一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法技術

本發明專利技術提供一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法，通過使用單一變量法調整測試增強光源的波長對甘草組織培養苗的生理影響，確定最適增強光源波長，并根據不同波長光源對甘草組培苗的影響，確定不同波長光源出組合，并通過保持增強光源不變反向確定基礎培養基，同時引入組培苗的實際增殖系數作為篩選標準，更加適合商業工廠化生產。

A method for screening and promoting the proliferation of Glycyrrhiza uralensis callus

The present invention provides a method for screening and promote callus proliferation conditions, enhance the wavelength of physiological effects on seedlings of Glycyrrhiza tissue culture by using a single variable method to adjust the test, determine the optimum light wavelength, and according to the effect of different wavelength light source of the licorice group seedlings, determine the different wavelength light source combination, and keep the light medium by reverse invariant basis, the actual multiplication coefficient of plantlets as the screening criteria introduced at the same time, more suitable for commercial production.

【技術實現步驟摘要】
一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法
本專利技術屬于甘草組織培養
，尤其涉及一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法。
技術介紹
甘草，（學名：GlycyrrhizauralensisFisch）別名：國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源，造成水土流失和嚴重土壤沙漠化。另外，甘草種子主要來自野生甘草，其品種混雜，種子稀缺，發芽率極低，野生資源不適應規模化和標準化生產的需要。同時由于人們破壞性地對葉生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕，對甘草的保護性利用迫在眉睫，但由于甘草種植發芽率不高和人們對其此生代謝物的需求，從而使甘草的組織培養對研究和生產具有重要作用，然而現有的甘草培養基中極少有通過增強光源調節甘草生長的技術。綠色植物是一部以光為動力的機器，許多生理生化過程受光的調節控制，形態構建受光作用的誘導。不同光質對植物的光形態建成、生理生化過程的調節已有報道。在日光燈光照條件下，輔助不同光質的光照，對甘草組培誘導生長進行調整，提高甘草組織培養的生產效率。鈰是周期系第ΙΙΙ族副族鑭系元素，一種稀土元素。原子序數58。穩定同位素：136、138、140、142。灰色金屬，有展性。密度：正方晶體6.9，立方晶體6.7。熔點799℃，沸點3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬，粉末在空氣中易自燃，易溶于酸。鈰的名稱來源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%，是稀土元素中豐度最高的。
技術實現思路
基于現有技術存在上述問題，本專利技術提供一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法，通過使用單一變量法調整測試增強光源的波長對甘草組織培養苗的生理影響，確定最適增強光源波長，并根據不同波長光源對甘草組培苗的影響，確定不同波長光源出組合，并通過保持增強光源不變反向確定基礎培養基，同時引入組培苗的實際增殖系數作為篩選標準，更加適合商業工廠化生產。一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法，其包括以下步驟：步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關文獻資料，對比其他植物物種組培增殖過程中添加增強光源的種類并確定光源波長，初步篩選范圍；步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環境一致并且生長狀態相似的甘草愈傷組織，將愈傷組織切割成0.5cm3大小的組織塊；步驟S30對照培養，以MS培養基為基礎培養基，添加TDZ（噻苯?。┑臐舛葹?.06mg/L、NAA（萘乙酸）的濃度為2.5mg/L、活性炭的濃度為0.15mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素C的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L，配制成測試用培養基，分別接種相同量的甘草愈傷組織，并進行常規增殖組織培養作為對照組，在常規培養的基礎上添加不同波段增強增強光源作為實驗組，對照組和實驗組都設置多個平行組；步驟S40記錄檢測參數，培養20天后統計每個對照組和實驗組的褐化的數量，并計算褐化率；步驟S50生長量計算，分別將相同實驗組或者對照組的愈傷組織取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分并對愈傷組織進行稱重，記錄重量；步驟S60計算評估因數，將愈傷組織培養后的重量減去褐化的重量，再除以培養前的重量，計算出實際增殖系數，將實際增殖系數減去褐化率得出評估因數，對比不同濃度梯度的評估因數，挑選出數值最大的評估因數對應的增強光源波長；步驟S70縮小篩選范圍，使用步驟S60中挑選出的增強光源波長范圍重復進行步驟S10-S60縮小篩選范圍或者確定最適波長范圍；步驟S80反向篩選基礎培養基，使用步驟S70確定的最適波長范圍搭配不同基礎培養基，重復步驟S40和步驟S50，并使用步驟S60的計算方法計算評估因數，確定最適基礎培養基；步驟S90不同波長組合篩選，通過單一因數確定不同波長對甘草愈傷組織增殖的生理參數影響，調整最適合波長組合。優選地，所述的步驟S30中每個實驗組或者對照組設置5-15個平行組。優選地，所述的步驟S70中重復的次數是2-3次。優選地，所述的步驟S80中不同的基礎培養基包括MS培養基、N6培養基、B5培養基、Nitsh培養基、White培養基和Miller培養基。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步的描述。一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法，其包括以下步驟：步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關文獻資料，對比其他植物物種組培增殖過程中添加增強光源的種類并確定光源波長，初步篩選范圍；步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環境一致并且生長狀態相似的甘草愈傷組織，將愈傷組織切割成0.5cm3大小的組織塊；步驟S30對照培養，以MS培養基為基礎培養基，添加TDZ（噻苯?。┑臐舛葹?.06mg/L、NAA（萘乙酸）的濃度為2.5mg/L、活性炭的濃度為0.15mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素C的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L，配制成測試用培養基，分別接種相同量的甘草愈傷組織，并進行常規增殖組織培養作為對照組，在常規培養的基礎上添加不同波段增強增強光源作為實驗組，對照組和實驗組都設置多個平行組；步驟S40記錄檢測參數，培養20天后統計每個對照組和實驗組的褐化的數量，并計算褐化率；步驟S50生長量計算，分別將相同實驗組或者對照組的愈傷組織取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分并對愈傷組織進行稱重，記錄重量；步驟S60計算評估因數，將愈傷組織培養后的重量減去褐化的重量，再除以培養前的重量，計算出實際增殖系數，將實際增殖系數減去褐化率得出評估因數，對比不同濃度梯度的評估因數，挑選出數值最大的評估因數對應的增強光源波長；步驟S70縮小篩選范圍，使用步驟S60中挑選出的增強光源波長范圍重復進行步驟S10-S60縮小篩選范圍或者確定最適波長范圍；步驟S80反向篩選基礎培養基，使用步驟S70確定的最適波長范圍搭配不同基礎培養基，重復步驟S40和步驟S50，并使用步驟S60的計算方法計算評估因數，確定最適基礎培養基；步驟S90不同波長組合篩選，通過單一因數確定不同波長對甘草愈傷組織增殖的生理參數影響，調整最適合波長組合。作為優選實施例，所述的步驟S30中每個實驗組或者對照組設置10個平行組。作為優選實施例，所述的步驟S70中重復的次數是3次。作為優選實施例，所述的步驟S80中不同的基礎培養基包括MS培養基、N6培養基、B5培養基、Nitsh培養基、White培養基和Miller培養基。經過篩選確定如下增強光源具有比更高的實際增殖系數：使用白光、藍光增強光源和綠光增強光源照射愈傷組織，綠色光源是波段為550nm-580nm的綠光，藍色光源是波段為450nm-470nm的藍光，光照時間為光照12小時/黑暗12小時。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法，其特征在于，其包括以下步驟：步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關文獻資料，對比其他植物物種組培增殖過程中添加增強光源的種類并確定光源波長，初步篩選范圍；步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環境一致并且生長狀態相似的甘草愈傷組織，將愈傷組織切割成0.5cm

【技術特征摘要】
1.一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養條件的方法，其特征在于，其包括以下步驟：步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關文獻資料，對比其他植物物種組培增殖過程中添加增強光源的種類并確定光源波長，初步篩選范圍；步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環境一致并且生長狀態相似的甘草愈傷組織，將愈傷組織切割成0.5cm3大小的組織塊；步驟S30對照培養，以MS培養基為基礎培養基，添加TDZ（噻苯隆）的濃度為0.06mg/L、NAA（萘乙酸）的濃度為2.5mg/L、活性炭的濃度為0.15mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素C的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L，配制成測試用培養基，分別接種相同量的甘草愈傷組織，并進行常規增殖組織培養作為對照組，在常規培養的基礎上添加不同波段增強增強光源作為實驗組，對照組和實驗組都設置多個平行組；步驟S40記錄檢測參數，培養20天后統計每個對照組和實驗組的褐化的數量，并計算褐化率；步驟S50生長量計算，分別將相同實驗組或者對照組的愈傷組織取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分并對愈傷組織進行稱重，記錄重量；步驟S60計算評估因數，將愈傷組織培養后的重量減去褐化...

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：陳志育，
類型：發明
國別省市：廣東,44