用于甲狀腺癌診斷和治療的方法和組合物技術

本文描述了用于檢測、診斷和監測受試者的甲狀腺癌的方法，其包括測定在受試者的樣品中的包括Ep-ICD和β-聯蛋白在內的標志物。本發明專利技術還提供用于實施本發明專利技術方法的試劑盒和組合物。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及與甲狀腺癌、特別是侵襲性甲狀腺癌有關的標志物，用于檢測、診斷、預測、監測和表征甲狀腺癌以及治療甲狀腺癌的組合物、試劑盒和方法。
技術介紹
上皮細胞粘附分子(EpCAM)是ー種40kDa跨膜糖蛋白，在幾種人惡性腫瘤中頻繁過表達[Spizzo等，2004 ；ffent P等，2006 ；ffenqi D等，2009]。EpCAM最初被鑒定為癌癥標志物，這可歸于其在快速增殖性上皮腫瘤中的高表達[有關綜述見Trzpis M等，2007]。正常上皮以可變但一般低于癌細胞的水平表達EpCAM。它還在正常的干細胞和祖細胞[StinglJ等,2001 ；Schmelzer E等,2007 ；Trzpis M等,2008]和在乳腺癌、結腸癌、胰腺癌和前列腺癌的癌引發細胞[Al-Hajj M 等，2003 ;0’Brien CA 等，2007 ;Ricci_Vitiani L 等，2007]中過表達。最近，在根治性子宮切除術后的子宮頸癌患者的外周血中，在表達E6/E7-HPV癌基因的循環腫瘤細胞中檢出EpCAM[WeiSmann P等，2009]。對于許多癌癥和正常組織，有大量有關EpCAM染色的數據庫。然而，所有這些研究采用針對EpCAM的胞外域的抗體，其可檢測EpCAM前體或結合細胞的EpEx或兩者[Wenqi D等，2009]。EpCAM是在細胞粘附、細胞増殖、分化、遷移、細胞周期調節中起重要作用的多效分子并涉及癌癥和干細胞信號轉導[Munz等，2009]。并不完全了解調節EpCAM表達的分子機制。最近，研究表明調節性膜內蛋白酶解(RIP)體外和體內起其促有絲分裂信號轉導蛋白的作用[Maetzel等，2009]。EpCAM胞外域EpEx通過蛋白酶-TACE和早老蛋白_2的切割和脫落，釋放其易位至核的胞內域(Ep-I⑶)。Ep-I⑶與FHL2和Wnt途徑組分β -聯蛋白和Lef-I的締合形成核復合體，該核復合體在Lef-I共有位點上結合DNA，并誘導基因轉錄，導致細胞增殖増加，而且已經表明該核復合體在免疫缺陷型小鼠中具有致癌性[Maetzel，2009]。鑒于EpCAM作為致癌信號轉導蛋白、細胞粘附分子和癌癥干細胞標志物的多重作用[Litvinov SV等，1997 ；Munz等，2009]，確立核Ep-ICD在人類癌癥中的臨床重要性是非常重要的。最近報導了核Ep-ICD在人結腸癌中的初歩研究，但未報導在正常結腸上皮中的情況[Maetzel，2009]。鑒于在實體瘤中的極大異質性，其它人類癌癥中的核Ep-I⑶的臨床重要性依然有待確立。此外，已經表明EpCAM通過上調c-myc、細胞周期蛋白A和E而增加細胞增埴[Munz等,2004]。甲狀腺癌(TC)代表全部內分泌惡性腫瘤的90%，估計全球年發病率為122，800例，美國新診斷病例約為33，000例[Reis等，2005 Jemal等，2008]。退行發育性甲狀腺癌(ATC)是罕見的但卻是這種惡性腫瘤極具侵襲性的形式，占全部甲狀腺癌的不足2%。ATC通常表現為快速増大的頸部皰塊，在局部擴散，壓迫鄰近結構，具有擴散到局部淋巴結和遠端位置的趨勢[Pasieka JL等，2003;Are C和Shaha 2006]。大多數高度分化的甲狀腺癌具有極好預后，5年相對存活率高于95%，盡管其具有早期轉移趨勢。然而，分化較低的甲狀腺腫瘤-退行發育性和其它侵襲性轉移性甲狀腺癌可以是致命的，其生存時間中值范圍為4個月到5年[Are C和Shaha，2006]。臨床結局的這種變化可歸因于侵襲性和非侵襲性甲狀腺腫瘤在其惡性演變期間獲得的遺傳損傷的差異。ATC 的發病機制與 BRAF、RAS、β -聯蛋白、PIK3CA、TP53、AXIN1、PTEN 和 APC 基因的突變有關[有關綜述見Smallridge RC等，2009]。已經確定在ATC中的基因表達特征，其顯示絲氨酸/蘇氨酸激酶Polo樣激酶I (PLKl)上調，并且已對其作為ATC中的治療靶標的潛力進行了研究[Salvatore G等，2007CR ;Nappi TC等，2009]。然而，沒有已證實的鑒定侵襲性TC的預測性分子標志物。專利技術概沭本專利技術涉及甲狀腺癌的標志物。具體地說，EpCAM多肽及其結構域(特別是胞外域 EpEx和胞內域EP-ICD)和β-聯蛋白(本文統稱為“多肽甲狀腺癌標志物”)及編碼這類多肽及其結構域的多核苷酸(本文統稱為“多核苷酸甲狀腺癌標志物”)構成甲狀腺癌、特別是侵襲性甲狀腺癌、更特別是退行發育性甲狀腺癌(ATC)的生物標記。多肽甲狀腺癌標志物和多核苷酸甲狀腺癌標志物及其部分或片段有時在本文中統稱為“甲狀腺癌標志物”。 在本專利技術的ー些方面，術語“甲狀腺癌標志物”可包括Wnt蛋白和編碼Wnt蛋白的多核苷酸；因此在ー些方面“多肽甲狀腺癌標志物”包括fct蛋白，在ー些方面“多核苷酸甲狀腺癌標志物”包括編碼fct蛋白的多核苷酸。因此，甲狀腺癌標志物和與甲狀腺癌標志物相互作用的物質，可用于檢測、診斷、表征、分類和監測甲狀腺癌(即監測癌癥的進展或治療性治療的功效)，用于鑒定易患甲狀腺癌的受試者，以及用于測定預后或患者生存率。在本專利技術的多個方面，甲狀腺癌標志物，特別是Ep-I⑶、β-聯蛋白和EpEx，用于表征甲狀腺癌的侵襲性。在本專利技術的ー些方面，甲狀腺癌標志物用于測定轉移潛力或患者生存率。本專利技術還考慮用于評價甲狀腺組織的狀態的方法和甲狀腺癌的診斷和治療的方法。與測定其它標志物的方法相比，其中測定ー種或多種甲狀腺癌標志物的本專利技術方法可具有提高的靈敏度和/或特異性。提高的臨床靈敏度可以是靈敏度提高約5-10%、特別是提高6-9 %、更特別是提高8 %。在本專利技術方法的一個實施方案中，在腫瘤樣品檢出的ー種或多種甲狀腺癌標志物提供至少約80-99%甲狀腺癌臨床靈敏度，特別是90-95%、更特別是91%、92%、93%、94%、95%或98%甲狀腺癌臨床靈敏度。在其中在腫瘤樣品中檢出核Ep-ICD、核β-聯蛋白和胞質聯蛋白中的一種或多種的本專利技術的實施方案中，臨床靈敏度可大于約80-90%，更特別地大于約80-85%，最特別地大于約83%、84%、85%、90%臨床靈敏度和特異性可采用本領域技術人員已知方法測定。根據本專利技術的方法，可通過檢測樣品中以下物質的存在情況來評價樣品中的甲狀腺癌標志物(a)對應于標志物的多肽或多肽片段；(b)具有標志物與之基本相同的至少ー部分的轉錄的核酸或其片段；和/或(C)轉錄的核酸或其片段，其中所述核酸與標志物雜交。在本專利技術的ー個方面，提供用于檢測患者中與甲狀腺癌、特別是侵襲性甲狀腺癌、更特別是退行發育性甲狀腺癌相關的甲狀腺癌標志物的方法，所述方法包括或基本由以下步驟組成(a)從患者中獲得樣品；(b)檢測或鑒定樣品中的ー種或多種甲狀腺癌標志物，和(C)將檢測到的量與對標準物檢測到的量進行比較。根據本專利技術的方法，可通過例如檢測樣品中以下物質的存在情況，來對甲狀腺組織進行評價或表征(a)甲狀腺癌標志物；(b)具有多核苷酸甲狀腺癌標志物與之基本相同的至少一部分的轉錄的核酸或其片段；和/或(C)轉錄的核酸或其片段，其中所述核酸與多核苷酸甲狀腺癌標志物雜交。樣品中的甲狀腺癌標志物可通過本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2009.09.21 US 61/244,1731.一種用于檢測受試者的與甲狀腺癌有關的甲狀腺癌標志物的方法，所述方法包括或基本由以下步驟組成 (a)從患者中獲得樣品； (b)檢測或鑒定樣品中的ー種或多種甲狀腺癌標志物；和 (C)將檢測到的量與對標準物檢測到的量進行比較，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-ICD和/或β-聯蛋白。2.ー種用于診斷甲狀腺癌的方法，所述方法包括比較 (a)從受試者的樣品中提取的甲狀腺癌標志物的水平；和 (b)對照樣品中甲狀腺癌標志物的水平，其中甲狀腺癌標志物的水平相對于對照的相應水平的顯著差異表明甲狀腺癌，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-ICD、β_聯蛋白和任選EpEx03.權利要求I或2的方法，其中所述受試者有患甲狀腺癌的風險或需要篩查。4.ー種用于對甲狀腺樣品進行表征或分類的方法，所述方法包括檢測甲狀腺癌標志物的表達相對于對照的差異，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-I⑶、β -聯蛋白和任選ΕρΕχ。5.一種診斷受試者的甲狀腺癌的特定疾病期的方法，所述方法包括測定獲自受試者的樣品中甲狀腺癌標志物的狀態，其中所述標志物的異常狀態表明存在特定疾病期，并且其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-I⑶或β-聯蛋白。6.ー種用于鑒定作為甲狀腺癌治療的候選者的受試者的診斷方法，所述方法包括測定獲自受試者的樣品中甲狀腺癌標志物的狀態，其中樣品中甲狀腺癌標志物的異常狀態表明治療是需要的或必需的，且其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-I⑶、β -聯蛋白和任選ΕρΕχ。7.權利要求5或6的方法，其中所述異常狀態可以是高狀態、低狀態或負狀態。8.一種用于診斷受試者的甲狀腺癌的侵襲性或轉移潛力的方法，所述方法包括 (a)從受試者中獲得樣品； (b)檢測樣品中的甲狀腺癌標志物；和 (C)將檢測到的量與對標準物檢測到的量進行比較，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-ICD和/或β-聯蛋白。9.權利要求I或8的方法，其中所述標準物或對照包括在患較低級別甲狀腺癌的受試者中檢測到的水平或量。10.一種用于診斷受試者的退行發育性甲狀腺癌(ATC)的方法，所述方法包括 (a)使得自受試者的樣品與能夠測量目標甲狀腺癌標志物水平的試劑接觸，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-I⑶、β -聯蛋白和任選EpEx ;和 (b)根據與得自取自未患ATC的受試者或在不同時間取自受試者的類似樣品的對照水平相比，受試者樣品中Ep-I⑶和β -聯蛋白中的至少ー種的水平升高和任選EpEx降低，提供在所述受試者中的ATC的診斷。11.一種用于監測受試者的甲狀腺癌進展的方法，所述方法包括(a)檢測在第一時間點來自患者的樣品中的甲狀腺癌標志物；(b)在隨后的時間點重復步驟(a);和(C)將步驟(a)和(b)中檢測到的水平進行比較，從而監測癌癥的進展，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-ICD或β-聯蛋白。12.權利要求1-11中任ー項的方法，其中所述甲狀腺癌標志物是通過下列步驟檢測的多肽 (a)使樣品與特異性結合多肽或其組成部分的結合劑接觸；和 (b)檢測樣品中相對于預先確定的標準的與結合劑結合的多肽量。13.一種用于檢測或診斷受試者的侵襲性甲狀腺癌或具有轉移潛力的甲狀腺癌的存在情況的方法，所述方法包括以下步驟 (a)提供與甲狀腺癌標志物特異性結合的結合劑； (b)在允許形成包含結合劑和甲狀腺癌標志物的復合物的條件下使結合劑與受試者的樣品接觸； (C)測定復合物的存在情況或量；和 (d)將所述量與標準進行比較以確定受試者的侵襲性甲狀腺癌或具有轉移潛力的甲狀腺癌的存在情況，其中所述甲狀腺癌標志物是Ep-ICD或β -聯蛋白。14.權利要求12或13的方...

【專利技術屬性】
技術研發人員：保羅·沃爾菲什，蘭巨·拉爾漢，
申請(專利權)人：保羅·沃爾菲什，蘭巨·拉爾漢，
類型：
國別省市：