本發明專利技術屬于天然有機化學領域，涉及一種從大興安嶺野生三顆針里提取純化小檗堿的方法，特別是涉及一種利用生物酶解、超聲波提取結合柱層析純化技術，純化小檗堿的新方法。其優點是：1、應用生物酶解技術，使細胞內小檗堿充分溶出。2、采用超聲波提取技術，有效成分受熱時間降低，活性損失少，產品生物活性高。3、硅膠柱層析和重結晶純化技術，使有效成分小檗堿的純度進一步提高，簡單易操作，生產成本大大降低，可以工業化使用。本發明專利技術利用生物酶解技術使有效成分盡可能溶出，再用超聲波提取，乙醇做溶劑，再經柱層析純化，最后用重結晶二次純化，將小檗堿純度提高到98.4％。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于天然有機化學領域，涉及一種從大興安嶺野生三顆針里提取純化小檗堿的方法，特別是涉及一種利用生物酶解、超聲波提取結合柱層析純化技術，純化小檗堿的新方法。
技術介紹
刺葉小檗，別名東北三顆針，落葉小灌木，生于高海拔石礫山坡。產于大興安嶺得布爾林業局大禿山和塔河林業局等地。高達100厘米余。樹皮暗灰黑色，枝上有細縱溝；枝條暗灰褐色，于短枝的基部生有5 8叉的刺；枝條下部的刺分叉更多，細而尖，呈暗灰色。葉簇生于短枝上，倒卵形，倒披針形或倒卵狀長圓形，葉長I 1. 8厘米，寬5 9毫米，基部楔形，先端圓或為鈍頭，邊緣有細針狀疏齒牙，葉兩面均為黃綠色，葉質較硬稍為革質；萼片6，其下有2 3個小苞?；▎紊诙讨Χ巳~叢中，很少有2花，花梗長約I厘米，花為淡黃綠色；花瓣6，較萼片為小，基部具2蜜脈；雄蕊6，觸它物則起顫動，藥為2裂。漿果，倒卵形，長約8毫米，成熟后暗紅色，花期6月；果期9月。成分根莖含有小檗胺，大葉小檗堿，藥根堿，木蘭花堿，小檗堿、掌葉防己堿、異治防己堿，非洲防己堿，氧化小檗堿，尖刺堿等。此外，全株均含有生物堿，香豆素，黃酮，香草酸，阿魏酸等。小檗堿具有鎮靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗潰瘍、降低血糖等多種功效。國內提取小檗堿工藝主要是酸水提取法及乙醇煎煮直接提純后經鹽酸沉淀而成，其純化效果遠遠不如運用生物酶解，超聲波強化提取再進行硅膠柱層析的效果。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服常規技術提取率較低、產品純度低等缺點，提供一種利用生物酶解，超聲波強化 提取再進行硅膠柱層析純化三顆針中小檗堿的方法，為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案是一種利用生物酶解藕聯超聲波強化提取，再結合柱層析純化小檗堿的新方法，其步驟如下(I)酶解三顆針粉碎后，采用復合纖維素酶，在40-50°C下酶解，保溫沉淀l_3h ；(2)超聲提取加入乙醇，超聲波提取，超聲頻率50-80KHZ，料液比1: 8_10，超聲時間50_80min，薄層層析檢測分析，回收乙醇，得粗提液；(3)得粗粉將所獲初提物用乙醇加熱溶解,用酸調其pH值為2. O 2. 5，靜置、過濾、并用水洗滌至中性，濃縮干燥得小檗堿粗提粉；(4)硅膠柱層析將所得粗粉溶于熱乙醇加適量硅膠攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上200-300目硅膠柱層析；(5)洗脫用乙酸乙酯-乙醇溶液以一定比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集小檗堿各階段洗脫液；(6)濃縮回收乙醇，將小檗堿各階段洗脫液濃縮，得含量為80%以上的鹽酸小檗堿粉末；(7)重結晶取小檗堿粉按一定的量加乙醇，加熱溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過夜，析出結晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結晶，如此反復兩次，得到精制的純度在98%以上的小檗堿成品。具體實施例方式實施案例1:一種利用生物酶解藕聯超聲波強化提取，再結合柱層析純化小檗堿的新方法，其步驟如下(I)酶解IOOg粉碎至20目的三顆針，采用復合纖維素酶，酶用量為底物的O. 2%，酶解溫度40°C，保溫 Ih (2)超聲提取加入50%乙醇，料液比1: 8，超聲波提取，超聲頻率50KHZ，超聲時間50min，薄層層析檢測分析，回收乙 醇，得粗提液；(3)得粗粉將所獲初提物用乙醇加熱溶解，用酸調其pH值為2.0，靜置、過濾、并用水洗滌至中性，濃縮干燥得小檗堿粗提粉；(4)硅膠柱層析將所得粗粉溶于熱乙醇加適量硅膠攪拌，烘干過60目篩，干法上樣，上200目硅膠柱層析；(5)洗脫用乙酸乙酯-乙醇溶液以5 I比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集小檗堿各階段洗脫液；(6)濃縮回收乙醇，將鹽酸小檗堿各階段洗脫液濃縮，得含量為87. 8%的鹽酸小檗堿粉末；(7)重結晶取小檗堿粉按一定的量加乙醇，加熱溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過夜，析出結晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結晶，如此反復兩次，得到精制的純度在984%的小檗堿成品。實施案例2 :—種利用生物酶解藕聯超聲波強化提取，再結合柱層析純化小檗堿的新方法，其步驟如下(I)酶解IOOg粉碎至30目的三顆針，采用復合纖維素酶，酶用量為底物的O. 4%，酶解溫度45°C，保溫 2h (2)超聲提取加入60%濃度的乙醇，超聲波提取，超聲頻率70KHZ，料液比1: 9，超聲時間60min，薄層層析檢測分析，回收乙醇，得粗提液；(3)得粗粉將所獲初提物用乙醇加熱溶解，用鹽酸調其pH值為2. 5，靜置、過濾、并用水洗滌至中性，濃縮干燥得小檗堿粗提粉；(4)硅膠柱層析將所得粗粉溶于熱乙醇加適量硅膠攪拌，烘干過80目篩，干法上樣，上300目硅膠柱層析；(5)洗脫用乙酸乙酯 -乙醇溶液以8 I比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集小檗堿各階段洗脫液；(6)濃縮回收乙醇，將小檗堿各階段洗脫液濃縮，得含量為87%的小檗堿粉末；(7)重結晶取小檗堿粉按一定的量加乙醇，加熱溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過夜，析出結晶，過濾，分離晶體，將剩余物用如上方法加熱溶解，重結晶，如此反復兩次，得到精制的純度在982%的小檗堿成品。實施案例3 :—種利用生物酶解藕聯超聲波強化提取，再結合柱層析純化小檗堿的新方法，其步驟如下(I)酶解IOOg粉碎至40目的三顆針，采用復合纖維素酶，酶用量為底物的O. 6%，酶解溫度50°C，保溫 3h ；(2)超聲提取加入70%濃度的乙醇，超聲波提取，超聲頻率80KHZ，料液比1: 10，超聲時間80min，薄層層析檢測分析，回收乙醇，得粗提液；(3)得粗粉將所獲初提物用乙醇加熱溶解，用鹽酸調其pH值為2. 0，靜置、過濾、并用水洗滌至中性，濃縮干燥得小檗堿粗提粉；(4)硅膠柱層析將所得粗粉溶于熱乙醇加適量硅膠攪拌，烘干過60目篩，干法上樣，上200目硅膠柱層析；(5)洗脫用乙酸乙酯-乙醇溶液以10 I比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集小檗堿各階段洗脫液；(6)濃縮回收乙醇，將小檗堿各階段洗脫液濃縮，得含量為85. 4%的小檗堿粉末；(7)重結晶取小檗堿粉按一定的量加乙醇，加熱溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過夜，析出結晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結晶，如此反復兩次，得到精制的純度在98. 32%的小檗堿成品。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種利用生物酶解藕聯超聲波強化提取，再結合柱層析純化小檗堿的新方法，其步驟如下：(1)酶解：三顆針粉碎后，采用復合纖維素酶，在40?50℃下酶解，保溫沉淀1?3h；(2)超聲提?。杭尤胍掖汲暡ㄌ崛。曨l率50?80KHZ，料液比1∶8?10，超聲時間50?80min，薄層層析檢測分析，回收乙醇，得粗提液；(3)得粗粉：將所獲初提物用乙醇加熱溶解，用酸調其pH值為2.0～2.5，靜置、過濾、并用水洗滌至中性，濃縮干燥得鹽酸小檗堿粗提粉；(4)硅膠柱層析：將所得粗粉溶于熱乙醇加適量硅膠攪拌，烘干過60?80目篩，干法上樣，上200?300目硅膠柱層析；(5)洗脫：用乙酸乙酯?乙醇溶液以一定比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集小檗堿各階段洗脫液；(6)濃縮：回收乙醇，將鹽酸小檗堿各階段洗脫液濃縮，得含量為80％以上的鹽酸小檗堿粉末；(7)重結晶：取小檗堿粉按一定的量加乙醇，加熱溶解，濃縮到原體積的十分之一，放置過夜，析出結晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結晶，如此反復兩次，得到精制的純度在98％以上的小檗堿成品。
【技術特征摘要】
1.一種利用生物酶解藕聯超聲波強化提取，再結合柱層析純化小檗堿的新方法，其步驟如下 (1)酶解 三顆針粉碎后，采用復合纖維素酶，在40-50°C下酶解，保溫沉淀l_3h ； (2)超聲提取 加入乙醇超聲波提取，超聲頻率50-80KHZ，料液比1: 8-10，超聲時間50-80min，薄層層析檢測分析，回收乙醇，得粗提液； (3)得粗粉 將所獲初提物用乙醇加熱溶解，用酸調其PH值為2. 0 2. 5，靜置、過濾、并用水洗滌至中性，濃縮干燥得鹽酸小檗堿粗提粉； (4)硅膠柱層析 將所得粗粉溶于熱乙醇加適量硅膠攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上200-300目硅膠柱層析； (5)洗脫 用乙酸乙酯-乙醇溶液以一定比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集小檗堿各階段洗脫液； (6)濃縮 回收乙醇，將鹽酸小檗堿...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張亞紅，姚德坤，姚德利，萬莉，
申請(專利權)人：大興安嶺林格貝有機食品有限責任公司，
類型：發明
國別省市：
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