突變型還原酶制造技術

本發明專利技術提供包含這樣的氨基酸序列并且具有良好的熱穩定性的還原酶及其他，在所述氨基酸序列中，野生型還原酶的氨基酸序列中的特定氨基酸被其他特定的氨基酸置換。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及突變型還原酶及其他。
技術介紹
本專利技術涉及修飾的還原酶(其是具有使底物還原的能力的酶)、編碼其的多核苷酸及其應用，所述還原酶可以用于還原反應，尤其是用于α-酮酸的還原反應。還原酶具有使底物還原的能力，并且近年來，其已經用于生產例如用作藥物或農藥的活性成分的化合物、或其中間體、并且特別是光學活性化合物或其中間體的有機合成反應。作為這樣的還原酶，例如，包含SEQ ID NO 1的氨基酸序列且具有使底物還原的能力的酶(野生型還原酶)是已知的(例如，參見ΕΡ1762625Α1)。 這樣的還原酶，在工業上用于生產光學活性化合物或其中間體等，其需要具有下述特性在使用該酶的還原反應中反應產物的光學純度高，該酶對底物的絕對構型具有高識別能力，并且該酶在諸如溫度、pH、溶劑和壓力的各種反應條件下具有高穩定性。特別地，如果還原酶具有針對溫度的高穩定性(即，熱穩定性)，則升高反應溫度將是可能的。因此，高的熱穩定性可以不僅引起反應速率升高而且減少反應過程中還原酶的失活(例如，參見Applied Microbiology Biotechnology,80,805-812(2008))。
技術實現思路
在這樣的情形中，強烈需要研發具有良好的熱穩定性的還原酶以便縮短反應時間并且提聞反應效率。本專利技術提供還原酶，所述還原酶包含在特定的野生型還原酶的氨基酸序列中特定的氨基酸用不同的特定氨基酸置換的氨基酸序列并且具有良好的熱穩定性(即，修飾的還原酶)。具體地，本專利技術提供下述I)至41)。I)酶，所述酶包含除了在SEQ ID NO :I的氨基酸序列中具有一個或多個氨基酸突變之外與SEQ ID NO: I的氨基酸序列等價的氨基酸序列，其中所述一個或多個氨基酸突變包括下述氨基酸突變位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變，或位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；并且所述酶具有使底物還原的能力；2)酶，所述酶包含除了在SEQ ID NO :I的氨基酸序列中具有一個或多個氨基酸突變之外與SEQ ID NO: I的氨基酸序列等價的氨基酸序列，其中所述一個或多個氨基酸突變包括位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變；并且所述酶具有使底物還原的能力(以下在一些情形中還稱為本專利技術的酶I)；3)根據上述2)所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變還包括位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變；4)根據上述2)或3)所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變還包括位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變；5)根據上述2)至4)中任一項所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變還包括位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變；6)根據上述2)至5)中任一項所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變還包括位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；7)根據上述2)所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變選自下述氨基酸突變組I :〈氨基酸突變組I> (1-1)下述兩個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變和(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變；(1-2)下述兩個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變和(b)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變；(1-3)下述兩個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變和(b)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變；(1-4)下述兩個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變和(b)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；(1-5)下述三個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，和(c)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變；(1-6)下述三個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，和(c)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變；(1-7)下述三個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，和(c)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；(1-8)下述三個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，和(c)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變；(1-9)下述三個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，和(c)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；(1-10)下述三個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變，和(c)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；(1-11)下述四個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，(c)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，和(d)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變；(1-12)下述四個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，(c)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，和(d)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；(1-13)下述四個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，(c)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變，和(d)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；(1-14)下述四個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，(c)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變，和(d)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；和 (1-15)下述五個氨基酸突變(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變，(b)位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，(c)位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變，(d)位置42的組氨酸被亮氨酸置換的氨基酸突變，和(e)位置25的蘇氨酸被絲氨酸置換的氨基酸突變；8)包含編碼上述2)至7)中任一項所述的酶的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸(以下在一些情形中還稱為本專利技術的多核苷酸I)；9)酶，所述酶包含除了在SEQ ID NO :I的氨基酸序列中具有一個或多個氨基酸突變之外與SEQ ID NO: I的氨基酸序列等價的氨基酸序列，其中所述一個或多個氨基酸突變包括位置115的纈氨酸被異亮氨酸置換的氨基酸突變，但不包括位置56的甘氨酸被半胱氨酸置換的氨基酸突變；并且所述酶具有使底物還原的能力(以下在一些情形中還稱為本專利技術的酶2)；10)根據上述9)所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變還包括位置27的色氨酸被精氨酸置換的氨基酸突變；11)根據上述9)或10)所述的酶，其中所述一個或多個氨基酸突變還包括位置42的組氨酸被本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：朝子弘之，
申請(專利權)人：住友化學株式會社，
類型：
國別省市：