本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種降解臍橙囊衣微生物、含有其的酶制劑及應用。其中，該微生物的保藏名稱為黑曲霉C-2（Aspergillus?sp.C-2），保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO:M?2012160。采用本發(fā)明專利技術(shù)的微生物降解臍橙囊衣的微生物制備的酶制劑不涉及酸堿的大量使用，通過生物酶解作用進行臍橙囊衣的脫除，因此可大大提升生產(chǎn)效率、減少臍橙果破碎率、使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，并且能夠降低生產(chǎn)成本，無殘留、綠色環(huán)保、安全性高、不污染環(huán)境。該酶制劑的使用簡單便捷，對臍橙囊衣作用高效、完全，分解徹底，且不損傷內(nèi)部橙汁胞。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物工程
，具體而言，涉及一種降解臍橙囊衣微生物、含有其的酶制劑及應用。
技術(shù)介紹
我國柑橘加工長期沿襲著人工剝皮和酸堿脫囊衣等傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)。現(xiàn)有酸堿法脫囊衣的酸堿處理法主要有經(jīng)典酸堿二步法、改良重酸二步法、磷酸鹽NaOH —步法，以及EDTA或Na2-EDTA (乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二鈉)為助 劑的低堿去囊衣法。人工去皮和酸堿脫囊衣工藝存在勞動密集、生產(chǎn)效率低、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定等問題。目前工業(yè)化罐頭生產(chǎn)脫囊衣耗水量大，每噸產(chǎn)品耗水量達6(T80噸，不僅增加產(chǎn)品成本，而且加劇了飲用水資源的短缺。同時，因大量使用堿，產(chǎn)生大量的工業(yè)堿液廢水，增加了產(chǎn)品的生產(chǎn)成本，也污染環(huán)境，影響了產(chǎn)品的安全性，容易遭遇技術(shù)壁壘和綠色壁壘，削弱了我國柑橘罐頭工業(yè)在國際市場的競爭優(yōu)勢。同時，在柑橘加工生產(chǎn)中產(chǎn)生了約占柑橘加工量30%左右的皮渣，通常都被丟棄掉，不僅造成資源浪費，也給環(huán)境帶來了污染。臍橙加工中脫囊衣工藝是其主要技術(shù)難點之一。目前橙汁胞的生產(chǎn)技術(shù)主要采用傳統(tǒng)柑橘罐頭酸堿處理的工藝，存在人工剝皮、分瓣，生產(chǎn)效率低的問題；酸堿囊衣用水量大，環(huán)境污染嚴重，產(chǎn)品安全性低；由于柑橘皮與臍橙皮結(jié)構(gòu)的差異，導致現(xiàn)有的柑橘酶法去囊衣技術(shù)不適合于臍橙橙汁胞的加工。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)旨在提供一種降解臍橙囊衣微生物、含有其的酶制劑及應用，以解決現(xiàn)有技術(shù)中酸堿脫臍橙囊衣工藝生產(chǎn)效率低、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定并且存在環(huán)境及食品安全的技術(shù)問題。根據(jù)本專利技術(shù)的一個方面，提供一種降解臍橙囊衣微生物。該微生物的保藏名稱為黑曲霉C-2 (Aspergillus sp. C_2)，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCN0:M2012160o根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，提供一種降解臍橙囊衣微生物在制備降解臍橙囊衣酶制劑中的應用。根據(jù)本專利技術(shù)的再一個方面，提供一種降解臍橙囊衣酶制劑。該降解臍橙囊衣酶制劑采用上述降解臍橙囊衣微生物制得。進一步地，采用降解臍橙囊衣微生物經(jīng)菌種發(fā)酵培養(yǎng)、液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)制得。進一步地，液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)之前進一步包括活化、制備孢子懸浮液、種子培養(yǎng)的步驟。進一步地，該酶制劑包括將酶制劑經(jīng)過超濾、濃縮制得濃縮酶制劑，或?qū)⒚钢苿┲苽涑煞蹌┗蝾w粒劑。根據(jù)本專利技術(shù)的又一個方面，提供一種上述降解臍橙囊衣酶制劑在臍橙、柑橘脫囊衣上的應用。進一步地，包括以下步驟將酶制劑稀釋到酶活為8 X IO3 10 X 103u/g :將稀釋后的酶制劑與削皮臍橙以質(zhì)量比為3 1的比例混合，45 50°C保溫9(Tl20min傳統(tǒng)酸堿脫囊衣工藝存在重金屬殘留等不安全因素，而采用本專利技術(shù)的降解臍橙囊衣的微生物制備的酶制劑不涉及酸堿的大量使用，通過生物酶解作用進行臍橙囊衣的脫除，因此可大大提升生產(chǎn)效率、減少臍橙果破碎率、使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，并且能夠降低生產(chǎn)成本，無殘留、綠色環(huán)保、安全性高、不污染環(huán)境。該酶制劑的使用簡單便捷，對臍橙囊衣作用高效、完全，分解徹底，且不損傷內(nèi)部橙汁胞。降解臍橙囊衣酶制劑發(fā)酵產(chǎn)酶工藝簡單，并且能夠達到節(jié)能降耗、節(jié)約用水、保護環(huán)境、清潔生產(chǎn)的目標。具體實施例方式需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相 互組合。下面將結(jié)合實施例來詳細說明本專利技術(shù)。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，提供一種降解臍橙囊衣微生物。該微生物的保藏名稱為黑曲霉C-2(Aspergillus sp. C-2)，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC N0:M 2012160，保藏日為2012年5月7日。本專利技術(shù)的降解臍橙囊衣微生物是通過以下步驟篩選獲得的從腐爛臍橙表面、土壤等樣品中篩選目標菌株，然后經(jīng)過紫外誘變后，通過反復的篩選獲得對臍橙囊衣具有高效降解作用的菌株。本專利技術(shù)的準用菌株經(jīng)鑒定為黑曲霉C-2 (Aspergillus sp.C-2)，其主要生物學特征為在固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3d 5d，菌落蔓延迅速，初為白色，后變成褐色直至黑色厚絨狀，背面無色或中央略帶黃褐色。分生孢子頭褐黑色放射狀，分生孢子梗長短不一。頂囊球形，雙層小梗。分生孢子褐色球形。頂部形成球形頂囊，其上全面覆蓋一層梗基和一層小梗，小梗上長有成串褐黑色的球狀，直徑2. 5 4.0 Pm。分生孢子頭球狀，直徑700 800 ym，褐黑色。分生孢子頭褐黑色放射狀，分生孢子梗長短不一。分生孢子梗自基質(zhì)中伸出長約I 3mm,壁厚而光滑。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，提供一種降解臍橙囊衣酶制劑。該酶制劑采用上述降解臍橙囊衣微生物制得。由于該降解臍橙囊衣酶制劑不涉及酸堿的大量使用，通過生物酶解作用進行臍橙囊衣的脫除，因此可大大提升生產(chǎn)效率、減少臍橙果破碎率、使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，并且能夠降低生產(chǎn)成本，無殘留、綠色環(huán)保、安全性高、不污染環(huán)境。優(yōu)選地，該酶制劑采用上述降解臍橙囊衣微生物經(jīng)液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)制得。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，提供一種降解臍橙囊衣酶制劑的制備方法。該制備方法包括采用上述黑曲霉C-2作為發(fā)酵菌株，經(jīng)過液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)制備得到降解臍橙囊衣酶制劑。在臍橙囊衣的脫除過程中起主要作用的是該黑曲霉C-2及其代謝物，因為此制備也可以采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)方法進行，優(yōu)選地，黑曲霉C-2經(jīng)過液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)制備得到降解臍橙囊衣酶制劑，因為這些酶制劑的制備方法簡單，便于工業(yè)化生產(chǎn)，而且不會造成環(huán)境污染。優(yōu)選地，液體深層發(fā)酵或固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)之前進一步包括活化、制備孢子懸浮液、種子培養(yǎng)的步驟，增加這些步驟可以使菌株的活性增強，有利于酶制劑的生產(chǎn)效率提高，以及在后續(xù)使用過程中使酶制劑保持較高的活性。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，活化包括將黑曲霉C-2接種于培養(yǎng)基中進行活化，培養(yǎng)基的PH值為7. 0 7. 2，活化溫度控制在28°C 30°C，活化時間為I 2天。冷凍保藏的產(chǎn)酶黑曲霉C-2菌種細胞通過該活化程序，可使該微生物產(chǎn)酶的能力快速恢復正常。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，種子培養(yǎng)包括將活化的孢子懸浮液接種于種子液體培養(yǎng)基中，控制種子液體培養(yǎng)基的PH值為7. 0 7. 2，培養(yǎng)溫度控制在28°C 30°C，200r/m培養(yǎng)12 16h，最終獲取一定數(shù)量和質(zhì)量的純種子，可作為大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)的菌種。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，液體深層發(fā)酵培養(yǎng)包括將經(jīng)過種子培養(yǎng)的含黑曲霉C-2的種子液體培養(yǎng)基接種于發(fā)酵瓶中進行深層發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為12h內(nèi)溫度為30°C，12h 后 28°C ；pH 值為 7. 0 7. 2 ;壓力位 0. 06MPa 0. 08MPa ;攪拌速度 12h 內(nèi) 180r/m, 12h后200r/m ;通氣量1:1. 0 1. 5 ;發(fā)酵時間108 120h，制得酶制劑。通過液體深層發(fā)酵能夠保證養(yǎng)分均勻分配和氧氣充足，具有發(fā)酵產(chǎn)酶生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、效益大等優(yōu)點。根據(jù)本專利技術(shù)一種典型的實施方式，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的步驟包括經(jīng)過所述種子培養(yǎng)的含黑曲霉C-2的所述種子固體培養(yǎng)基接種入固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)108h，得到黑曲霉C-2固態(tài)發(fā)酵曲，所述固態(tài)發(fā)酵曲通過低溫干燥及粉碎后制得所述酶制劑，或通過0. 5mol/L pH=6. 5磷酸緩沖液中浸提獲得所述酶制劑。固態(tài)發(fā)酵模擬菌種自然生長環(huán)境，使微本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種降解臍橙囊衣微生物，其特征在于，所述微生物的保藏名稱為黑曲霉C?2，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCNO:M?2012160。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙良忠，尹樂斌，李文，伍桃英，肖凱，郭育齊，周小虎，蔣瓊?cè)A，周曉潔，
申請(專利權(quán))人：湖南李文食品有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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