一種貝萊斯芽孢桿菌及其分離篩選方法與應用技術

本發明專利技術提供了一種貝萊斯芽孢桿菌及其分離篩選方法與應用，屬于微生物技術與食品加工領域。本發明專利技術提供一種貝萊斯芽孢桿菌具有較好的發酵能力，通過篩選得到貝萊斯芽孢桿菌，在進行發酵的時候，具備高產蛋白酶、淀粉酶和豆豉纖溶酶的能力；將貝萊斯芽孢桿菌制備成食品發酵菌劑，可以大規模的應用到食品發酵中；通過使用貝萊斯芽孢桿菌發酵制得的發酵食品，游離氨基酸和豆豉纖溶酶含量高，營養豐富，具有易消化、防血栓等特點。

A Bacillus Velez and its isolation and screening method and Application

The invention provides a Bacillus Velez and its separation and screening method and application, belonging to the field of microbial technology and food processing. The invention provides a good fermenting ability of Bacillus Velez, by screening the bacillus of Velez, the ability of high yield protease, amylase and Douchi fibrinolytic enzyme at the time of fermentation; the preparation of Bacillus Velez Bacillus as a food fermentation agent can be applied to the food fermentation in a large scale. In the fermented food produced by the fermentation of Bacillus Velez, the content of free amino acid and Douchi fibrinolytic enzyme is high, and it is rich in nutrition. It has the characteristics of easy digestion and anti thrombosis.

【技術實現步驟摘要】
一種貝萊斯芽孢桿菌及其分離篩選方法與應用
本專利技術涉及微生物技術與食品加工領域，具體而言，涉及一種貝萊斯芽孢桿菌及其分離篩選方法與應用。
技術介紹
發酵食品是指利用有益微生物加工制造而成的一類具有獨特風味與營養價值的食品，具有悠久的歷史。豆豉作為發酵食品之一，其原料為黑豆或黃豆，通過微生物發酵而具有獨特的風味。按制曲發酵時參與的主要微生物不同，豆豉分為毛霉型、曲霉型、根霉型和細菌型。在我國，細菌型豆豉是以云貴川一帶民間制作的水豆豉為代表。水豆豉是由黃豆經細菌發酵而形成的釀造調味食品，產品呈濕態，含水量高，在堆積發酵過程中發生水解作用而產生一些特殊氣味。水豆豉營養豐富，含有豐富的蛋白質，維生素和礦物質，深受當地人民喜愛。淡豆豉也屬于細菌型豆豉，在中醫藥學上是一味中藥，2002年被我國衛生部定為第一批藥食兩用品種。而水豆豉由于含鹽量高，多數被作為調味品使用。為了促進水豆豉行業得到健康快速的發展，應該在調味品的基礎上，進一步將水豆豉開發成新的功能性食品。芽孢桿菌能產生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等十幾種酶，約50％的工業產酶量均發酵自芽孢桿菌屬。其中，最受關注的是芽孢桿菌產生的豆豉纖溶酶。豆豉纖溶酶不僅血栓溶解能力強，同時還可激活體內的組織纖溶酶原激活物，不會引起內出血且無毒副作用，體內半衰期長，可通過消化道直接吸收，是潛在的溶栓藥物。因此，水豆豉作為一種功能性預防血栓的保健食品具有很好的開發和使用價值。目前，我國水豆豉的生產仍然是以自然發酵為主。由于自然發酵依靠的是環境中的微生物，容易受到溫度、濕度等因素的影響，使不同批次產品的質量出現較大差異。此外，參與自然發酵的微生物組成不受人為控制，無法保障發酵產物的營養價值。更重要的是，傳統發酵有可能引入致病微生物或受真菌毒素污染，存在食用的安全隱患。
技術實現思路
本專利技術的第一目的在于提供一種貝萊斯芽孢桿菌，貝萊斯芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.14856；該貝萊斯芽孢桿菌具有較好的產酶能力，具有較大的工業應用價值和應用前景。本專利技術的第二目的在于提供上述的貝萊斯芽孢桿菌的生物學純培養物。本專利技術的第三目的在于提供一種貝萊斯芽孢桿菌的分離篩選方法。本專利技術的第四目的在于提供上述的貝萊斯芽孢桿菌在制備食品發酵菌劑或發酵食品中的應用。本專利技術的第五目的在于提供一種食品發酵菌劑，其包括上述的貝萊斯芽孢桿菌。本專利技術的第六目的在于提供一種發酵食品，其包括上述的貝萊斯芽孢桿菌。為了實現本專利技術的上述目的，采用以下技術方案：一種貝萊斯芽孢桿菌，貝萊斯芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.14856。上述的貝萊斯芽孢桿菌的生物學純培養物。一種貝萊斯芽孢桿菌的分離篩選方法，其包括：取水豆豉，加入生理鹽水，振蕩混勻，并梯度稀釋，得到梯度稀釋液，利用傾注培養法培養梯度稀釋液，采用平板劃線法分離純化菌株；通過酪蛋白平板法、淀粉培養基法和纖維蛋白平板法篩選分離菌株，得到的產酶能力強的貝萊斯芽孢桿菌。上述的貝萊斯芽孢桿菌在制備食品發酵菌劑或發酵食品中的應用。一種食品發酵菌劑，其包括上述的貝萊斯芽孢桿菌。一種發酵食品，其包括上述的貝萊斯芽孢桿菌。本專利技術的有益效果為：本專利技術提供一種貝萊斯芽孢桿菌具有較好的發酵能力，通過篩選得到貝萊斯芽孢桿菌，在進行發酵的時候，具備高產蛋白酶、淀粉酶和豆豉纖溶酶的能力，尤其是產豆豉纖溶酶的能力較強；將貝萊斯芽孢桿菌制備成食品發酵菌劑，可以大規模的應用到食品發酵中；通過發酵制得的發酵食品具有較高的游離氨基酸和豆豉纖溶酶含量，具有易于消化、營養豐富且還能一定預防血栓的特點。附圖說明為了更清楚地說明本專利技術實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本專利技術的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1為本專利技術實驗例1所提供的系統進化樹示意圖；圖2為本專利技術實驗例1所提供的菌體顯微結果圖。具體實施方式下面將結合實施例對本專利技術的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本專利技術，而不應視為限制本專利技術的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。營養瓊脂、MRS培養基、酪蛋白培養基、LB肉湯購自北京路橋技術有限責任公司；革蘭氏染液購自成都瑞琦科技實業股份有限公司；Primers由成都擎科梓熙生物技術有限公司合成；I-5TM2×High-FidelityMasterMix購自成都擎科梓熙生物技術有限公司；MarkerⅡ、Ⅲ購自TIANGEN；瓊脂糖購自TSINGKE；T4648-1KU凝血酶、F3879-250MG纖維蛋白原購自SIGMA；U108373-10mg尿激酶購自aladdin；細菌微量生化鑒定管購自青島高科技工業園海博生物技術有限公司。C1000TouchTMThermalCyclerPCR擴增儀、PowerPacBasicTM電泳儀、MolecularChemiDocTMXRS+ImagingSystem購自BIO-RAD；HR40-ⅡA2生物安全柜購自青島海爾特種電器有限公司；GI54DWS自動高壓蒸汽滅菌器購自致微(廈門)儀器有限公司；隔水式恒溫培養箱購自上海飛躍實驗儀器有限公司；厭氧工作站購自ELECTROTEK；SKY200Bshakerincubator購自SUKUN；HHS型恒溫水浴鍋購自上海博迅實業有限公司醫療設備廠；SQP千分之一電子天平和萬分之一天平購自賽多利斯科學儀器(北京)有限公司；拍擊式均質器購自INSREUMENTS；DS-Fi1c光學顯微鏡購自Nikon。所用試劑或儀器耗材未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。下面對本專利技術實施例的一種貝萊斯芽孢桿菌及其分離篩選方法與應用進行具體說明。一種貝萊斯芽孢桿菌，貝萊斯芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.14856。該貝萊斯芽孢桿菌的保藏信息：分類命名：貝萊斯芽孢桿菌Bacillusvelezensis；于2017年11月03日在位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCCNo.14856。上述的貝萊斯芽孢桿菌的生物學純培養物。一種貝萊斯芽孢桿菌的分離篩選方法，其包括：取水豆豉，加入生理鹽水，振蕩混勻，并梯度稀釋，得到梯度稀釋液，利用傾注培養法培養梯度稀釋液，采用平板劃線法分離純化菌株；通過酪蛋白平板法，淀粉培養基法和纖維蛋白平板法篩選分離菌株，得到的產酶能力強的貝萊斯芽孢桿菌。進一步地，本專利技術較佳的實施例中，傾注培養法包括恒溫培養階段和厭氧培養階段，恒溫培養階段的培養溫度34.3℃-38.6℃條件下培養45-55h；厭氧培養階段的培養溫度34.3℃-38.6℃條件下培養65-75h。上述的貝萊斯芽孢桿菌在制備食品發酵菌劑或發酵食品中的應用。一種食品發酵菌劑，其包括上述的貝萊斯芽孢桿菌。一種發酵食品，其包括上述的貝萊斯芽孢桿菌。進一步地，本專利技術較佳的實施例中，發酵食品由貝萊斯芽孢本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種貝萊斯芽孢桿菌，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.14856。

【技術特征摘要】
1.一種貝萊斯芽孢桿菌，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.14856。2.如權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌的生物學純培養物。3.一種貝萊斯芽孢桿菌的分離篩選方法，其特征在于，其包括：取水豆豉，加入生理鹽水，振蕩混勻，并梯度稀釋，得到梯度稀釋液，利用傾注培養法分離培養所述梯度稀釋液，采用平板劃線法分離純化菌種，通過酪蛋白平板法，淀粉培養基法和纖維蛋白平板法篩選分離菌株，得到的產酶能力強的所述貝萊斯芽孢桿菌。4.根據權利要求3所述的貝萊斯芽孢桿菌的分離篩選方法，其特征在于，所述傾注培養法包括恒溫培養階段和厭氧培養階段，所述恒溫培養階段的培養溫度34.3℃-38.6℃條件下培養45-55h；所述厭氧培養階段的培養溫度34.3℃-38.6℃條件下培養65-75h。5...

【專利技術屬性】
技術研發人員：裴曉方，陳宇航，左浩江，熊靜遠，許欣，鄭田利，劉雪薇，
申請(專利權)人：四川大學，
類型：發明
國別省市：四川,51