cygb的慢病毒載體進行包裝；
13、步驟(3)、利用包裝后的過表達cygb的慢病毒載體轉染脂肪干細胞獲得包含過表達cygb的慢病毒載體的脂肪干細胞。
14、在一種具體的實施方式中，所述步驟(3)中慢病毒轉染復數moi為50。
15、本專利技術的有益效果至少包括：
16、一、本專利技術首次發現adscs成脂分化過程中cygb蛋白顯著上調，這樣，cygb基因過表達修飾的adscs在作為脂肪組織工程種子細胞中有應用潛力。
17、二、本專利技術利用過表達cygb的慢病毒載體轉染脂肪干細胞，獲得的包含過表達cygb的慢病毒載體的脂肪干細胞能夠促進脂肪干細胞增殖及成脂分化，這樣，一方面，包含過表達cygb的慢病毒載體的脂肪干細胞能夠形成組織工程脂肪，作為植入材料填充至組織缺損的部位，對組織缺損進行修復，另一方面還可以為脂肪組織工程種子細胞功能的優化提供參考依據。
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1.一種過表達CYGB的慢病毒載體在修復組織缺損的工程材料中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述組織缺損為皮膚軟組織缺損。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述過表達CYGB的慢病毒載體為H-pLVX-EF1a-EGFP-2A-PURO-CMV-CYGB-HA，其中，pLVX為慢病毒載體，CYGB由CMV啟動子驅動表達，EGFP-2A-PURO基因由EF1a啟動子驅動表達，且有綠色熒光和嘌呤霉素抗性。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述CYGB的序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述過表達CYGB的慢病毒載體的序列如SEQ?ID?NO.2所示。
5.根據權利要求1至4任一項所述的應用，其特征在于，所述過表達CYGB的慢病毒載體的構建方法具體為：利用同源重組將人源CYGB連接至pLVX-EF1a-EGFP-2A-PURO-CMV-MCS慢病毒載體中，構建得到過表達CYGB的慢病毒載體。
6.一種包含過表達CYGB的慢病毒載體的脂肪干細胞在修復組織缺傷的工程材料中的應用。
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