本發明專利技術適用于生物技術及醫學檢測技術領域，提供了一種腹瀉病毒檢測試劑盒及其檢測方法，該檢測試劑盒包含PCR反應液，該PCR反應液包含PCR緩沖液、MgCl2、dNTP、DNA聚合酶，還包含分別針對札如病毒1型及2、4型、諾如病毒1型、諾如病毒2型、輪狀病毒、腺病毒、星狀病毒的引物對及探針序列，其中各條探針序列5’端均連接有熒光基團，3’端均連接有淬滅基團，該PCR反應液還包含Homo-tag。本發明專利技術的檢測試劑盒可一次性檢測七種與腹瀉相關的病毒（亞型），相對于現有技術中的檢測方法操作簡便，讀取結果快速，避免了假陽性。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物技術及醫學檢測
，尤其涉及一種腹瀉病毒檢測試劑盒及其檢測方法。
技術介紹
在危害人體健康的感染性疾病中，感染性腹瀉的發病率居第3位。感染性腹瀉廣義系指由各種病原體(除霍亂、細菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒菌以外)引起的、以腹瀉為主要臨床特征的一組腸道傳染病，其臨床特點為起病急、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉，排水樣便或稀便，也可有發熱及全身不適等癥狀，病程短，病死率低。引起感染性腹瀉的病原體主要有三大類:細菌、病毒、寄生蟲，在我國主要以細菌和病毒為主。細菌性腹瀉主要以志賀氏菌、腸致瀉性大腸桿菌、致瀉性弧菌為主。病毒性腹瀉在感染性腹瀉中占有很大的比例，與之相關的病原體種類較多，主要包括:輪狀病毒(rotavirus)、諾如病毒(norovirus)、星狀病毒(astrovirus)和腸道腺病毒(adenovirus),此外札如病毒(Sapovirus)也可引起病毒性腹瀉。目前，實驗室檢測腹瀉病毒的方法主要包括:電鏡法、病毒分離培養法，免疫學和分子生物學檢測。就方法學的特點而論，電鏡法直觀、可靠，但是敏感性低，技術要求高，不適合大規模流行病學調查。病原體培養是病原學診斷的標準，但許多病毒培養很困難且陽性率較低或有些病毒不能培養。免疫熒光檢測(IFA)較靈敏、特異，但需較昂貴的熒光顯微鏡，操作較復雜，應用受到較大制約；血清學方法較簡便，但受機體產生抗體的時間制約，對病原體早期診斷的價值不大；與前幾種方法比較，分子生物學方法的敏感性和特異性均較高，能育觀地反映胃腸道局部的病原體，操作也不很復雜，試劑效期也較長。但同時檢測七種病毒(亞型)的檢測方法卻未見報道。如果針對每種腹瀉病毒分別檢測勢必延長了檢測周期，因此有必要開發一種操作簡便，準確高效，周期短的針對引起腹瀉的病毒的檢測方法。
技術實現思路
本專利技術實施例的目的在于提供一種腹瀉病毒檢測試劑盒及其檢測方法，旨在解決現有檢測技術中準確度不高，檢測周期長的問題。本專利技術實施例是這樣實現的，一種PCR反應液，包含PCR緩沖液、MgCl2, dNTP、DNA聚合酶，還包含:針對札如病毒I型的引物對SAPl-F(SEQ ID NO:1)、SAPl-R(SEQ ID N0:2)及探針SAPl-probe(SEQ ID NO:3)；針對札如病毒2、4 型的引物對 SAP2-F(SEQ ID N0:4)、SAP2_R(SEQ ID NO:5)及探針 SAP2-probe(SEQ ID NO:6)；針對諾如病毒I型的引物對NVl-F(SEQ ID NO: 7)、NVl-R(SEQ ID NO:8)及探針NVl-probe(SEQ ID NO:9)；針對諾如病毒2型的引物對 NV2-F(SEQ ID NO: 10)、NV2_R(SEQ ID N0:11)及探針NV2-probe(SEQ ID NO:12)；針對輪狀病毒的引物對RV-F(SEQ ID NO: 13)、RV-R(SEQ ID NO:14)及探針RV-probe(SEQ ID NO:15)；針對腺病毒的引物對Ade-F(SEQ ID NO: 16)、Ade-R (SEQ ID N0:17)及探針Ade-probe(SEQ ID NO:18)；針對星狀病毒的引物對Ast-F(SEQ ID NO: 19)、Ast-R(SEQ ID N0:20)及探針Ast-probe(SEQ ID NO:21)；其中各條探針序列5’端均連接有熒光基團，3’端均連接有淬滅基團；該PCR 反應液還包含 Homo-tag (SEQ ID NO: 22)。本專利技術實施例的另一目的在于提供一種用于檢測腹瀉病毒的PCR試劑盒，該試劑盒包括本專利技術的PCR反應液，該試劑盒可針對引起腹瀉的七種病毒(亞型)進行同步檢測。本專利技術實施例的再一目的在于提供一種腹瀉病毒的檢測方法，該檢測方法利用本專利技術的PCR試劑盒通過熒光定量PCR反應進行檢測，可針對引起腹瀉的七種病毒(亞型)進行同步檢測。本專利技術提供的針對引起腹瀉的病毒的檢測試劑盒利用熒光定量PCR技術，同時應用了同源加尾引物和改良分子信標探針技術，可一次性檢測七種與腹瀉相關的病毒(亞型)，縮短檢測時間，提高了檢測特異性，避免了假陽性的出現。本專利技術的腹瀉病毒檢測方法相對于現有技術具有操作簡便、檢測效率高、快速讀取結果等優點。具體實施方式 為了使本專利技術要解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合具體實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限定本專利技術。本專利技術實施例提供一種針對引起腹瀉的七種病毒(亞型)的PCR反應液，該PCR反應液包含PCR緩沖液、MgCl2、dNTP、DNA聚合酶，還包括以下引物和探針:針對札如病毒I型的引物和探針:SAPl-F:5’ -GCAAGCCCTCACGTAGCGAATGTGTCYTGTGCCATTGAGG-3’ (SEQ ID NO:1),SAPl-R:5’ -GCAAGCCCTCACGTAGCGAAGTGTATGGAACATTGTGGC TYTC-3’ (SEQ IDNO:2)，SAPl-probe:5’ -CGCTGCATCAAYCATATGATATATGTGGCGGCAGCG-3’ (SEQ ID NO:3)；針對札如病毒2、 4型的引物和探針:SAP2-F:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAATGACCAGGCTCTCGCCAC-3，(SEQ ID NO:4)，SAP2-R:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAATGGTCCAATGGTGTCCTCDG-3，(SEQ ID NO:5)，SAP2-probe:5’-CCCTCCACYACCAAATTAGTGTTTGAAATGGAGGG-3，(SEQ ID NO:6)；針對諾如病毒I型的引物和探針:NV1-F:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACGCTGGATGCGNTTCCAT-3，(SEQ ID NO:7)，NVl-R:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACCTTAGACGCCATCATCATTTAC-3，(SEQ ID NO:8),NVl-probe:5，-CCGTGGAAGATYGCGRTCTCCTGTCCACGG-3’ (SEQ ID NO:9)；針對諾如病毒2型的引物和探針:NV2-F:5’ -GCAAGCCCTCACGTAGCGAAATGTTCAGRTGGATGAGRTTCTCWGA-3’ (SEQ IDNO:10),NV2-R:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAATCGACGCCATCTTCATTCACA-3’ (SEQ ID NO: 11)，NV2-probe:5，-CGCACGATCGCCCTCCCACGTGCG-3’ (SEQ ID NO: 12)；針對輪狀病毒的弓丨物和探針:RV-F:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAACCATCTACACATGACCCTC-3，(SEQ ID NO: 13)，RV-R:5，-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACACATAACGCCCCTATAGCC-3’ (SEQ ID NO: 14)，RV-probe:5，-CCGA本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種PCR反應液，包含PCR緩沖液、MgCl2、dNTP、DNA聚合酶，還包含：針對札如病毒1型的引物對SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2及探針SEQ?ID?NO:3；針對札如病毒2、4型的引物對SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5及探針SEQ?ID?NO:6；針對諾如病毒1型的引物對SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8及探針SEQ?ID?NO:9；針對諾如病毒2型的引物對SEQ?ID?NO:10、SEQ?ID?NO:11及探針SEQ?ID?NO:12；針對輪狀病毒的引物對SEQ?ID?NO:13、SEQ?ID?NO:14及探針SEQ?ID?NO:15；針對腺病毒的引物對SEQ?ID?NO:16、SEQ?ID?NO:17及探針SEQ?ID?NO:18；針對星狀病毒的引物對SEQ?ID?NO:19、SEQ?ID?NO:20及探針SEQ?ID?NO:21；其中各條探針序列5’端均連接有熒光基團，3’端均連接有淬滅基團；所述PCR反應液還包含序列為SEQ?ID?NO:22的Homo?tag。
【技術特征摘要】
1.一種PCR反應液，包含PCR緩沖液、MgCl2, dNTP、DNA聚合酶，還包含: 針對札如病毒I型的引物對SEQ ID NOiUSEQ ID N0:2及探針SEQ ID NO:3 ； 針對札如病毒2、4型的引物對SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5及探針SEQ ID NO:6 ； 針對諾如病毒I型的引物對SEQ ID NO:7, SEQ ID N0:8及探針SEQ ID NO:9 ； 針對諾如病毒2型的引物對SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11及探針SEQ ID NO: 12 ； 針對輪狀病毒的引物對SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14及探針SEQ ID NO: 15 ； 針對腺病毒的引物對SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17及探針SEQ ID NO: 18 ； 針對星狀病毒的引物對SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:20及探針SEQ ID N0:21 ； 其中各條探針序列5’端均連接有熒光基團，3’端均連接有淬滅基團； 所述PCR反應液還包含序列為SEQ ID NO: 22的Homo-tag。2.如權利要求1所述的PCR反應液，其特征在于，所述熒光基團選自FAM...
【專利技術屬性】
技術研發人員：扈慶華，姜伊祥，石曉路，李迎慧，張海龍，林一曼，邱亞群，
申請(專利權)人：深圳市疾病預防控制中心，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。