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    一種誘導纖維堆囊菌表達制備埃博霉素的方法技術

    技術編號:8677964 閱讀:216 留言:0更新日期:2013-05-08 22:25
    本發明專利技術涉及抗腫瘤藥物微生物發酵領域,公開了一種誘導纖維堆囊菌表達制備埃博霉素的方法。該方法包含如下制備步驟:S1.將纖維堆囊菌菌種培養至纖維堆囊菌生物量為0.8~1.2×109cfu/mL時,作為發酵菌種備用;S2.將S1中的發酵菌種加入發酵培養基中進行培養,當發酵液中纖維堆囊菌生物量大于等于1010cfu/mL時進行停止發酵培養,得發酵培養物;S3.在S2中的發酵培養物中加入誘導組合物進行誘導發酵培養,得誘導發酵培養物;S4.分離誘導發酵培養物中的埃博霉素。本發明專利技術采用的多因素誘導纖維堆囊菌高效表達埃博霉素,埃博霉素的單位表達量明顯提高。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及抗腫瘤藥物微生物發酵領域,更具體地,涉及。
    技術介紹
    埃博霉素Gpothilone)是一類大環內酯類化合物,從粘細菌亞目的纖維堆囊菌菌株發酵液中可以分離埃博霉素,其主要組分為Epothilone A和B。它與紫杉醇具有相同的抑制腫瘤細胞生長的作用機制,并且對多重耐藥腫瘤細胞和耐紫杉醇的腫瘤細胞均表現強大的抗癌活性。除具有活性方面的優勢之外,埃博霉素具有較紫杉醇簡單的化學結構和良好的水溶性,而且可以發酵法生產。埃博霉素分子結構如下:

    【技術保護點】
    一種誘導纖維堆囊菌表達制備埃博霉素的方法,其特征在于,包括如下步驟:S1.?發酵菌種的制備:將纖維堆囊菌菌種培養至纖維堆囊菌生物量為0.8~1.2×109cfu/mL時,作為發酵菌種備用;S2.?發酵培養:將S1中的發酵菌種加入發酵培養基中進行培養,當發酵液中纖維堆囊菌生物量大于等于1010cfu/mL時進行停止發酵培養,得發酵培養物;S3.?誘導發酵培養:在S2中的發酵培養物中加入誘導組合物進行誘導發酵培養,得誘導發酵培養物;S4.?分離誘導發酵培養物中的埃博霉素;其中,S3中所述的誘導組合物包含如下重量百分比的組分:5~15%?甘油、1~10%?色氨酸、1~10%?半胱氨酸、1~5%?酪氨酸、1~10%?2,3~二氫吡喃和1~10%?酵母提取物;S3中所述的誘導組合物的添加量為發酵培養物的1~10(體積)%;S3中所述的誘導發酵培養條件為:控制溫度32~35℃,PH7.2~7.5,在攪拌、通氣、光照條件下培養12~36h。

    【技術特征摘要】
    1.一種誘導纖維堆囊菌表達制備埃博霉素的方法,其特征在于,包括如下步驟:酵菌種的制備:將纖維堆囊菌菌種培養至纖維堆囊菌生物量為0.8 1.2 XlO9CfVmL時,作為發酵菌種備用;酵培養:將SI中的發酵菌種加入發酵培養基中進行培養,當發酵液中纖維堆囊菌生物量大于等于lO'fu/mL時進行停止發酵培養,得發酵培養物;導發酵培養:在S2中的發酵培養物中加入誘導組合物進行誘導發酵培養,得誘導發酵培養物; 離誘導發酵培養物中的埃博霉素; 其中,S3中所述的誘導組合物包含如下重量百分比的組分: 5 15%甘油、I 10%色氨酸、Γ10%半胱氨酸、I 5%酪氨酸、Γ10% 2,3 二氫吡喃和Γιο%酵母提取物; S3中所述的誘導組合物的添加量為發酵培養物的廣10 (體積)%; S3中所述的誘導發酵培養條件為:控制溫度32 35°C,PH7.2 .5,在攪拌、通氣、光照條件下培養12 36h。2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,S3中所述的誘導組合物包含 如下重量百分比的組分: 8^12%甘油、4 8%色氨酸、3 7%半胱氨酸、f 3%酪氨酸、3 7% 2,3 二氫吡喃和2飛%酵母提取物; 所述的誘導組合物的添加量為發酵培養物的3 7 (體積)%。3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,所述的誘導組合物包含如下 重量百分比的組分: 10%甘油、5%色氨酸、5%半胱氨酸、2%酪氨酸、5%2,3 二氫吡喃、4%酵母提取物; 所述的誘導組合物的添加量為發酵培養物的5 (體積)%。4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,S2中所述的發酵培養,發酵培養方法為:將SI中制備得到的發酵菌種按5 10 (體積)%的接種量加入發酵培養基中,控制溫度在25 30°C、PH 6.8^7.0...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:杜少平,夏楓耿,石笛戴南藝,黃魁英,趙培靜,秦鵬,藍碧鋒,張競立陳勉華,
    申請(專利權)人:廣州市微生物研究所,
    類型:發明
    國別省市:

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