本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌MOW-02-05及其篩選方法和應(yīng)用，該菌分離自間歇式厭氧污泥反應(yīng)器，能夠高效降解染料和生物產(chǎn)氫，利用該菌株對(duì)偶氮染料進(jìn)行脫色和對(duì)有機(jī)碳源進(jìn)行生物產(chǎn)氫。經(jīng)鑒定這株菌為Klebsiella?oxytoca?MOW-02-05，并將其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物保藏中心，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.5237。本發(fā)明專利技術(shù)得到的菌株可解決傳統(tǒng)厭氧反應(yīng)器處理偶氮染料廢水時(shí)存在的反應(yīng)器酸化的問題，適合應(yīng)用于印染染料廢水的生物處理。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于染料廢水凈化處理
，具體涉及一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05及其篩選方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
偶氮染料是合成染料的最主要的品種，廣泛應(yīng)用在印染、紡織和造紙等行業(yè)。偶氮染料具有-N=N-發(fā)色基團(tuán)，需要得到電子才能將偶氮鍵脫色還原，但是由于空氣中氧氣的存在，它們穩(wěn)定的存在自然環(huán)境中很難被微生物降解。偶氮染料的排放一方面會(huì)引起水體色度的增加，抑制水體中光合作用的過程，進(jìn)而影響到生物鏈各級(jí)生物的生長，破壞區(qū)域的水體生態(tài)系統(tǒng)；另一方面染料降解的中間產(chǎn)物(多為芳香胺類化合物)對(duì)動(dòng)植物、人類和生態(tài)環(huán)境具有嚴(yán)重的危害。目前能夠有效處理染料廢水，且經(jīng)濟(jì)、環(huán)保、可持續(xù)的方法是微生物處理法。在微生物法處理染料廢水工藝中，染料的降解效率是衡量反應(yīng)器處理能力的一個(gè)重要指標(biāo)，如何有效的將復(fù)雜有機(jī)碳源的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為生物能(產(chǎn)氫、產(chǎn)乙醇、產(chǎn)甲烷等)則是微生物處理廢水和可再生能源技術(shù)的另一個(gè)重要指標(biāo)。因此，篩選能同時(shí)高效降解染料和產(chǎn)能的細(xì)菌具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的間歇式厭氧污泥反應(yīng)器中微生物對(duì)染料的降解專一性強(qiáng)，馴化程度高，有利于篩選出高效降解染料與產(chǎn)氫的細(xì)菌。目前報(bào)道的很多細(xì)菌都具有染料降解或發(fā)酵產(chǎn)氫能力，但同時(shí)具有上述作用的細(xì)菌還未見報(bào)道。本專利技術(shù)因此而來。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的在于提供一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)M0W-02-05，解決了現(xiàn)有技術(shù)中染料廢水難以進(jìn)行生物降解、難以進(jìn)行凈化處理等問題。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案是一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02_05,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCC No. 5237。優(yōu)選的,所述細(xì)菌菌落圓點(diǎn)狀,淡黃色,表面光滑。優(yōu)選的，所述細(xì)菌的16S rRNA序列為SEQ No.1。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05的培養(yǎng)篩選方法，其特征在于所述方法包括將間歇式厭氧污泥反應(yīng)器中污泥樣品進(jìn)行稀釋后按照常規(guī)培養(yǎng)形成菌落，然后挑單菌落分離純化得到純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05 的步驟。優(yōu)選的,所述方法中還包括將所述純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)M0W-02-05菌株按照3 5%的接種量接入液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基的pH值控制在6. 8 7. 2范圍內(nèi)，培養(yǎng)溫度為33 38°C，培養(yǎng)時(shí)間為24h 48h，得到擴(kuò)大培養(yǎng)的產(chǎn)酸克雷伯氏菌 M0W-02-05 菌株。 優(yōu)選的，所述方法中所述的液體培養(yǎng)基以其組分的配比計(jì)包括蛋白胨10重量份數(shù)，酵母膏5重量份數(shù)，氯化鈉10重量份數(shù)，水1000重量份數(shù)，且液體培養(yǎng)基的pH值控制在 6. 8 7. 2。本專利技術(shù)的又一目的在于提供一種所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05在染料廢水凈化處理以及生物產(chǎn)氫中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用中以所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株為菌種，碳源為電子供體，偶氮染料為電子受體，同時(shí)進(jìn)行脫色和產(chǎn)氫作用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用中所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株進(jìn)行培養(yǎng)的培養(yǎng)基組分為蔗糖6. 84重量份數(shù)，染料O. 327重量份數(shù)，K2HPO41. O重量份數(shù)，KH2PO4 O. 5重量份數(shù)，(NH4)2SO4 2. O重量份數(shù)，MgSO4 · 7H20 O.1重量份數(shù)，微量元素溶液I重量份數(shù)。本專利技術(shù)的又一目的在于提供一種染料廢水凈化處理方法，其特征在于所述方法中以權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05菌株為菌種，碳源為電子供體，偶氮染料為電子受體，進(jìn)行脫色凈化處理。使用的微生物產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05菌株分離自中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)蘇州研究院的環(huán)境科學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的間歇式厭氧污泥反應(yīng)器，現(xiàn)在已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，分類命名為Klebsiella oxytoca M0W-02-05,保藏編號(hào)為CGMCC No. 5237，保藏日期為2011年9月9日。該菌株的篩選方法是使用常規(guī)的分離、純化和篩選過程，活化培養(yǎng)基(IL):蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化鈉10g, pH 7 ;篩選培養(yǎng)基(IL):葡萄糖l.Og,甲基橙0. 5g，K2HPO41.llg, KH2PO4 2. 09g, NaHCO3 0. 5g，NH4Cl 0. 28g，MgSO4 · 7H20 0. lg，酵母膏 0.1g ;厭氧脫色和生物產(chǎn)氫培養(yǎng)基(IL): 蔗糖6. 84g，甲基橙0.327g，K2HPO41. Og，KH2PO4 0. 5g,(NH4) 2S042. 0g, MgSO4 · 7H20 0. lg,微量元素溶液 Iml ;微量元素溶液(IL)FeSO4 · 7H205g，ZnSO4 · 7H20 0. Ollg, MnCl2 · 4H20 0. lg, CuSO4 · 5H20 0. 392g, Co (NO3)2 · 6H20 0. 248g,NaB4O7 · IOH2O 0. 177g, NiCl2 · 6H20 0. 025g。本專利技術(shù)提供的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)菌株，命名為M0W-02-05，此菌經(jīng)過Biolog微生物鑒定系統(tǒng)鑒定以及此菌16S rDNA序列分析，其屬于產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)中的成員。產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05的16S rDNA全基因序列已向美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的Genebank基因序列數(shù)據(jù)庫遞交，登錄號(hào)為FJ816026。產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05的微生物學(xué)特性1、形態(tài)學(xué)方面的特性微生物本身形態(tài)學(xué)特性菌體為革蘭氏陰性短桿狀，大小為(0.2 0.4)μ mX (2. O 2. 3) μ m，無鞭毛，有動(dòng)力，無芽孢，無莢膜。2、培養(yǎng)學(xué)方面的特性培養(yǎng)基用的是Luria-Bertani (LB)培養(yǎng)基。其在LB固體培養(yǎng)基上的微生物學(xué)特性菌落呈圓形，光滑，濕潤，表面凸起，中心不透明，邊緣規(guī)則，大小為l_3mm，有輕微異味。該菌為兼性厭氧菌。3、生理生化特征( I)桿狀；(2)革蘭氏陰性；(3)氧化/發(fā)酵(0/F) :F發(fā)酵型；(4)氧化酶陰性；(5) DNA 酶(37° C):陰性；(6)檸檬酸陽性；(7)乳糖陽性;(8)蔗糖陽性；(9)苯丙氨酸脫氨酶陰性；(10) D-葡萄糖，產(chǎn)酸陽性；(11) D-葡萄糖，產(chǎn)氣陽性；(12)甘露醇陽性；(13)尿素陽性；(14)丙二酸鹽陽性；(15)半乳糖陽性;(16)硝酸鹽還原 陽性；(17)木糖陰性；(18)蜜二糖陽性；(19)鼠李糖陽性；(20)纖維二糖陽性；(21)肌醇陽性；(22)吲哚陰性;(23)甲基紅陰性(24) V-P 實(shí)驗(yàn)陽性；通過生理生化檢測、Biolog微生物鑒定系統(tǒng)鑒定以及此菌16S rDNA序列分析均表明此菌為產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)中的成員，因此可以精確地將本專利技術(shù)的M0W-02-05分類為產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellao本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella?oxytoca)MOW?02?05，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.5237。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02_05,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCCNo. 5237。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05，其特征在于所述細(xì)菌菌落圓點(diǎn)狀，淡黃色，表面光滑。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05，其特征在于所述細(xì)菌的16S rRNA 序列為 SEQ No.1。4.一種權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05的培養(yǎng)篩選方法，其特征在于所述方法包括將間歇式厭氧污泥反應(yīng)器中污泥樣品進(jìn)行稀釋后按照常規(guī)培養(yǎng)形成菌落，然后挑單菌落分離純化得到純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05的步驟。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中還包括將所述純化的產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)M0W-02-05菌株按照3 5%的接種量接入液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基的PH值控制在6. 8 7. 2范圍內(nèi)，培養(yǎng)溫度為33 38°C，培養(yǎng)時(shí)間為24h 48h， 得到擴(kuò)大培養(yǎng)的產(chǎn)酸克雷伯氏菌M0W-02-05...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：虞磊，俞漢青，李文衛(wèi)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)蘇州研究院，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。