一種穿膜多肽及其制備方法和用途技術

本發明專利技術屬于醫藥技術領域，提供了一種細胞穿膜肽，由13個氨基酸組成，序列為RGGRVRRRWRGGR。本發明專利技術通過固相合成的方法得到所述多肽，并且通過化學合成的方法與抗腫瘤藥物偶聯，本發明專利技術所提供的偶聯物具有通過血腦屏障的作用以及抑瘤作用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于醫藥
，涉及腫瘤相關的藥物領域，具體而言，本專利技術涉及一種 穿膜多肽，以及該多肽與抗腫瘤藥偶聯形成的偶聯物。
技術介紹
腦瘤及腦轉移瘤的發病率逐年上升。在對其治療方面，血腦屏障被認為是阻止化 療藥物進入腦組織進而影響療效的主要原因。血腦屏障是機體參與固有免疫的內部屏障之 一，由介于血循環與腦實質間的軟腦膜、脈絡叢的腦毛細血管壁和包于壁外的膠質膜所組 成，能阻擋病原生物和其他大分子物質由血循環進入腦組織和腦室。基本上100%的大分子 藥物，包括多肽、重組蛋白、單克隆抗體、基于RNA干擾技術的藥物、基因治療相關藥物等都 無法穿越血腦屏障，且大于98%的小分子藥物也無法穿過血腦屏障。目前，放射性治療與 化學療法只能延長患者生命4個月，因此本專利技術致力于研究使現有藥物更好的透過血腦屏 障。 多肽由于其具有極性末端和非極性末端，因此在體內有較高的利用度，由于本身 是內源性物質所以毒性小，但是多肽直接作為藥物受到較大的限制，例如其穩定性差，不能 口服。近年來，多肽作為藥物輔助功能的應用逐漸成為了新藥研制的熱點之一。細胞穿膜肽 是20世紀中期開始認識到的一類具特殊功能的多肽分子，英文學術名稱一般寫為cell2-p enetrating-peptides (CPPs)。它們通常由5~30個氨基酸組成，典型的一般由8~16個氨 基酸構成，具有生物膜穿透功能，還可攜帶其它分子甚至超分子顆粒進入細胞中。正是因為 這種特殊的功能，它們被看作生物活性分子有效的細胞內轉運工具，具有廣泛的應用前景。 近些年來多肽和藥物通過共價方式形成組合物的例子很多，例如：多肽 Penetratin和阿霉素共價耦合用于治療乳腺癌；多肽TAT和藥物P53共價耦合用于治療眼 癌轉移；多肽YTA4與甲氨蝶呤共價耦合治療乳腺癌。
技術實現思路
以下是本專利技術的詳細描述： (1)本專利技術所述的穿膜肽 本專利技術所述的細胞穿膜肽，由13個氨基酸組成，而且是親水性和疏水性交替組合 的，氨基酸序列為： RGGRVRRRWRGGR 該多肽本身不具有生理活性，但是具有透過血腦屏障的作用，本專利技術還涉及該多 肽的制備方法及其應用。 (2)本專利技術所述的穿膜肽的制備方法 本專利技術所需多肽是采用固相的方法制備的，固相合成是以固相載體樹脂為載體， 從C端即羧基端向N端即氨基端逐漸添加氨基酸的過程。 本專利技術中優選樹脂：Fmoc-wang樹脂、2-cl-trt樹脂，樹脂取代度0. 24~0. 4. 本專利技術所使用的保護氨基酸為：Fmoc-Arg(pbf)-〇H，Fmoc-Gly-〇H，Fmoc-Val-〇H, Fmoc-Trp-OH，反應過程中保護氨基酸3~5倍過量。 本專利技術所使用的脫保護試劑為：哌啶/N，N-二甲基甲酰胺，比例為10:90~ 30:70。 本專利技術所使用的偶聯試劑為：①苯并三氮唑-N，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸鹽 /1-羥基苯并三唑（Η0ΒΤ)，②2-(7-偶氮苯并三氮唑）-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸酯 /1-羥基苯并三唑（Η0ΒΤ)，③Ν，Ν'_二異丙基碳二亞胺/1-羥基苯并三唑（Η0ΒΤ)。 本專利技術中，若使用第①或者第②種偶聯試劑，那么反應中過程中應添加縛酸劑： DIEA/NMP。 本專利技術中所使用的切割試劑為：TFA/茴香硫醚/水/苯酚/1，2-乙二硫醇，比例 為：82· 5:5:5:5 ;2· 5〇 本專利技術中所使用MS-IT-T0F確定分子量，使用HPLC純化粗肽 (3)本專利技術所述多肽與抗腫瘤藥物阿霉素的連接方法 1)化合物II的合成 50m 反應瓶中加入 1. 0g(l. 72mmol)阿霉素，0· 52g(5. 20mmol) 丁二酸酐，30mlTHF， 滴加0. 66g(5. 12mmol)N，N-二異丙基乙胺（DIEA)，27°C攪拌6h，蒸干溶劑得蠟狀物，加水攪 拌，有黃色固體析出，抽濾，水洗兩次，干燥，得黃色固體1. 15g。 2)化合物I的合成 50m 反應瓶中加入 0· 22g(0. 32mmol)化合物 ΙΙ，0· 10g(0. 31mmol)0-苯并三氮 唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲四氟硼酸酯（TBTU)，5mlDMF，氮氣保護，滴加0. 08g(0. 62mmol) N，N-二異丙基乙胺（DIEA)，27°C攪拌lh后，加入0. 10g多肽，27°C攪拌3h后，終止反應。使 用MS-IT-T0F確定分子量，使用HPLC純化粗產物。 (4)本專利技術所述多肽與抗腫瘤藥物紫杉醇的連接方法 1)化合物III的合成 50m 反應瓶中加入 1. 50g(l. 72mmol)紫杉醇，0· 52g(5. 20mmol) 丁二酸酐， 30mlTHF，滴加0. 66g(5. 12mmol)N，N-二異丙基乙胺（DIEA)，27°C攪拌6h，蒸干溶劑得蠟狀 物，加水攪拌，有黃色固體析出，抽濾，水洗兩次，干燥，得黃色固體1. 15g。 2)化合物IV的合成 50m 反應瓶中加入 0· 22g(0. 32mmol)化合物 ΙΙΙ，0· 10g(0. 31mmol)0-苯并三氮 唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲四氟硼酸酯（TBTU)，5mlDMF，氮氣保護，滴加0. 08g (0. 62mmol) N，N-二異丙基乙胺（DIEA)，27°C攪拌lh后，加入0. 10g多肽，27°C攪拌3h后，終止反應。使 用MS-IT-T0F確定分子量，使用HPLC純化粗產物。【附圖說明】 圖1為合成多肽的HPLC測試結果圖。【具體實施方式】 下面結合【具體實施方式】對本專利技術進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本專利技術，而不是為了限制本專利技術的范圍。 在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。 實施例1:多狀的固相合成 當前第1頁1 2 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種細胞穿膜肽，其特征在于，所述細胞穿膜肽由13個氨基酸組成，氨基酸序列為：RGGRVRRRWRGGR。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：孔維苓，鄭學敏，龔珉，夏廣萍，周植星，于冰，徐為人，
申請(專利權)人：天津藥物研究院，
類型：發明
國別省市：天津;12