一種紫杉醇木糖苷化合物的制備方法技術

本發(fā)明專利技術涉及一種紫杉醇木糖苷化合物的制備方法，該方法是從可再生紅豆杉資源中制備7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物，以高產7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物的可再生紅豆杉如南方紅豆杉（Taxus?Chinesis?var?mairei）的植物或細胞培養(yǎng)物或微生物發(fā)酵物為原料，通過溶劑提取、液液萃取、柱色譜分離、結晶純化等步驟獲得7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物，所得7-木糖10-去乙酰紫杉醇化合物可轉化為抗癌藥物紫杉醇。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術屬于醫(yī)藥工業(yè)領域，具體涉及。
技術介紹
紫杉醇(Paclitaxel,商品名Taxol)和多烯紫杉醇(Taxotere,商品名Docetaxel)因其具有獨特的抗癌機理和廣譜高效的抗癌活性，已成為臨床上最重要的抗癌藥物。目前，國際市場上規(guī)模化生產紫杉醇的途徑主要有:⑴從紅豆杉中直接提取紫杉醇；(2)半合成法一一從紅豆杉植物中提取10-去乙酰巴卡亭IIK簡寫IO-DABIII)，用化學方法半合成紫杉醇、多烯紫杉醇等。世界上紅豆杉資源種類繁多，歐洲有:歐洲紅豆杉a baccata);北美有:太平洋短葉紅豆杉Γ T，bre ri/b Jr ia入佛羅里達紅豆杉Γ fl ori dana入加拿大紅豆杉Γ 5Caaaofefl1Si1S入曼地亞紅豆杉中國有:云南紅豆杉yuimmwnsis)杉(美麗紅豆杉Chinesis rar airei),東北紅豆杉ΓΓ, ciAspii/aie入喜馬拉雅紅豆杉(T，wallichiana)等。 在上述紅豆杉屬植物中，除含紫杉醇外，還共存大量其它有開發(fā)利用價值的紫杉烷:歐洲紅豆杉枝葉中含有豐富的10-DAB III [J.Chromatogr.A 802(1998)]；加拿大紅豆杉中含有的紫杉烷主要有9- 二氫-13-乙酰基-巴卡亭IIK簡寫9-DHB III)、Taxol及10-DAB III等，其中9-DHAB III的含量為Taxol的7 10倍，可作為新一類水溶性更強的半合成化療藥物的前體；中國的南方紅豆杉中富含7-木糖-10-去乙酰紫杉醇(簡寫10-DAXT)，其總量O 0.05%每克干重)是紫杉醇的51倍，該化合物可以通過生物化學方法半合成紫杉醇。目前針對不同種類的紅豆杉資源的開發(fā)利用以及紫杉醇木糖苷化合物的分離純化工藝的研究有以下報道: 專利US5736366和US5453521介紹了從歐洲紅豆杉分離10-DAB III的方法:用水提取枝葉，溶劑萃取或選擇合適的載體(如大孔吸附樹脂)吸附，再解吸，結晶得到IO-DAB III，或者甲醇提取后加水稀釋，結晶得到純度較高的IO-DAB III。專利US5969165和US6469186描述了從加拿大紅豆杉中分離提取9-DHAB II1、Taxol等紫杉烷的方法:甲醇提取物氧化鋁柱分離，溶劑沉淀、結晶，得到高純度9-DHABIII ；母液(含其它紫杉烷)樹脂柱或正相硅膠柱分離，分別得到10-DAB III和巴卡亭IIK簡寫B(tài)accatin III)及紫杉醇和三尖杉寧堿兩部分；10_DAB III和Baccatin III部分再進行一次正相硅膠柱分離，結晶得到高純度的10-DAB IILBaccatin III ;紫杉醇和三尖杉寧堿部分，直接再進行一次反相樹脂柱分離，或經(jīng)過化學反應后再進行反相或正相硅膠柱分離，結晶得到高純度紫杉醇。專利US6136989介紹了從太平洋紅豆杉中分離純化紫杉醇等紫杉烷的方法:甲醇提取物經(jīng)溶劑分配，三次正相硅膠柱分離，一次沉淀，二次結晶得到高純度紫杉醇。專利US5279949 提出了一個從 Ornamental 紫杉(Taxus media Hicksii)中用正相色譜法分離紫杉醇等紫杉烷的過程:70%乙醇萃取物脫色，溶劑沉淀，兩次正相硅膠柱和一次反相色譜分離，結晶得到純度很高的紫杉醇。專利EP1616868中描述了從Taxus media Hicksii中分離紫杉醇的方法:丙酮-水提取物經(jīng)溶劑分配，三次正相硅膠柱和一次氧化鋁柱分離，結晶得到高純度紫杉醇。Senilh等從歐州紅豆杉中分離紫杉烷木糖苷化合物使用了如下步驟:乙醇提取物經(jīng)溶劑分配，三次硅膠柱色譜分離，結晶分別得到10-DAXTUO-DAXCUO-DAXT C和XT、XC, XT, C [J.Nat.Prod.47:131(1984)]。專利US5670673描述了從太平洋紅豆杉中分離純化紫杉烷木糖苷化合物的方法:乙醇提取物經(jīng)溶劑分配，一次反相色譜柱分離和重結晶，分別得到高純度10-DAXT、XT和IO-DAXC。專利US5856532描述了從西藏紅豆杉中分離純化紫杉烷木糖苷化合物的方法:甲醇提取物中加水稀釋，沉淀經(jīng)硅膠柱分離，結晶分別得到10-DAXT，IO-DAXC, 10DAXT, C。陳建民等人提出了從云南紅豆杉中分離純化紫杉烷木糖苷化合物的方法:氯仿提取，硅膠柱分離，結晶得到三種紫杉烷木糖苷化合物(分別是10-DAXT、10-DAXC、10-DAXT，C) [Nat.prod.Res, Vol.20，119-124 (2006)]。 Qing-Wen Shi等人開發(fā)了一種從日本紅豆杉中分離紫杉燒木糖苷化合物的方法，過程包括:甲醇提取，硅膠柱分離，結晶分別得到10-DAXT，IODAXC0 [Can.J.Chem.90:64 74 (2003)]。Chattopadhyay 等人(US 6028206, 2000, EP1028116B1)用高碘酸鹽氧化法將 C-7木糖基轉化為C-7羥基，利 用該方法可將C-7木糖類紫杉醇A，B，AND C轉化為紫杉醇A，B，AND CoHanson等人(US5700669)利用酶水解的方法將C_7糖基紫杉烷轉化為C_7羥基紫杉烷。楊凌等人(專利ZL200710010742.2，ZL200710010739.0)開發(fā)了 10 去乙酰紫杉醇ClO乙酰化方法。可按如下方法進行:含10去乙酰紫杉醇(10DAT)的樣品溶解于四氫呋喃溶液中，依次加入硝酸鋪，乙酸酐，二者與樣品的比例分別為1:5:10,20度反應3h后加入飽和碳酸氫鈉熄滅反應，隨后加入雙氧水(雙氧水量占總反應體系量的20%)，20度反應5小時后，用乙酸乙酯萃取反應液三次，蒸干乙酸乙酯相后得到紫杉醇產品。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的是提供，該制備方法操作簡單、重復性好、成本低，具有高選擇性、高收率，可充分利用紅豆杉資源。本專利技術提供了紫杉醇木糖苷化合物的制備方法，該方法步驟包括溶劑提取、液液萃取、柱色譜分離、結晶純化；具體步驟如下:(I)溶劑提取:以可再生紅豆杉的植物或細胞培養(yǎng)物或微生物發(fā)酵物為原料，將原料浸泡在低級醇或含低級醇的水溶液中1(T36 h，合并提取液并濃縮得到醇提取物；(2)液液萃取:將上述醇提取物加水，用正己烷萃取2次，水:正己烷=1:Γ1:5 ;然后水相用二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯的有機溶劑繼續(xù)萃取，合并后的有機相脫水后濃縮成浸膏；(3)柱色譜分離:將上述濃縮浸膏進行色譜柱I分離，色譜柱填料選用硅膠或氧化鋁；流動相選用乙酸乙酯/正己烷、二氯甲烷/甲醇或二氯甲烷/乙醇；用流動相梯度洗脫，分別得到紫杉醇組分和7-木糖-10-去乙酰紫杉醇組分；將上述含7-木糖-10-去乙酰紫杉醇組分，進行色譜柱II分離，色譜柱II填料選用硅膠鍵合辛烷基CS或硅膠鍵合十八烷基C18 ;流動相選用甲醇/水，乙醇/水或乙腈/水；用流動相梯度洗脫，收集液經(jīng)濃縮、干燥得到含量較高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇化合物；(4)結晶純化:將上述含量較高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇，加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或者它們的水溶液，攪拌溶解、結晶，得到含量90%以上的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇。本專利技術提供的紫杉醇木糖苷化合物的制備方法，所述可本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種紫杉醇木糖苷化合物的制備方法，其特征在于：該方法步驟包括溶劑提取、液液萃取、柱色譜分離、結晶純化；具體步驟如下：（1）溶劑提取：以可再生紅豆杉的植物或細胞培養(yǎng)物或微生物發(fā)酵物為原料，將原料浸泡在低級醇或含低級醇的水溶液中10~36?h，合并提取液并濃縮得到醇提取物；（2）液液萃取：將上述醇提取物加水，用正己烷萃取2次，水：正己烷=1：1~1：5；然后水相用二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯的有機溶劑繼續(xù)萃取，合并后的有機相脫水后濃縮成浸膏；（3）柱色譜分離：將上述濃縮浸膏進行色譜柱Ⅰ分離，色譜柱填料選用硅膠或氧化鋁；流動相選用乙酸乙酯/正己烷、二氯甲烷/甲醇或二氯甲烷/乙醇；用流動相梯度洗脫，分別得到紫杉醇組分和7?木糖?10?去乙酰紫杉醇組分；將上述含7?木糖?10?去乙酰紫杉醇組分，進行色譜柱Ⅱ分離，色譜柱Ⅱ填料選用硅膠鍵合辛烷基C8或硅膠鍵合十八烷基C18；流動相選用甲醇/水，乙醇/水或乙腈/水；用流動相等度洗脫，收集液經(jīng)濃縮、干燥得到含量較高的7?木糖?10?去乙酰紫杉醇化合物；（4）結晶純化：將上述含量較高的7?木糖?10?去乙酰紫杉醇，加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或者它們的水溶液，攪拌溶解、結晶，得到含量大于90%的7?木糖?10?去乙酰紫杉醇。...

【技術特征摘要】
1.種紫杉醇木糖苷化合物的制備方法，其特征在于:該方法步驟包括溶劑提取、液液萃取、柱色譜分離、結晶純化；具體步驟如下: (1)溶劑提取:以可再生紅豆杉的植物或細胞培養(yǎng)物或微生物發(fā)酵物為原料，將原料浸泡在低級醇或含低級醇的水溶液中1(T36 h，合并提取液并濃縮得到醇提取物； (2)液液萃取:將上述醇提取物加水，用正己烷萃取2次，水:正己烷=1:Γ1:5 ;然后水相用二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯的有機溶劑繼續(xù)萃取，合并后的有機相脫水后濃縮成浸膏； (3)柱色譜分離:將上述濃縮浸膏進行色譜柱I分離，色譜柱填料選用硅膠或氧化鋁；流動相選用乙酸乙酯/正己烷、二氯甲烷/甲醇或二氯甲烷/乙醇；用流動相梯度洗脫，分別得到紫杉醇組分和7-木糖-10-去乙酰紫杉醇組分； 將上述含7-木糖-10-去乙酰紫杉醇組分，進行色譜柱II分離，色譜柱II填料選用硅膠鍵合辛烷基C8或硅膠鍵合十八烷基C18 ;流動相選用甲醇/水，乙醇/水或乙腈/水；用流動相等度洗脫，收集液經(jīng)濃縮、干燥得到含量較高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇化合物； (4)結晶純化: 將上述含量較高的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇，加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或者它們的水溶液，攪拌溶解、結晶，得到含量大于90%的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇。2.照權利要求1 所...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：楊凌，劉興寶，欒宏偉，杜遜甫，
申請(專利權)人：中國科學院大連化學物理研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：