脂質體制劑、制備方法及其應用技術

本發明專利技術公開了一種脂質體制劑、制備方法及其在治療由基因異常表達引起的相關疾病中的應用。所述的脂質體制劑其特征在于，包括互補雙陽性脂質、磷脂和長效脂質。制備方法為：將互補雙陽性脂質、磷脂、長效脂質的溶液混合后形成預制空囊泡，然后與核酸溶液混合，形成核酸脂質體制劑。本發明專利技術提供的脂質體制劑制備容易，能將核酸等藥物進行體內傳輸，發揮治療作用，可用于治療由基因異常表達引起的相關疾病。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種治療作用的體內傳輸制劑，尤其是一種脂質體制劑。
技術介紹
近年來，不同類型的核酸被用于治療一些疾病的研究，有望發展成為新一代的基因療法。這些核酸包括用于基因治療的DNA和RNA，及其模擬物和修飾的結構。其中，RNA包括小干擾核酸(small interfering RNA, si RNA)、微小 RNA (microRNA, mi RNA)、RNA 適配體、小配體RNA (small ligand RNA, sliRNA)等；DNA包括質粒等,這些核酸通過不同的機制發揮作用，如siRNA和miRNA通過RNA干擾(RNA interferring, RNAi)機制調節細胞內特定基因的表達水平，當siRNA或miRNA進入細胞內后，這些雙鏈RNA能與細胞內的特定蛋白結合形成 RNA 誘導的沉默復合物(RNAInducing Silencing Complex, RISC), siRNA 在 RISC中解鏈后通過序列互補識別并與mRNA結合，mRNA被切割，達到下調基因表達的效果。RNAi 提供了一種與靶基因互補并阻斷編碼蛋白的mRNA表達的基因治療方法。RNAi有著廣泛的用途，靶向某一蛋白的siRNA和miRNA可以直接用化學合成的方法得到。大量的研究報道，siRNA可以在體外和體內的模型中特異性地下調靶蛋白，至目前為止，有數十種siRNA已進入臨床試驗階段。然而，目前siRNA及其它核酸藥物必須面臨兩個問題，第一，它們在細胞質中抗核酸酶的降解能力較弱，第二是通過全身給藥的的裸露siRNA或miRNA很難透過細胞膜進入到細胞內與RISC結合。這類核酸藥物可以通過在分子中引入化學修飾的核苷酸，如硫代磷酸基團，然而這些化學修飾只能有限地保護核酸不被核酸酶降解，并且可能會降低核酸的活性。核酸藥物可以用載體系統進行細胞內傳輸，如多聚體、陽性脂質體或化學修飾的結構，其它如膽固醇分子進行共價連接。然而，有必要改進傳輸系統以提高siRNA和miRNA在體內的穩定性和穿膜能力，同時盡可能地避免化學修飾所帶來的不利因素。但是核酸藥物所要面對的首要問題是穩定性，在血清或細胞中，在有核酸內切酶和外切酶存在的情況下，核酸藥物能被快速地降解，只有很短的半衰期(Zelphati，O等人，Antisense. Res. Dev. 1993(3) :323-338)。用化學修飾的方法來減少核酸在血清或細胞內降解解決了部分問題，如磷酸二酯鍵修飾，核苷酸修飾、或是糖環修飾等。但這些并不能完全解決問題，仍存在局限性。另一方面，核酸藥物用于治療仍然存在的問題是核酸藥物穿透細胞膜的能力有限。為了嘗試提高療效，研究人員用基于脂質體的載體系統來傳輸化學修飾或未修飾的核酸藥物。有大量研究報道，陽性脂質體可用來包載siRNA制備成核酸脂質體制劑，這些核酸脂質體制劑在體外、體外的實驗中得到了很好的驗證。盡管最近取得一些進展，但在本領域中，仍然需要改進基于核酸脂質體制劑的成分，以適用于一般治療。理想狀態下，這些組分具有高效的核酸包封率，具有高的藥脂比，保護核酸藥物不被細胞內核酸酶降解，適合全身傳輸，并提供適于細胞內傳輸的包裹好的核酸。此外，這些脂質體制劑應該要有很好的耐受性，并提供適當的治療指數，如核酸藥物的有效劑量且對病人沒有明顯的毒性。本專利技術提供了這樣的脂質體制劑，以及該脂質體制劑的制備方法，同時也提供了該脂質體制劑將核酸藥物導入哺乳動物體內的方法，用于疾病的治療。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種既容易制備又容易傳遞到靶組織的脂質體制劑，可用于治療由基因的異常表達引起的相關疾病。為了達到上述目的，本專利技術提供了一種脂質體制劑，其特征在于，包括互補雙陽性脂質、磷脂和長效脂質。優選地，所述脂質體制劑中互補雙陽性脂質、磷脂和長效脂質的摩爾百分比分別為 20 80%、10%和 10%。優選地，所述的互補雙陽性脂質包括第一陽性脂質和第二陽性脂質，第一陽性脂 質和第二陽性脂質在脂質體制劑中的摩爾百分比分別為20 60%;所述的第一陽性脂質為4- (N, N- 二甲基胺基)丁酸-6，9，28，31-四烯-19-三十七醇酯(heptatriaconta-6,9, 28，31-tetraen-19-yl-4- (dimethylamino) butanoate, CLOI)或 N, N-二甲基-2, 3_ 二亞油氧基丙胺(N, N-dimethyl- (2, 3-dilinoleyloxy) propylamine, DLinDMA);所述的第二陽性脂質為 3_(N,N-二甲基胺基)丙酸-膽固醇酯(cholesteryl3_(dimethylamino)propanoate,CL06)或2_(N,N-二甲基胺基)乙酸-膽固醇酯(cholesteryl2_(dimethylamino)acetate,CL08)。優選地，所述的磷脂為二酰基磷脂酰膽堿(distearyl phosphatidyl choline,DSPC)。優選地，所述的長效脂質為N-(2，3_ 二十四醚丙基)氨基甲酸聚乙二醇單甲醚酯(N_-I,2-dimyristyloxypropy 1-3-amine, PEG-c-DMA)、N-(聚乙二醇單甲醚基)氨基甲酸-6,9,28,31-四烯-19-三十七醇酯(heptatriaconta-6,9, 28, 31-tetra-en-19-ol methoxypoly (ethylene glycol) 2000carbamate, PEG-DLM)、N_ (聚乙二醇單甲醚基)氨基甲酸膽固醇酯(cholesterolmethoxy poly (ethylene glycol) 2000carbamate, PEG-Chol)、N-(聚乙二醇單甲釀基)氛基甲酸 _15-二十九醇酷(nonacosan-15-ol methoxypoly (ethyleneglycol) 2000carbamate, PEG-DMM)中的任意一種。優選地,還包括一種具有治療效果的藥物。進一步地，所述的藥物為核酸；所述的核酸為功能性RNA及其含有修飾的結構形式或模擬物和DNA及其含有修飾的結構形式或模擬物中的任意一種或幾種的混合物進一步地,所述的功能性RNA 為 siRNA (small ligand RNA,簡稱 sliRNA)、miRNA、小配體RNA和RNA適配體中的任意一種或幾種的混合物。本專利技術還提供了上述脂質體制劑的制備方法，其特征在于，將互補雙陽性脂質、磷月旨、長效脂質的溶液混合后形成預制空囊泡，然后與核酸溶液混合，形成核酸脂質體制劑。核酸脂質體制劑可由一種溶于有機溶劑(如乙醇和其易混溶的溶劑組成)的陽離子脂質與siRNA水溶液混合而成，包含陽離子脂質體的核酸混合物可立即作為藥物制劑使用或能冷藏保存備用；也可采用所屬領域的技術人員常用的方法進行化學加工。這種陽離子脂質復合物能夠用許多機械方法進行適當的處理，使其能夠成為固態或液態的核酸藥物。本專利技術還提供了上述脂質體制劑在治療由基因異常表達引起的相關疾病中的應用。本專利技術提供的脂質體制劑，可以用于藥學上可接受的核酸分子，如siRNA或miRNA等的體內傳輸，這種制劑可以預防和治療哺乳動物疾病，達到更本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種脂質體制劑，其特征在于，包括互補雙陽性脂質、磷脂和長效脂質。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳建新，彭薇，李鐵軍，主輝，倪燕，馮文建，
申請(專利權)人：百奧邁科生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：