靶向于鈣粘著蛋白-11的EC1結(jié)構(gòu)域的人源化抗體及相關(guān)組合物和方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域的人源化抗體及包含此類抗體的組合物（例如，藥物組合物）。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及通過施用治療有效量的本發(fā)明專利技術(shù)的人源化抗體來治療哺乳動(dòng)物受試者的鈣粘著蛋白-11介導(dǎo)的病癥的方法。適于通過本發(fā)明專利技術(shù)的方法進(jìn)行治療的鈣粘著蛋白-11介導(dǎo)的病癥包括炎性疾?。ɡ?，炎性關(guān)節(jié)疾病，諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）、纖維化和癌癥。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】靶向于鈣粘著蛋白-11的EC1結(jié)構(gòu)域的人源化抗體及相關(guān)組合物和方法相關(guān)申請本申請要求于2010年7月15日提交的美國臨時(shí)申請?zhí)?1/364,698的權(quán)益。以上申請的全部內(nèi)容都通過引用并入本文。
技術(shù)介紹
患有重度慢性關(guān)節(jié)炎癥的患者遭受嚴(yán)重的關(guān)節(jié)退化(包括骨和軟骨的破壞)，這導(dǎo)致了長期疼痛、畸形、關(guān)節(jié)功能的喪失、運(yùn)動(dòng)能力下降以及預(yù)期壽命縮短。關(guān)節(jié)炎癥與關(guān)節(jié)中細(xì)胞和炎性物質(zhì)的數(shù)量增加有關(guān)，這些細(xì)胞和炎性物質(zhì)引起了刺激、軟骨的磨損以及關(guān)節(jié)內(nèi)襯(jointlining)的腫脹。已知幾種不同的自身免疫性疾病觸發(fā)了關(guān)節(jié)中不當(dāng)?shù)幕蛘`定向的炎癥，從而在患有這些疾病的個(gè)體的關(guān)節(jié)中導(dǎo)致慢性炎癥。常見的炎性關(guān)節(jié)病癥包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、萊特爾氏綜合征以及強(qiáng)直性脊柱炎。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是最常見的炎性關(guān)節(jié)炎形式，其據(jù)估計(jì)影響到美國人口的大約1%，或者說大約210萬美國人。RA是一種慢性疾病，其特征在于關(guān)節(jié)的內(nèi)襯或滑膜的炎癥，并且隨著時(shí)間推移會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的骨和軟骨的損害。與男性相比，RA在女性中更為常見，并且多達(dá)3%的女性在她們的一生中可能發(fā)生類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。目前，RA的病因還未知。RA可以引起長期的關(guān)節(jié)損害，導(dǎo)致慢性疼痛、功能喪失以及失能。此外，最近的研究表明，患有RA的人，特別是其疾病沒有得到良好控制的那些人，可能具有更高的心臟病、中風(fēng)以及發(fā)生纖維化(尤其是肺纖維化)的風(fēng)險(xiǎn)。肺纖維化，包括特發(fā)性肺纖維化和放射誘導(dǎo)的纖維化，以及由吸煙、化學(xué)品接觸、硬皮病、結(jié)節(jié)病、治療性輻射、RA或狼瘡引起的纖維化，折磨著全球5,000,000名患者，以及美國的超過500,000名個(gè)體。特發(fā)性肺纖維化的5年死亡率約為80%，僅在美國每年就導(dǎo)致40,000例死亡。目前在美國或歐洲對(duì)于特發(fā)性肺纖維化還沒有已得到批準(zhǔn)的療法。因此，由RA和其他炎癥性狀況引起的纖維化和慢性關(guān)節(jié)炎癥是國際性的衛(wèi)生負(fù)擔(dān)。存在著開發(fā)用于預(yù)防和治療這些和其他病癥的新藥的需要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
在一個(gè)實(shí)施方式中，本專利技術(shù)涉及特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域的人源化抗體，該抗體包含含有選自SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67和SEQIDNO:69的氨基酸序列的抗體重鏈可變區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，該人源化抗體拮抗哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該人源化抗體包含含有SEQIDNO:69的抗體重鏈可變區(qū)。在另一實(shí)施方式中，本專利技術(shù)涉及特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域的人源化抗體，其包含含有SEQIDNO:69的抗體重鏈可變區(qū)和含有SEQIDNO:71的抗體輕鏈可變區(qū)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，該人源化抗體拮抗哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)。在另一實(shí)施方式中，本專利技術(shù)提供了治療需要的哺乳動(dòng)物受試者（例如，人）中鈣粘著蛋白-11介導(dǎo)的病癥（例如，炎性關(guān)節(jié)病癥）的方法。該方法包括對(duì)該受試者施用治療有效量的特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域并拮抗哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的人源化抗體，從而在該受試者中產(chǎn)生期望的治療效果。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，該人源化抗體包含含有SEQIDNO:69的抗體重鏈可變區(qū)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，鈣粘著蛋白-11介導(dǎo)的病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在又另一實(shí)施方式中，本專利技術(shù)涉及包含特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域的人源化抗體和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，該人源化抗體包含含有SEQIDNO:69的抗體重鏈可變區(qū)。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該藥物組合物進(jìn)一步包含第二藥劑，諸如緩解疾病的抗風(fēng)濕病藥或抗炎藥。本專利技術(shù)提供了對(duì)于治療人的由鈣粘著蛋白-11介導(dǎo)的炎癥和其它狀況具有改善的療效的新藥劑和療法。附圖簡要說明本專利或申請文件包含至少一個(gè)彩繪附圖。帶有彩色附圖的本專利或?qū)＠暾埞_的副本將根據(jù)請求并支付必要的費(fèi)用后由專利局提供。圖1A是示出了使用抗Cad-11抗體23C6、13C2以及27F3來檢測鈣粘著蛋白-11-EC1-5-Fc融合蛋白（見實(shí)心箭頭）的蛋白質(zhì)印跡。這些抗體并不識(shí)別也存在于該膜上的鈣粘著蛋白-11-EC1-Fc以及鈣粘著蛋白-11-EC1/2-Fc融合蛋白（關(guān)于印跡上鈣粘著蛋白-11-EC1-Fc和鈣粘著蛋白-11-EC1/2-Fc蛋白的位置見空心箭頭）。圖1B是描繪了如通過ELISA測定的，公開的鈣粘著蛋白-11抗體13C2、23C6以及5F82與人Cad-11-EC1-5-Fc融合蛋白的結(jié)合，而不與Cad-11-EC1-Fc融合蛋白結(jié)合的圖。相比之下，EC1抗體H1M1與Cad-11-EC1-Fc融合蛋白以及Cad-11-EC1-5-Fc融合蛋白兩者都結(jié)合。圖2是參與鈣粘著蛋白結(jié)合的人Cad-11（SEQIDNO:3）、MN-Cad（SEQIDNO:4）以及Cad-8（SEQIDNO:5）的EC1結(jié)構(gòu)域的前34個(gè)氨基酸的氨基酸序列比對(duì)。包含延伸至鈣粘著蛋白反受體的口袋中的殘基的供體序列通過在序列的左側(cè)一半加下劃線來表示，并且該口袋序列的殘基通過在SEQIDNO:3中的序列的右側(cè)一半加下劃線來表示。圖3是描繪了如通過ELISA所測定的，鈣粘著蛋白-11結(jié)合Fab與人Cad-11EC1結(jié)構(gòu)域肽以及Cad-11-EC1-Fc融合蛋白結(jié)合，但不與Cad-8或MN-CadEC1結(jié)構(gòu)域肽結(jié)合的圖?？寺?證明了與Cad-11EC1結(jié)構(gòu)域肽以及融合蛋白的明顯結(jié)合，而不與MN-Cad或Cad-8EC1結(jié)構(gòu)域肽結(jié)合。圖4是描繪來自體外Cad-11細(xì)胞聚集分析的數(shù)據(jù)的圖。加入到培養(yǎng)基中的Cad-11拮抗劑，例如由抗Cad-11抗體13C2制備的Fab，或不同濃度的針對(duì)鈣粘著蛋白-11的EC1結(jié)構(gòu)域的前35個(gè)氨基酸的抗鈣粘著蛋白-11EC1Fab（標(biāo)示為EC1Fab克隆7），阻止了Cad-11介導(dǎo)的431-D-11細(xì)胞的聚集?？光}粘著蛋白-11EC1Fab（克隆7）在從0.3μg/ml至10μg/ml范圍內(nèi)的所有測試濃度下抑制了A-431-D-11表皮樣癌細(xì)胞的聚集。相比之下，由13C2抗鈣粘著蛋白-11抗體制備的Fab僅在10μg/ml的濃度下抑制細(xì)胞聚集。圖5是描繪來自第二體外Cad-11細(xì)胞聚集分析的數(shù)據(jù)的圖。431-D-11細(xì)胞的聚集在加入SME培養(yǎng)基（標(biāo)示為對(duì)照）、不同濃度的含有與人IgG2鉸鏈域、CH2和CH3結(jié)構(gòu)域融合的Cad-11的EC1結(jié)構(gòu)域的融合蛋白（標(biāo)示為Cad-11-EC1-Fc）、不同濃度的針對(duì)鈣粘著蛋白-11的EC1結(jié)構(gòu)域的前35個(gè)氨基酸的抗鈣粘著蛋白-11EC1Fab（標(biāo)示為Cad-11EC1Fab）或不同濃度的對(duì)照抗綠色熒光蛋白（抗-GFP）Fab（標(biāo)示為GFPfAb）之后40分鐘顯示。抗鈣粘著蛋白-11EC1Fab（克隆7）在3μg/ml、1μg/ml和0.1μg/ml的濃度下抑制表達(dá)Cad-11的431-D-11細(xì)胞的聚集。EC1-Fc融合蛋白在3μg/ml的濃度下抑制431-D-11細(xì)胞的聚集。相比之下，抗-GFPFab在任何測試濃度下都沒有顯著地抑制細(xì)胞聚集。圖6是描繪使用體外細(xì)胞聚集試驗(yàn)，各種抗鈣粘著蛋白-11EC1Fab對(duì)Cad-11介導(dǎo)的細(xì)胞聚集本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2010.07.15 US 61/364,6981.一種特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域并拮抗所述哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的人源化抗體，該抗體包含由SEQIDNO:69組成的抗體重鏈可變區(qū)和由SEQIDNO:71組成的抗體輕鏈可變區(qū)。2.權(quán)利要求1的人源化抗體，其中所述抗體抑制一種或多種鈣粘著蛋白-11介導(dǎo)的活性，所述活性選自：所述哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)與一個(gè)或多個(gè)其他鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的結(jié)合、表達(dá)所述哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的細(xì)胞的聚集、酶表達(dá)的誘導(dǎo)、細(xì)胞因子表達(dá)的誘導(dǎo)、生長因子表達(dá)的誘導(dǎo)、表達(dá)所述哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的細(xì)胞的遷移以及軟骨的破壞。3.權(quán)利要求1的人源化抗體，其中所述抗體結(jié)合存在于SEQIDNO:3中的表位。4.權(quán)利要求1的人源化抗體，其中所述抗體結(jié)合存在于SEQIDNO:10中的表位。5.權(quán)利要求1的人源化抗體，其中所述抗體結(jié)合包含SEQIDNO:11的表位。6.權(quán)利要求1的人源化抗體，其中所述抗體是完整抗體。7.一種藥物組合物，其包含特異性結(jié)合哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的EC1結(jié)構(gòu)域并拮抗所述哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11蛋白質(zhì)的人源化抗體以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述抗體包含由SEQIDNO:69組成的抗體重鏈可變區(qū)和由SEQIDNO:71組成的抗體輕鏈可變區(qū)。8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述抗體抑制表達(dá)所述哺乳動(dòng)物鈣粘著蛋白-11的細(xì)胞的聚集。9.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述抗體是完整抗體。10.權(quán)利要求7的藥物組合物，其進(jìn)一步包含緩解疾病的抗風(fēng)濕病藥。11.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述緩解疾病的抗風(fēng)濕病藥是氨甲蝶呤。12.權(quán)利要求7的藥物組合物，進(jìn)一步包含抗炎藥。13.權(quán)利要求12的藥物組合物，其中所述抗炎藥是NSAI...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：J·G·麥克阿瑟，
申請(專利權(quán))人：希諾維克斯公司，
類型：
國別省市：