本發(fā)明專利技術(shù)涉及用于治療和預(yù)防奈瑟氏球菌疾病的免疫原性組合物和疫苗。本發(fā)明專利技術(shù)的免疫原性組合物包含Hsf(也稱為Msf)和Opc奈瑟氏球菌抗原。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些抗原是兩種機(jī)制，通過所述機(jī)制腦膜炎奈瑟氏球菌結(jié)合宿主玻連蛋白(以促進(jìn)粘附和/或逃避宿主補(bǔ)體介導(dǎo)的殺死)。因此，包含兩種抗原的疫苗可以有利地導(dǎo)致免疫應(yīng)答，所述免疫應(yīng)答能夠更好地殺死奈瑟氏球菌菌株并且以其他方式預(yù)防對于疾病發(fā)生所需的玻連蛋白相關(guān)的奈瑟氏球菌補(bǔ)體介導(dǎo)的殺死耐受性和/或奈瑟氏球菌粘附事件。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及奈瑟氏球菌(Neisserial)免疫原性組合物和疫苗、它們的生產(chǎn)和這樣的組合物在藥學(xué)中的用途的領(lǐng)域。更具體地，它涉及疫苗組合物，所述疫苗組合物包含Hsf和Opc抗原的組合，其具有降低奈瑟氏球菌病原體的補(bǔ)體介導(dǎo)的殺死耐受性。背景 細(xì)菌中的奈瑟氏球菌菌株是很多人類病變的致病因子，需要開發(fā)針對這些致病因子的有效疫苗。特別是，淋病奈瑟氏球菌{Neisseria gonorrhoeae)和腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)所引起的病變可通過接種疫苗而治療。淋病奈瑟氏球菌是淋病的病原體，淋病是世界上最頻繁報道的性傳播疾病之一，估計每年有6200萬例的發(fā)病率(Gerbase等人1998 Lancet 351 ；(增刊3)2-4)。淋病的臨床表現(xiàn)包括泌尿生殖 道、咽喉或直腸的粘膜炎癥和新生兒眼睛感染。婦女中漸增的淋球菌感染可以導(dǎo)致不孕、異位妊娠、慢性盆腔炎疾病和卵管卵巢膿腫形成。敗血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎和腦膜炎與復(fù)雜淋病相關(guān)。大量對抗生素耐受的淋球菌菌株有助于與淋病相關(guān)的增加的發(fā)病率和并發(fā)癥。用抗生素治療淋病的一個有吸引力的替代方案將是使用接種疫苗來預(yù)防淋病。目前不存在用于淋病奈瑟氏球菌感染的疫苗。腦膜炎奈瑟氏球菌是一種重要的病原體，特別是在兒童和年輕人中。敗血癥和腦膜炎是侵襲性腦膜炎球菌病(MD)的最嚴(yán)重威脅生命的形式。這種疾病由于其較高的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)成為全世界的健康問題。根據(jù)莢膜多糖的抗原差異，已經(jīng)鑒定出了 13種腦膜炎奈瑟氏球菌血清群，最常見的是A、B和C，它們導(dǎo)致全世界90%的該疾病。血清群B是歐洲、美國和拉丁美洲幾個國家中腦膜炎球菌病的最常見原因。已經(jīng)開發(fā)了基于血清群A、C、W和Y的莢膜多糖的疫苗，它們表現(xiàn)出控制腦膜炎球菌病的爆發(fā)(Peltola等人，1985 Pediatrics 76 ;91_96)。然而，血清群B的免疫原性較差，且僅誘導(dǎo)主要IgM同種型的短暫抗體應(yīng)答(Ala’Aldeen D和Cartwright K 1996, J.1nfect.33 ; 153-157)。因此，目前還沒有能夠針對導(dǎo)致絕大多數(shù)溫帶國家中大多數(shù)該疾病的血清群B腦膜炎球菌的廣泛有效的疫苗。尤為嚴(yán)重的是，血清型B疾病在歐洲、澳大利亞和美洲的發(fā)生率日益增加，主要是在5歲以下的兒童中。針對血清群B腦膜炎球菌的疫苗的開發(fā)提出了具體困難，即由于多糖莢膜與人神經(jīng)細(xì)胞粘附分子的免疫學(xué)相似性導(dǎo)致其免疫原性較差。因此，已經(jīng)將疫苗生產(chǎn)的策略集中于腦膜炎球菌外膜的表面暴露結(jié)構(gòu)，但卻已經(jīng)被這些抗原在菌株之間的顯著變異所阻礙。進(jìn)一步開發(fā)已經(jīng)導(dǎo)致引入由外膜囊泡制成的疫苗，所述外膜囊泡將含有構(gòu)成細(xì)菌膜的正常內(nèi)容物的許多蛋白。這些之一是針對腦膜炎奈瑟氏球菌血清群B和C的VA-MENGOC-BC Cuban 疫苗(Rodriguez 等人 1999 Mem Inst.0swaldo Cruz, Rio deJaneiro 94; 433-440)。該疫苗設(shè)計用于打擊在古巴的侵襲性腦膜炎球菌疾病爆發(fā)，使用莢膜多糖AC疫苗的接種疫苗項目還沒有消除該疾病爆發(fā)。流行血清群是B和C，且VA-MENGOC-BC 疫苗在控制爆發(fā)中是成功的，估計83%的疫苗針對腦膜炎奈瑟氏球菌的血清群 B 菌株是有效的(Sierra 等人 1990 In Neisseria, Walter Gruyter, Berlin, Μ.Atchman 等人(編輯)p 129-134，Sierra 等人 1991，NIPH Ann 14; 195-210)。該疫苗針對特定爆發(fā)是有效的，但是引發(fā)的免疫應(yīng)答不能保護(hù)免于腦膜炎奈瑟氏球菌的其他菌株。隨后在拉丁美洲在由同源和異源血清群B腦膜炎球菌菌株引起的流行病期間進(jìn)行的效力研究已經(jīng)顯示出在較大兒童和成人中的一些效力，但其在處于感染最大風(fēng)險中的較小兒童中的效率顯著更低(Milagres等人1994，Infect.Tmmun.62; 4419-4424)。值得疑問的是這樣的疫苗將在具有多菌株地方性疾病的國家如英國將是如何有效的。針對異源菌株的免疫原性研究已經(jīng)表現(xiàn)出僅僅有限的交叉反應(yīng)血清殺菌活性，尤其是在幼兒中(Tappero 等人 1999，JAMA 281; 1520-1527)。在挪威使用在斯堪的納維亞流行的那些典型的血清型B分離株開發(fā)了第二種外膜囊泡疫苗(Fredriksen等人1991，NIPH Ann, 14; 67-80)。該疫苗在臨床試驗中進(jìn)行測試，并且發(fā)現(xiàn)在29個月后具有57%的保護(hù)效力(Bjune等人1991，Lancet, 338;1093-1096)。然而，在疫苗中使用外膜囊泡伴隨一些問題。例如，OMV含有毒性脂多糖，并且它們可能含有或菌株特異性或可變表達(dá)的免疫顯性抗原。已經(jīng)描述了數(shù)個工藝，其可以用于克服外膜囊泡制劑疫苗的一些問題。WOO1/09350描述了解決一些這些問題的工藝，其例如通過降低毒性和修飾外膜囊泡上存在的抗原來實現(xiàn)。當(dāng)前可用的抗腦膜炎球菌疫苗存在不同的問題。基于蛋白的外膜疫苗傾向于僅針對少數(shù)菌株是特異性且有效的。多糖疫苗也是不理想的，因為它們傾向于引發(fā)較差且短暫的免疫應(yīng)答，特別是針對血清群B (Lepow等人1986; Peltola 1998, Pediatrics 76;91-96)。奈瑟氏球菌感染代表相當(dāng)大的健康護(hù)理問題，在淋病奈瑟氏球菌的情況下對其沒有疫苗可用，并且在腦 膜炎奈瑟氏球菌的情況下可用的疫苗在其保護(hù)免于異源菌株的效力和能力中具有限制。此外，已經(jīng)認(rèn)識到，致病性奈瑟氏球菌可以通過用宿主玻連蛋白和因子H包被自身而逃避宿主補(bǔ)體介導(dǎo)的殺死。很明顯，需要開發(fā)針對奈瑟氏球菌感染的優(yōu)異的疫苗，這將改進(jìn)對目前可用疫苗的效力，并且允許針對更廣泛范圍菌株的保護(hù)。此外，具有失活細(xì)菌的補(bǔ)體介導(dǎo)的殺死耐受性能力的疫苗將是特別有用的。圖注 附圖說明圖1.表達(dá)Msf的無莢膜H44/76 (GB)衍生物與人Vn結(jié)合，無論Opc是否表達(dá)。A.將Vn的活化形式(aVn)固定在ELISA板上，并且用所示的不同Nm表型覆蓋。通過使用抗Nm抗血清和堿性磷酸酶綴合的二級抗體評價腦膜炎球菌粘附于aVn包被的板上。B.在反向?qū)嶒炘O(shè)置中，用aVn覆蓋固定的細(xì)菌，并且使用多克隆抗Vn抗血清檢查蛋白結(jié)合。結(jié)果來自一式兩份實驗中的一次代表性實驗。C.與人Vn相比，表達(dá)Msf的Nm與小鼠、牛、兔Vn的結(jié)合。與固定的玻連蛋白結(jié)合的表達(dá)Msf的細(xì)菌的水平類似，在表達(dá)Msf的細(xì)菌不存在的情況下可以發(fā)現(xiàn)可忽略不計的結(jié)合(兩種表型都是Opc缺陷變體)。圖2.表達(dá)Msf和Opc的腦膜炎球菌經(jīng)由不同的機(jī)制與生長調(diào)節(jié)素B/aVn的接頭區(qū)域結(jié)合。使用的生物素化的玻連蛋白肽(氨基酸43-68)的序列和取代:VA-26 是生物素-VTRGDVFTMPEDEYTVYDDGEEKNNA (SEQ ID NO: 15), VA-26S是生物素-VTRGDVFTMPEDEYsTVYsDDGEEKNNA (SEQ ID NO:16)， VA-26P 是生物素-VTRGDVFTpMPEDEYTpVYDDGEEKNNA (SEQ ID NO: 17) [Ys =硫酸化的 Y; Tp =磷酸化的Th(A-C).使用本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：M弗吉，
申請(專利權(quán))人：葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司，
類型：
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