本發明專利技術提供了一種產輔酶Q10新菌株——彭氏變形桿菌CA8及其在微生物發酵制備輔酶Q10中的應用。該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，430072，保藏編號：CCTCCNo：M?2012208，保藏日期：2012年6月10日。本發明專利技術的有益效果主要體現在：提供了一株新的輔酶Q10產生菌，利用該菌株微生物發酵制備輔酶Q10，產量高，且后續提取方法簡單，利于工業化生產。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一株產輔酶Qltl新菌株一彭氏變形桿菌CA8及其在微生物發酵制備輔酶Qltl中的應用，屬于微生物制藥領域。
技術介紹
輔酶Qki (CoenzymeQic^C0Qici)廣泛存在于動物、植物及微生物體內，是生物細胞呼吸鏈中重要的遞氫體，也是一種良好的生化藥物。它具有抗氧化性、消除自由基、提高機體免疫力等功能，已廣泛應用于各類心臟病、糖尿病、癌癥、急慢性肝炎、帕金森癥等疾病的治療。制備輔酶Qltl的方法主要有動物細胞提取法、煙葉茄尼醇半合成法、完全合成法、微生物發酵法或植物細胞培養法。與其他方法相比，微生物發酵法具有產物活性高、原料成本低、易控制及可實現大規模生產等特點。獲得優良的發酵菌株是微生物發酵法生產輔酶Qltl的 關鍵之一。目前已報道的輔酶Qltl發酵菌株主要屬于假單孢菌屬、酵母菌屬、光合細菌屬以及副球菌屬等。發酵菌體提取輔酶Qltl方法多為醇堿皂化后提取方法，步驟煩瑣，費時費力，且提取溶劑損耗較大。
技術實現思路
本專利技術的目的是為了提供一株產輔酶Qltl產量較佳的新菌株，以及利用該菌種發酵液制備輔酶Qltl的方法。本專利技術采用的技術方案是一株輔酶Qltl產生菌-彭氏變形桿菌(Proteus penneri ) CA8,保藏于中國典型培養物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學，430072，保藏編號CCTCC No :M2012208，保藏日期2012年6月10日。所述彭氏變形桿菌CA8特征如下菌株在LB瓊脂平板上培養I天后呈半透明潤澤，較小，圓形，表面光滑，易挑起；菌體呈桿狀，大小為(O. 4 1.0) μ mX (O. 8 1.8)μπι，具周身鞭毛，能運動，革蘭氏染色陰性，無芽孢；兼性厭氧，苯丙氨酸試驗呈陽性，氧化酶反應、明膠水解試驗、吲哚試驗、檸檬酸試驗、V-P反應呈陰性，利用葡萄糖、乳糖等產酸，不利用水楊苷，最適宜生長溫度為37°C。本專利技術的CA8菌株，分離自嘻麥隆Ebolowa 土壤，經形態學、生理生化、BiologGENIII鑒定和16S rRNA序列的系統發育分析，發現該菌株屬于彭氏變形桿菌，命名為Proteus penneri CA8。目前國內外尚未見到有關變形桿菌應用于在輔酶Qltl生產的研究報道。本專利技術發酵菌體的超聲破碎和提取輔酶Qltl的工藝同樣未見報道。本專利技術還涉及所述的彭氏變形桿菌CA8在微生物發酵制備輔酶Qltl中的應用。所述應用為以彭氏變形桿菌CA8接種于適用于彭氏變形桿菌的液體培養基，于3(T37°C下培養48飛Oh，所得發酵液離心收集濕菌體，濕菌體經破碎提取得到所述的輔酶Qio。所述適用于彭氏變形桿菌的液體培養基為常規適用于彭氏變形桿菌的液體培養基，本專利技術中可按如下組成配制碳源l(T20g、氮源5 15g、KH2PO4 O. 5g、Na2HPO41. 5g、MgSO4 O. 5g,水 1000ml, pH6. 0 8. 0。所述碳源為常規用于培養基配制的碳源，如葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖等，優選為乳糖。所述氮源為常規用于培養基配制的碳源，如酵母膏、硫酸銨等，優選為酵母膏。更為優選的，所述適用于彭氏變形桿菌的液體培養基按如下組成配制加入乳糖40g、酵母膏 40g、KH2PO4 O. 5g、Na2HPO41. 5g、MgSO4O. 5g，水 1000ml，ρΗ8· 0。優選的，所述破碎提取為超聲破碎提取，方法如下將濕菌體移入離心管內，加入足量乙醇，混勻，30(T500W超聲處理8 IOmin后，離心，過濾，于濾液中得到所述輔酶Q1(1。 本專利技術的有益效果主要體現在提供了一株新的輔酶Qltl產生菌，利用該菌株微生物發酵制備輔酶Qltl,產量高，且后續提取方法簡單，利于工業化生產。附圖說明圖1為彭氏變形桿菌(Proteus penneri) CA8的電鏡圖(X 30000)；圖2為不同碳源對CA8輔酶Qltl產量的影響；圖3為不同氮源對CA8輔酶Qltl產量的影響；圖4為乳糖濃度對CA8輔酶Qltl產量的影響；圖5為酵母膏濃度對CA8輔酶Qltl產量的影響；圖6為溫度對輔酶Qltl產量的影響；圖7為裝液量對輔酶Qltl產量的影響；圖8為初始pH值對輔酶Qltl產量的影響。具體實施例方式下面結合具體實施例對本專利技術進行進一步描述，但本專利技術的保護范圍并不僅限于此實施例彭氏變形桿菌(Proteus penneri)CA8的分離、鑒定及其發酵產輔酶Qltl特性1、菌株的分離(I)采集樣品采集嘻麥隆Ebolowa 土壤樣品后,取IOg,加無菌水90ml,制成土壤懸浮液。吸取上清液用無菌水稀釋制成10' 10_2、10' 10_4、10_5、10_6不同稀釋度。(2)菌株分離取菌懸液1ml，于選擇性平板上劃線，選擇性培養基按如下組成配制異戊二烯O. 5ml, (NH4)2SO41. 0g, KH2PO4 4. 5g, Na2HPO4 · 12H20 21. 6g,瓊脂 15 20g,水 1000ml,ρΗ7· O。按照微生物純種分離的常規方法，將上述分離培養基于28°C放置2 3d。挑取多個單菌落，接種到斜面培養基上，并編號保存。再在液體培養基中進行發酵性檢驗，結果得到一株輔酶Qltl產量較高的菌株CA8。所用的培養基按如下組成配制葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏 10g，KH2PO4 0. 5g, Na2HPO41. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，水 1000ml，pH7. 0。(如為固體培養基，則再加入20g/L的瓊脂)。2、菌株的鑒定(I)輔酶Qltl生產菌CA8的菌體及菌落形態特征輔酶Qltl生產菌CA8為桿狀，大小為(O. 4 1.0) μ mX (O. 8 1. 8) μ m，革蘭氏染色陰性，無芽孢， 具周身鞭毛，能運動；菌落呈半透明潤澤，較小，圓形，表面光滑，易挑起。(2)輔酶Qltl生產菌CA8的生理生化特征生理生化特征為兼性厭氧，苯丙氨酸試驗呈陽性，氧化酶反應、明膠水解試驗、吲哚試驗、檸檬酸試驗、V-P反應呈陰性，利用葡萄糖、乳糖等產酸，不利用水楊苷。上述菌學特征與文獻(伯杰氏細菌鑒定手冊)編錄的彭氏變形桿菌的生理生化性狀相吻合。結合菌株的16S rRNA序列同源性分析和Biolog系統分析結果，該菌珠鑒定為屬于彭氏變形桿菌的產輔酶Qltl新菌珠。3、產輔酶Qltl性能將彭氏變形桿菌(Proteus penneri ) CA8以5%接種量,接種于500ml裝有IOOml液體培養基(20g 碳源，IOg 蛋白胨，IOg 酵母膏，KH2PO4O. 5g, Na2HPO41. 5g,MgSO4 O. 5g，水補足至1000ml，pH7. O)的搖瓶中，以葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖這幾種常用碳源作為發酵的碳源，考察其對細胞生長總量和輔酶Qltl總量的影響，進行碳源的單因素研究。結果如圖2所示，表明碳源的利用對菌生長量和輔酶Qltl產量影響較不均勻。從菌生長量和輔酶Qltl產量之間的比例關系來看，乳糖為最佳碳源。在此基礎上進行乳糖濃度添加的影響研究，結果如圖4所示，當乳糖添加量為40g/L時輔酶Qltl產量較高。將彭氏變形桿菌(Proteus penneri)CA8以5%接種量,接種于液體培養基(40g乳糖，IOg 氮源，KH2PO4 O本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一株輔酶Q10產生菌——彭氏變形桿菌（Proteus?penneri）CA8，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，430072，保藏編號：CCTCC?No：M2012208，保藏日期：2012年6月10日。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：鐘衛鴻，孔卓怡，柳華貴，鐘莉，邱樂泉，吳石金，
申請(專利權)人：浙江工業大學，
類型：發明
國別省市：
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