本發明專利技術提供了一種采用TGF-beta(TGF-β)和Cox-2抑制劑的聯合應用來治療各種醫療疾患的組合物和方法，這些疾患包括由創傷和手術引起的皮膚疤痕，受傷和手術導致的角膜及視網膜疤痕，受傷和手術引起的內部器官疤痕，心臟病及手術引起的心臟組織疤痕，以及由于炎癥和受傷所致的肺、肝、腎纖維化。一個實例是使用siRNA抑制劑同時沉默TGF-β1和Cox-2，顯著降低了疤痕的形成。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術提供了 TGF- β I和Cox-2抑制劑的組合物和應用這個組合物治療各種人類疾患的方法，包括但并不限于創傷和手術引起的皮膚疤痕，受傷和手術導致的角膜及視網膜疤痕，受傷和手術引起的內部器官疤痕，心臟病及手術引起的心臟組織疤痕，以及由炎癥和受傷所致的肺、肝、腎纖維化。
技術介紹
TGF- g抗體可部分地減少疤痕形成暈 有大量的證據表明，傷口愈合受一系列細胞因子、生長因子及它們的受體調節(5-7)。這些調節因子通過一種復雜但有序的方式影響細胞的遷移、生長和增生，同時與嗜中性白細胞及巨噬細胞的浸潤、血管生成、纖維素增生、基質沉積、疤痕及表皮再生等有關。在傷口愈合過程中，除了血小板與巨噬細胞，成纖維細胞是細胞因子或生長因子的主要細胞來源。早期妊娠胎兒皮膚傷口的無疤痕愈合主要是特定的細胞因子或生長因子作用的結果O在這些因子中，轉化生長因子β (TGF-β)已經得到最廣泛研究，因為其與無疤痕愈合和帶有疤痕形成的愈合之間的轉變有關。TGF-β因歷史原因而稱為生長因子，其主要功能是調控細胞增殖和分化，和刺激細胞外基質的合成，諸如膠原。通過免疫組化方法發現TGF-β存在于未受傷的胚胎皮膚中，并且妊娠期無疤痕修復階段TGF-β的表達量很高。向正常無疤痕的胎兒傷口外源應用TGF-β可導致疤痕形成，同時還觀察到類似于成年人的炎癥反應。在成年鼠傷口中，TGF-β的促纖維化本質得到了證實，因為中和TGF-β抗體部分地減少了疤痕量。TGF-β刺激產生I型膠原，這是成年機體皮膚主要的膠原類型。但另一方面，TGF-β中和抗體并不能完全阻止成體皮膚疤痕形成，因而近期有一些研究對將TGF-β作為主要的疤痕形成因子提出了質疑(8-15)。研究發現，在受傷的Ε16動物中，伴隨著TGF- β 3水平的升高和延長的TGF- β I和TGF-β 2表達的下降和快速清除與有序的膠原沉積有關。相反，在受傷的Ε19模型中，伴隨著TGF- β 3表達的下降和延緩的TGF- β I和TGF- β 2表達的升高和延長與無序的膠原結構有關。這意味著TGF- β I和TGF- β 2表達的增加、TGF- β 3表達的下降是晚期妊娠胎兒傷口疤痕形成的主要原因。C0X-2抑制劑減少疤痕組織形成和提高組織拉伸強度在對胎兒傷口修復過程所涉及的白介素IL-6、IL-8和IL-10進行研究的過程中，近來C0X-2因為參與炎癥失調性疾病的發生，如類風濕病、骨關節炎、心血管疾病和癌癥形成(16-20)等，而受到了廣泛的關注。C0X-2經歷響應炎癥刺激即早期的上調反應(20，21)，如傷口炎癥反應。C0X-2通過產生前列腺素發揮作用，前列腺素調控所引起的炎癥反應的多個方面，包括誘發血管滲透、炎性細胞的浸潤和活化(22)。研究者對成人傷口修復過程中的C0X-2途徑和炎癥反應的其它方面的興趣逐漸增加(35)，因為這些早期事件能調節修復的效果。由于C0X-2參與炎癥反應，以及近期的一些研究闡明它在幾個方面參與成人的傷口修復(23-25)，有一些研究對C0X-2在胎兒傷口愈合中的作用進行考查。這些研究表明C0X-2酶在早期和晚期妊娠胎兒傷口中的表達存在差異。此外，在使用于早期胎兒傷口時，經顯示能調節皮膚的許多過程的C0X-2的產物PGE2能使愈合延遲并產生疤痕。在無疤痕修復中增加PGE2水平導致無疤痕愈合過程轉變為生成疤痕的修復，這一事實更突出表明了 C0X-2途徑在傷疤形成中的作用。盡管沒有研究指出PGE2是否對膠原沉積或膠原纖維有作用，但在胎兒傷口中使用PGE2后可以誘導炎 癥反應(26)。PEG2在具體情況下究竟是具有免疫抑制或抗炎的特性，還是作為一種促炎分子，很可能是由PEG2受體表達或活性的差異來決定的。有幾種合理的機理可以解釋為什么PGE2誘導胎兒傷口形成傷疤。PGE2能夠增強已知會干擾無疤痕愈合的急性炎癥反應，，從而通過炎性細胞的募集或活化來間接地促進疤痕的形成。PGE2處理能通過增加促纖維化因子TGF-β來延緩傷口愈合和促進疤痕組織沉積(27)。在Smad3缺失型小鼠中，TGF-β信號途徑被阻斷能夠加快愈合的速率，大量的數據表明抑制TGF-β 3水平對無傷疤的修復是至關重要的。最后，有數據表明，響應于PGE2的增加的成纖維細胞增殖表明，PGE2能夠直接刺激成纖維細胞增生，促進膠原產生和疤痕形成。之前的各種研究表明接觸PGE2后，膠原沉積和成纖維細胞增殖均增加，也支持了這一觀點。這些實質性的數據意味著低水平C0X-2表達和PGE2對于胎兒皮膚無疤痕修復是必需的，PGE2誘導胎兒皮膚疤痕形成的事實進一步支持了 C0X-2途徑在疤痕產生中的作用。用C0X-2抑制劑賽來考昔(celecoxib)治療切除傷口，考查了傷口愈合過程中C0X-2的作用，發現傷口部位的一些炎癥參數被顯著抑制(28)。傷口愈合的早期炎癥反應的降低對之后的傷口愈合過程產生極重要的影響，，即在不干擾表皮再生或不降低抗拉強度的情況下，減少疤痕組織形成。多靶標SiRNA組合物核酸干擾(RNA干擾、RNAi)是一種序列特異性的RNA降解過程，其理論上為任何基因的敲低或沉默提供了一個相對容易和直接的方式(33，34)。在自然發生的RNA干擾中，雙鏈RNA會經核糖核酸酶III/解旋酶蛋白——Dicer酶——的作用而裂解為小干擾RNA(siRNA)分子，這種小siRNA分子是一種具有19-23個核苷酸(nt)的雙鏈RNA (dsRNA)，在3’末端有2個核苷酸突出。這些siRNA整合到名為RNA誘導的沉默復合物(RISC)的多組分核糖核酸酶中。siRNA的一條鏈仍然連著RISC，這條鏈能指引復合物到達與RISC中的引導單鏈SiRNA(SS-SiRNA)序列互補的同源RNA。這種siRNA引導的核酸內切酶能消化同源的RNA，從而使其失活。有研究已經揭示，化學合成的含21-25個核苷酸的siRNA在哺乳動物細胞中顯示出非常明顯的RNAi效應，siRNA雜交(在末端或中間)的熱力學穩定性對決定分子的功能起到重要作用(33，36，37)。重要的是，目前還不能很有把握的預測在眾多靶向疾病基因的mRNA序列的候選siRNA序列中，哪一個才是最具RNAi活性的siRNA。相反，個別特異性候選siRNA多聚核苷酸或寡聚核苷酸序列合成后，必須在哺乳細胞培養物中測試以確定是否發生預期的干擾作用。siRNA的獨特優勢使得它在同一治療中能與多個siRNA雙鏈聯合來靶向多個疾病誘導基因，因為所有siRNA雙鏈都是化學同質的，來源一樣且制造工藝相同(33，36-40)。現在迫切需要提供有效的siRNA雙鏈靶向促炎因子TGF-β I、炎癥促進因子C0X-2和分化調控因子HoxBl，用于皮膚傷口的無疤痕愈合。更進一步的需要就是將這些siRNA雙鏈配制成多靶向siRNA組合物。此外，還需要提供一種治療方法來改善由受傷、手術和許多疾病引起的傷口的愈合效果。用于體內siRNA傳遞的組氨酸-賴氨酸聚合物(HKP)納米顆粒組氨酸-賴氨酸聚合物(HKP)是一種帶正電的分枝型聚合物，其已經用于質粒DNA和siRNA的體內傳導。最近，我們在各種組織類型中都將HKP用于siRNA傳導，包括瘤、眼睛、大腦、肺和關節。一對HK聚合物H3K4b和PT73本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：帕特里克·Y·陸，維拉·西蒙年科，大衛·埃文斯，約翰·J·徐，
申請(專利權)人：圣諾制藥公司，
類型：
國別省市：
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