鐵蛋白體外診斷試紙條制造技術

本實用新型專利技術公開了一種鐵蛋白體外診斷試紙條，屬于醫學免疫體外診斷領域。該診斷試紙條由底襯上包被相互平行的檢測線和質控線的硝酸纖維膜、包被熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物的結合墊、樣品墊、吸水紙組成，檢測線上包被鐵蛋白抗體，質控線上包被兔抗鼠IgG抗體。本實用新型專利技術實現了定量檢測，同時操作方便、檢測速度快。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

鐵蛋白體外診斷試紙條
本技術屬于醫學免疫體外診斷領域，具體涉及一種鐵蛋白體外診斷試紙條。技術背景鐵蛋白是一種水溶性鐵貯存蛋白，由蛋白質外殼即去鐵蛋白和鐵核心形成的復合物。正常人血清中含有少量鐵蛋白，一般正常均值男性約80 — 130 μ g/L (80 -130ng/ml) 女性約35 - 55 μ g/L (35-55ng/ml)。當人機體出現疾病時，血清中的鐵蛋白將會異常改變。研究表明血清鐵蛋白升高的原因是鐵蛋白的來源增加或存在清除障礙。它可以作為肝癌、肺癌、胰癌、白血病等疾病診斷的標志物。20世紀70年代已經開始對鐵蛋白進行檢測。目前，鐵蛋白作為標志物已經用于疾病診斷，主要的診斷方法有膠體金法、酶聯免疫ELISA、化學發光法。中國專利 CN201348633Y采用免疫層析膠體金技術，通過肉眼觀察檢測線的有無來對鐵蛋白濃度進行半定量檢測，達不到定量檢測要求。中國專利CN201302571Y結合了 ELISA進行檢測，利用磁力檢測儀15_25min測定數據，然后根據預先測定并設定的公式計算出樣品中鐵蛋白的含量，可實現鐵蛋白的定量檢測，但是該試劑盒檢測時間長，不利于臨床推廣。
技術實現思路
本技術的目的是提供一種操作簡便、靈敏度高、檢測時間短且能定量檢測鐵蛋白體外診斷試紙條。本技術的技術方案為一種鐵蛋白體外診斷試紙條由底襯上的包被相互平行的檢測線和質控線的硝酸纖維膜、包被熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物的結合墊、樣品墊、吸水紙組成，檢測線上包被鐵蛋白抗體，質控線上包被兔抗鼠IgG抗體。所述的熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物由鐵蛋白、生物素、熒光、鏈霉親和素、膠乳微球組成。所述的膠乳微球粒徑為100nm-200nm,優選192nm。所述的熒光為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、熒光素 Cy5、藻紅蛋白中的一種。所述的鐵蛋白體外診斷試紙條標記和包被用的抗體均為抗人血清鐵蛋白抗體，為配對的單克隆抗體或單抗-多抗。一種鐵蛋白體外診斷試紙條的制備方法包括如下步驟I)包被熒光膠乳微球標記鐵蛋白抗體結合墊的制備a.將熒光素與鏈霉親和素混合得到熒光素標記鏈霉親和素，再與膠乳微球結合得到鏈霉親和素熒光膠乳微球；b.將生物素與鐵蛋白抗體結合，制備得到生物素化鐵蛋白抗體；c.將步驟a所得的鏈霉親和素熒光膠乳微球和步驟b所得的生物素化鐵蛋白抗體混合，即得熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物；d.將步驟c所得的熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物噴涂在結合墊上。2)硝酸纖維素膜的制備用包被緩沖液分別稀釋鐵蛋白抗體和兔抗鼠IgG抗體，并將稀釋后的兩種抗體分別噴于硝酸纖維素膜上，兩種抗體滲入硝酸纖維素膜后分別形成包被鐵蛋白抗體的檢測線和包被兔抗鼠IgG抗體的質控線。3)在底襯上順次相互搭接地粘貼樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙得到試紙板，按照要求切割成適當寬度的試紙條。本技術與現有技術相比，具有如下優點I)本技術通過對試紙條上熒光信號的強弱分析，并結合熒光免疫分析儀的處理分析，可以實現樣品中鐵蛋白的定量檢測；2)本技術可批量生產，適用于臨床快速診斷和現場快速檢測，檢測時間只需 5-8min,易于保存和在基層醫院的推廣使用。附圖說明圖I為本技術所述的鐵蛋白體外診斷試紙條結構示意圖；其中，圖I :1、底襯；2、硝酸纖維素膜；3、結合墊；4、樣品墊；5、吸水紙；6、檢測線； 7、質控線。具體實施方式以下結合附圖和具體實施例來詳細說明本技術。一種鐵蛋白體外診斷試紙條由底襯I上的包被相互平行的檢測線6和質控線7的硝酸纖維膜2、包被熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物的結合墊3、樣品墊4、吸水紙5組成，檢測線6上包被鐵蛋白抗體，質控線7上包被兔抗鼠IgG抗體。所述的熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物由鐵蛋白、生物素、熒光、鏈霉親和素、膠乳微球組成。所述的膠乳微球粒徑為100nm-200nm,優選192nm。所述的熒光標記為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、熒光素Cy5、藻紅蛋白中的一種。所述的鐵蛋白體外診斷試紙條標記和包被用的抗體均為抗人血清鐵蛋白抗體，為配對的單克隆抗體或單抗-多抗。一種鐵蛋白體外診斷試紙條的制備方法包括如下步驟包被熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物的結合墊3的制備方法如下I)將熒光素與鏈霉親和素按照4:1 3:1的比例混合得到熒光素標記鏈霉親和素，再將其與20 mg/ml的膠乳微球按照4:1 3:1的比例混合得到特殊的熒光膠乳微球；2)將鐵蛋白抗體用O. I mol/L、pH6. 4磷酸鈉緩沖液稀釋至I mg/ml,交互用O. I mol/L、pH6. 4磷酸鈉緩沖液對鐵蛋白抗體充分透析；用Iml DMSO溶解Img的NHSB，得到 NHSB溶液；向上述Iml鐵蛋白抗體溶液加入20 μ L NHSB溶液，室溫攪拌2_4 h，繼續室溫攪拌10 min，然后用20 mmol/L、pH7. 2 PBS緩沖液透析，即得生物素化鐵蛋白抗體；3)將熒光膠乳微球和生物素化鐵蛋白抗體混合反應30 min后離心，沉淀用pH7. 2體積，得到所述的熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物；4)將所述的熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物按2. O μ L/cm3的用量噴在玻璃纖維素膜上得到結合墊3。硝酸纖維素膜2的制備I)鐵蛋白抗體檢測線6的制備將鐵蛋白抗體按2 mg/ml的濃度，蠕動泵授液量O.4 ml/min,劃線速度50 m/20min,在干燥箱內20。(!'鼓風干燥12 h ；2)質控線7的制備將兔抗鼠IgG抗體按8 mg/ml的濃度，蠕動泵授液量O. 4 ml/ min,劃線速度50 m/20min,在硝酸纖維素膜2上劃線，該線與檢測線平行，放入干燥箱內20 °〇鼓風干燥12 h ；3)用將含1%BSA、1%蔗糖、O. 025 mol/L、pH7. 5的PBS封閉液將含有檢測線6和質控線7的硝酸纖維素膜2于37 °C封閉60 min，取出后置37 °C下烘干處理2 h，封袋備用。試紙條組裝在底襯I上順次相互搭接地粘貼樣品墊4、結合墊3、硝酸纖維素膜2、吸水紙5，按照要求切割成適當寬度的試紙條。檢測方法為將被檢測血清、全血滴加80-100 μ L于樣品墊4上，進行免疫反應， 時間5-8 min ;反應結束后，將試紙條放于專門的熒光信號讀取儀器(熒光免疫分析儀)中， 讀取熒光信號的大小，進行定量測定，讀出血清鐵蛋白的含量。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種鐵蛋白體外診斷試紙條，其特征在于由底襯（1）上包被相互平行的檢測線（6）和質控線（7）的硝酸纖維膜（2）、包被熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物的結合墊（3）、樣品墊（4）、吸水紙（5）組成，檢測線（6）上包被鐵蛋白抗體，質控線（7）上包被兔抗鼠IgG抗體。

【技術特征摘要】
1.一種鐵蛋白體外診斷試紙條，其特征在于由底襯(I)上包被相互平行的檢測線(6)和質控線(7)的硝酸纖維膜(2)、包被熒光標記的鐵蛋白抗體偶聯物的結合墊(3)、樣品墊(4 )、吸水紙(5 )組成，檢測線(6 )上包被鐵蛋白抗體，質控...

【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇恩本，顏彬，黃力，陳偉，沈小娟，
申請(專利權)人：南京基蛋生物科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：