NBP158及其用途制造技術

本發明專利技術提供了編碼分泌型人成纖維細胞生長因子結合蛋白3之N端158個氨基酸(NBP158)的核酸分子，包含NBP158多肽的藥物組合物，以及使用這樣的核酸、多肽或藥物組合物用于治療代謝性疾病和病癥的方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】專利技術背景糖尿病的流行病學、病理生理學和治療糖尿病(DiabeticMellitus，DM)是以由胰島素之產生、胰島素之作用或這二者的缺陷引起的高水平血糖為標志的一組疾病。DM可導致嚴重的并發癥和過早死亡。2010年，DM在美國影響2580萬各年齡的人，包括1880萬人已被診斷且700萬人尚未被診斷。基于空腹血糖水平或血紅蛋白A1C水平，65歲以上成年人中的50％患有前驅糖尿病(prediabetes)。DM是腎衰、非創傷性下肢截肢和新發成人失明(blindness)病例的首要原因，是心臟病和卒中(stroke)的主要原因，并且是美國第七位的致死原因。1型DM或胰島素依賴型糖尿病(insulin-dependentdiabetesmellitus，IDDM)在患者的免疫系統破壞胰腺細胞(產生胰島素的唯一細胞)時發生。2型DM或非胰島素依賴型糖尿病(non-insulin-dependentdiabetesmellitus，IDDM)始于胰島素抵抗(其中細胞不適當地使用胰島素的疾病)。隨著對胰島素之需求的提高，胰腺逐漸喪失其產生胰島素的能力。妊娠糖尿病是在妊娠期間診斷出的葡萄糖不耐受(glucoseintolerance)形式。其他類型的DM由特定遺傳病癥、外科手術、用藥、感染、胰腺疾病等疾病引起。目前的針對DM的治療和處理包括患者教育、自我護理練習、飲食、胰島素和降低血糖水平的口服用藥。患有1型DM的患者必須接受胰島素注射。對于2型DM，通過血糖控制、血壓控制、血脂控制預防并發癥，以及對眼、足和腎的預防性護理是非常重要的。對于早期2型DM患者，健康的飲食計劃和鍛煉計劃、降低過重體重和口服用藥可使其血糖水平處于控制之下。但是對于晚期2型DM患者，口服用藥和胰島素二者是必需的。高劑量的胰島素抑制胰腺產生內源性胰島素，且這可能不降低血糖水平，因為在許多患有2型DM的患者中存在胰島素抵抗。病理生理學研究顯示，提高的胰島素抵抗和不充足的胰島素分泌是2型糖尿中高血糖狀態的主要基礎原因。胰島素抵抗在診斷前通常已經存在，表現為抑制的肝中響應于胰島素的葡萄糖產生和降低的對葡萄糖轉運到肌肉和脂肪組織中的刺激。然而，只要β細胞分泌較高量的胰島素，正常血糖可以維持。最終，胰島素水平由于降低的β細胞數量及其降低的分泌能力而降低。血糖控制的總體目標是使長期并發癥盡最小化，同時避免嚴重的低血糖事件。血糖控制的目標是保持糖化血紅蛋白水平低于7.0％。目前可用的口服降糖藥包括改善胰島素敏感性的藥劑，例如二甲雙胍；噻唑烷二酮類(吡格列酮和羅格列酮)；提高循環胰島素水平的藥劑，例如磺酰脲類(例如，格列吡嗪、格列本脲等)；美格列奈類(例如，瑞格列奈、那格列奈)；GLP-1受體激動劑(例如，艾塞那肽、利拉魯肽)，以及二肽基肽酶IV(DipeptidylpeptidaseIV，DPP-IV)抑制劑(例如，西格列汀、沙格列汀)；其他藥劑，例如α-葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、米格列醇)、膽汁酸螯合劑(例如，考來維侖)、多巴胺激動劑(例如，溴隱亭)、胰淀素(amylin)模擬物(例如，普蘭林肽)。在臨床上顯著高血糖(血糖水平＞300mg/dl或16.7mmol/l；糖化血紅蛋白水平＞10％)的患者中，應當開始胰島素治療。低血糖和體重增長是長期使用胰島素的主要問題。總之，患有2型DM的患者中的血糖控制至關重要，然而，目前的口服和注射用藥遠非最終的選擇。需要通過獨特機制起效的新降糖劑來更好地治療或者甚至治愈2型DM。FGFBP3的生理學和生物化學FGFBP3是FGF結合蛋白家族(FGFBP1、FGFBP2和FGFBP3)的成員。人FGFBP3前體(登錄號NP_689642、RefSeqNM_152429.4、CCDSID7418.1)由圖1(SEQIDNO：1)中的具有26個殘基長度的信號肽(1-26位氨基酸)和232個殘基長度的分泌肽(27-258位氨基酸)的258個氨基酸組成。編碼人FGFBP3的DNA可獲自從具有FGFBP3mRNA并以可檢出的水平表達它的許多組織(例如腦、結腸、肝、肺等)制備的cDNA文庫。旁分泌/自分泌因子(例如FGF1和FGF2)由于高結合親和力3通過硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfateproteoglycan，HSPG)結合(sequester)至細胞外基質和細胞表面。由于低結合親和力，內分泌因子(例如FGF19、FGF21和FGF23)可在循環中經過很長距離。如果在沒有外源性FGF的情況下施用，FGFBP家族蛋白(FGFBP1、FGFBP2和FGFBP3)在體外或在體內并不活化FGF信號傳送途徑。在外源性FGF存在下，FGFBP蛋白顯著增強FGF信號傳送。FGFBP3與旁分泌/自分泌FGF(例如FGF1和FGF2)或內分泌FGF(例如FGF19、FGF21和FGF23)結合。由于FGF及其受體參與許多癌細胞系和原發腫瘤的增殖和進展，FGFBP3作為長期施用之藥物的一個主要問題是促分裂可能性(mitogenicpotential)。例如，FGFBP3以高親和力與FGF19結合，所述FGF19在骨骼肌中表達人FGF19的轉基因小鼠中誘導肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的發生。最近，FGF19中和抗體已被用于在FGF19轉基因小鼠中預防部分地通過抑制β-聯蛋白(β-catenin)信號傳送介導的HCC發生，這進一步確證了FGF19在HCC進展中的作用。成纖維細胞生長因子結合蛋白3(Fibroblastgrowthfactorbindingprotein3，FGFBP3)在體外還自身與肝素以高親和力結合，但在FGF2存在下，以低親和力結合。然而，FGFBP3與HSPG在體內的結合親和力是未知的。最近的研究表明，FGFBP3可局部地和全身性地發揮功能作用。在雞胚中，發現FGFBP3通過活化旁分泌/自分泌FGF信號傳送來提高腦中的血管通透性；在基因敲除小鼠模型中，FGFBP3通過獨特的信號傳送途徑在焦慮相關行為的調節中發揮關鍵作用。初步的表型數據還提供了在FGFBP3缺失(-/-)小鼠中瘦體重(leanbodymass)降低的證據，這表明FGFBP3可以內分泌的方式參與能量代謝(fuelmetabolism)的調節。專利技術概述本項專利技術提供了新的治療性蛋白質和新的用于治療代謝性疾病和病癥(包括糖尿病和肥胖癥)的方案。所述治療性蛋白質包括分泌型(secreted)人成纖維細胞生長因子結合蛋白3(FGFBP3)和分泌型FGFBP3的N端158個氨基酸(NBP158)。在一個實施方案中，本專利技術提供了合成的核酸分子，其包含編碼人FGFBP3蛋白突變體(NBP158)的DNA。在一方面中，所述合成的核酸分子包含與(a)編碼具有1至約184或27至約184位氨基酸殘基序列(包括圖1(SEQIDNO：1))的人FGFBP3多肽N端158個氨基酸(NBP158)的DNA分子或(b)(a)的DNA分子的互補物(complement)具有至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的本文檔來自技高網...

【技術保護點】
合成的核酸分子，其包含與(a)編碼NBP158蛋白的DNA分子或(b)(a)的DNA分子的互補物具有至少約75％序列同一性的DNA，所述NBP158蛋白具有圖1(SEQ?ID?NO：1)的1至約184或約27至約184位氨基酸殘基的序列。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】1.合成的核酸分子，其包含與(a)編碼NBP158蛋白的DNA分子或(b)(a)的DNA分子的互補物具有至少約75％序列同一性的DNA，所述NBP158蛋白具有圖1(SEQIDNO：1)的1至約184或約27至約184位氨基酸殘基的序列。2.權利要求1所述的核酸分子，其中所述核酸分子是cDNA分子。3.載體，其包含權利要求1所述的核酸。4.權利要求3所述的載體，其與被用所述載體轉化的宿主細胞識別的控制序列可操縱地連接。5.宿主細胞，其包含權利要求4所述的載體。6.權利要求5所述的宿主細胞，其中所述細胞是CHO細胞。7.用于產生NBP158重組蛋白的方法，其包括在適于表達所述NBP158蛋白的條件下培養權利要求5或6所述的宿主細胞，以及從細胞培養物中回收所...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張文濤，
申請(專利權)人：張文濤，
類型：發明
國別省市：黑龍江;23