本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種醉魂藤外植體滅菌接種方法，包括如下步驟：（1）剪取醉魂藤休眠枝或當(dāng)年生新梢莖段；（2）用消毒劑消毒；（3）再用滅菌劑滅菌；（4）滅菌后立即用無(wú)菌水清洗3次；（5）在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是：使用上述外植體滅菌方法，提高了存活率和萌芽率達(dá)，同時(shí)降低了污染率。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于植物外植體滅菌接種領(lǐng)域，特別是醉魂藤外植體滅菌接種
技術(shù)介紹
醉魂藤，拉丁名Heterostemma alatum Wight,為蘿蘑科醉魂藤屬的植物。分布于印度、尼泊爾以及中國(guó)大陸的云南、貴州、廣西、廣東、四川等地，生長(zhǎng)于海拔1，200米的地區(qū)，常生于山谷水旁林中蔭濕處，目前尚未由人工引種栽培。醉魂藤可入藥，其根可治療風(fēng)濕。現(xiàn)已運(yùn)用多種色譜技術(shù)從云南產(chǎn)醉魂藤Heterostemma alatum wight中分離得到10個(gè)化合物。通過(guò)理化鑒別和波譜數(shù)據(jù)確定了他們的化合物結(jié)構(gòu)分別為￠-谷留醇(I)、正二十四烷酸(2)、芹菜素(3)、胡蘿卜苷(4)、芹菜素-7-0-0-D-葡萄糖苷(5)、醉魂藤堿A (6)、醉魂藤堿B (7)、醉魂藤堿C (8)、醉魂藤堿D (9)和醉魂藤堿F (10)。因此利用組培技術(shù) 大量繁殖該植物育有重要的生物和醫(yī)學(xué)意義。醉魂藤外植體滅菌以往先用自來(lái)水清洗，再用70%酒精漂洗，然后用3%安替福民溶液浸泡30分鐘，用無(wú)菌水沖洗3次，用無(wú)菌紙吸干后進(jìn)行接種。由于醉魂藤外植體莖干較細(xì)弱，傳統(tǒng)滅菌方法使外植體死亡率和污染率較高，因此找到合適的消毒藥劑和合適的消毒時(shí)間是完善醉魂藤組培快繁的必要舉措。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供一種更加適合醉魂藤外植體滅菌的方法。實(shí)現(xiàn)上述目的采用下述技術(shù)方案一種，包括如下步驟(I)剪取醉魂藤休眠枝或當(dāng)年生新梢莖段；(2)用消毒劑消毒；( 3 )再用滅菌劑滅菌；(4)滅菌后立即用無(wú)菌水清洗3次；(5)在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)。進(jìn)一步，所述的消毒劑為70%酒精，消毒時(shí)間為5-lOs。進(jìn)一步，所述的滅菌劑為0. 1%升汞，滅菌時(shí)間為10_20min。進(jìn)一步，所述的培養(yǎng)基是1/2MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件是光照強(qiáng)度2000LX，溫度26°C，光照時(shí)間14h/d。1/2MS培養(yǎng)基是購(gòu)自上海士鋒生物科技有限公司的，與MS培養(yǎng)基相比，大量元素減半，微量元素和維生素的成分不變。本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是使用上述外植體滅菌方法，提高了存活率和萌芽率達(dá)，同時(shí)降低了污染率。具體實(shí)施方式實(shí)施例1休眠枝對(duì)照組消毒藥劑及其用法70%酒精，3%安替福民。酒精浸泡35s后，在安替福民溶液中的休眠枝浸泡時(shí)間為30min。經(jīng)過(guò)安替福民消毒過(guò)的休眠枝，在休眠枝消毒后均立即用無(wú)菌水清洗3次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于1/2MS培養(yǎng)基上。休眠枝實(shí)驗(yàn)組消毒藥劑及其用法酒精中浸泡35s，在升汞溶液中的休眠枝浸泡時(shí)間分為15min，在休眠枝消毒后均立即用無(wú)菌水清洗3次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于1/2MS培養(yǎng)基上。實(shí)驗(yàn)材料及方法將醉魂藤莖段接種后，均放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000LX，溫度 26°C，光照時(shí)間14h/d。培養(yǎng)2周后觀察接種莖段的污染率和萌芽率等指標(biāo)，其中污染率=受污染莖段數(shù)/接種莖段數(shù)X 100%，萌芽率=萌芽的未受污染莖段數(shù)/未受污染莖段X 100%。在該組4000株莖段中，2000株使用安替福民溶液滅菌30min的污染率為69%，而剩余2000株使用升汞溶液滅菌15min的污染率為30%，活率達(dá)70%，萌芽率達(dá)65%。 實(shí)施例2 當(dāng)年生新梢對(duì)照組消毒藥劑及其用法70%酒精，3%安替福民。酒精浸泡IOs后，在安替福民溶液中的當(dāng)年生新梢浸泡時(shí)間為20min。經(jīng)過(guò)安替福民消毒過(guò)的當(dāng)年生新梢，在當(dāng)年生新梢消毒后均立即用無(wú)菌水清洗3次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于1/2MS培養(yǎng)基上。當(dāng)年生新梢實(shí)驗(yàn)組消毒藥劑及其用法酒精中浸泡10s，在升汞溶液中的當(dāng)年生新梢浸泡時(shí)間為lOmin，在當(dāng)年生新梢消毒后均立即用無(wú)菌水清洗3次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于1/2MS培養(yǎng)基上。實(shí)驗(yàn)材料及方法將醉魂藤當(dāng)年生新梢莖段接種后，均放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度 2000Lx，溫度26°C，光照時(shí)間14h/d。培養(yǎng)2周后觀察接種莖段的污染率和萌芽率等指標(biāo)， 其中污染率=受污染莖段數(shù)/接種莖段數(shù)X 100%,萌芽率=萌芽的未受污染莖段數(shù)/未受污染莖段X 100%。在該組4000株莖段中，2000株使用安替福民溶液滅菌20min的污染率為70%，而剩余2000株使用升汞溶液滅菌IOmin的污染率為15%，存活率達(dá)85%，萌芽率達(dá)80%。實(shí)施例3休眠枝對(duì)照組消毒藥劑及其用法70%酒精，3%安替福民。酒精浸泡35s后，在安替福民溶液中的休眠枝浸泡時(shí)間為30min。經(jīng)過(guò)安替福民消毒過(guò)的休眠枝，在休眠枝消毒后均立即用無(wú)菌水清洗3次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于1/2MS培養(yǎng)基上。休眠枝實(shí)驗(yàn)組消毒藥劑及其用法酒精中浸泡40s，在升汞溶液中的休眠枝浸泡時(shí)間分為20min，在休眠枝消毒后均立即用無(wú)菌水清洗3次，在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于1/2MS培養(yǎng)基上。實(shí)驗(yàn)材料及方法將醉魂藤莖段接種后，均放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000LX，溫度 26°C，光照時(shí)間14h/d。培養(yǎng)2周后觀察接種莖段的污染率和萌芽率等指標(biāo)，其中污染率=受污染莖段數(shù)/接種莖段數(shù)X 100%，萌芽率=萌芽的未受污染莖段數(shù)/未受污染莖段X 100%。在該組4000株莖段中，2000株使用安替福民溶液滅菌30min的污染率為69%，而 剩余2000株使用升汞溶液滅菌15min的污染率為20%，存活率達(dá)80%，萌芽率達(dá)75%。權(quán)利要求1.一種，包括如下步驟(1)剪取醉魂藤休眠枝或當(dāng)年生新梢莖段；(2)用消毒劑消毒；(3)再用滅菌劑滅菌；(4)滅菌后立即用無(wú)菌水清洗3次；(5)在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)。2.如權(quán)利要求1所述的，其特征在于，所述的消毒劑為70% 酒精，消毒時(shí)間為30-40S。3.如權(quán)利要求1所述的，其特征在于，所述的滅菌劑為O.1%升汞，滅菌時(shí)間為10-20min。4.如權(quán)利要求1所述的，其特征在于，所述的培養(yǎng)基是 1/2MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件是光照強(qiáng)度2000Lx，溫度26°C，光照時(shí)間14h/d。全文摘要本專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種，包括如下步驟(1)剪取醉魂藤休眠枝或當(dāng)年生新梢莖段；(2)用消毒劑消毒；(3)再用滅菌劑滅菌；(4)滅菌后立即用無(wú)菌水清洗3次；(5)在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)。本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是使用上述外植體滅菌方法，提高了存活率和萌芽率達(dá)，同時(shí)降低了污染率。文檔編號(hào)A01H4/00GK102986531SQ20121049160公開(kāi)日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月27日專(zhuān)利技術(shù)者楊鐵順, 趙亮, 柯盛發(fā), 郭笑非, 劉青, 吳建平, 閔宇 申請(qǐng)人:天津?yàn)I海國(guó)際花卉科技園區(qū)股份有限公司本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種醉魂藤外植體滅菌接種方法，包括如下步驟：（1）剪取醉魂藤休眠枝或當(dāng)年生新梢莖段；（2）用消毒劑消毒；（3）再用滅菌劑滅菌；（4）滅菌后立即用無(wú)菌水清洗3次；（5）在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切取外植體莖段接種于培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)。
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊鐵順，趙亮，柯盛發(fā)，郭笑非，劉青，吳建平，閔宇，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：天津?yàn)I海國(guó)際花卉科技園區(qū)股份有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒(méi)有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。