一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法技術

一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，具體步驟如下：a、初代培養材料的剪取；b、材料的清洗和殺菌；c、培養室溫濕度管理。本發明專利技術提供的一種蘋果砧木初代培養防褐變方法,大幅度降低蘋果優良砧木初代培養中出現的褐變問題，可使蘋果砧木初代培養的褐變率減少到5%以下，同時提高了初代培養成活率,使成活率提高到90%，且操作簡單，生產成本降低，出苗率提高，短期內可獲得大量材料，在生產上體現為直接的經濟效益。

The cultivation of a method to prevent browning of Apple Rootstock primary tissue culture

The cultivation of a method to prevent browning of Apple Rootstock in vitro early, specific steps are as follows: A, primary culture of material B, material cutting; cleaning and sterilization; C, culture temperature and humidity management. An early Apple Rootstock provided the cultivation of anti browning method, greatly reduce the problem of browning of Apple Rootstock in the early cultivation of excellent, can make the Apple Rootstock primaryculture browning rate reduced to 5%, while improving the survival rate of primary culture, the survival rate increased to 90%, and the operation is simple, the cost of production reduced the emergence rate increased, the short term can obtain a large amount of materials in production reflects the direct economic benefits.

【技術實現步驟摘要】
一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法
本專利技術涉及植物組織培養
，具體是一種涉及蘋果砧木初代培養防褐變的方法。
技術介紹
近年來，隨著科學技術的迅猛發展，植物組織培養技術已進入生產應用階段，廣泛應用于花卉、果樹苗木的大規模離體快繁。植物組培脫毒快繁在人工控制條件下一年四季生產，并可在短時間內獲得大量組培脫毒苗木。但一些優良的蘋果砧木組培苗由于在組培初代培養過程中極易發生褐變，使得初代培養成活率極低，從而限制了蘋果優良砧木組培苗的大量繁殖和生產，制約了蘋果優良砧木規模化、產業化生產和推廣。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是針對現有技術中蘋果優良砧木初代培養易褐變，且引種困難，限制了蘋果優良砧木的大量繁殖和生產，制約了蘋果優良砧木規模化、產業化生產和推廣的問題，提供的一種蘋果優良砧木組培初代培養防褐變方法。該方法大幅度降低了蘋果優良砧木組培初代培養中出現的褐變問題，提高了初代培養成活率。為解決本專利技術的技術問題采用如下技術方案：一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，具體步驟如下：a、初代培養材料的剪取：5-6月份，選連續晴天的第3或第4天的早晨，選取蘋果砧木1-2年生、健壯的春梢頂芽和頂芽下面的第一側芽，切取1.2-1.5cm長的帶芽莖段，剪去葉子，放入盛有無菌水的密閉培養瓶內，備用；b、材料的清洗和殺菌：將帶芽莖段在2‰的84消毒液中浸泡5-10分鐘后在流水下沖洗2-5min，放入洗潔精稀釋液中清洗5-10min，后放入脫脂紗布在流水中沖洗下沖洗1.5-2h，控干水分后裝入干凈的燒杯，在超凈工作臺上用酒精浸泡20-22ms后無菌水沖洗2-3次，然后在汞溶液中處理4-5min，處理時不斷攪動使藥液均勻浸到處理材料表面，處理完成后移到無菌水中沖洗4-5次，然后在無菌培養皿中切0.4-0.5cm帶芽莖段，將做好的培養基分裝到培養瓶中，每瓶25-30ml，滅菌，每瓶接2個芽，移入培養室培養；c、培養室溫濕度管理：移入培養室的初代培養瓶苗先進行暗培養，用遮光布遮光，溫度21-23℃，濕度70％-75％，暗培養5-7天后去掉遮光布，在1500-1800Lx的光照下培養，溫度21-23℃，新芽萌發長到0.5-0.8cm時剪取新芽0.4-0.6cm轉接，每瓶接2個芽，轉接后光照增加到2200-2500Lx，溫度21-23℃，20-25天后等新芽基部長出從生芽時進行常規擴繁轉接培養。所述步驟b中防褐變培養基的配方為：MS+BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L+VC80mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂4.5g/L,pH為5.8。所述步驟b中滅菌為將做好的培養基放置高壓鍋中在137-140MPa大氣壓下滅菌20-25分鐘，取出放置2-3天接種。所述步驟b中每個培養瓶中培養基為每瓶25-30ml。所述步驟a中用消過毒的手術刀片切取1.2-1.5cm長的帶芽莖段。所述步驟b中洗潔精稀釋液為1L水加入2-3ml洗潔精。所述步驟b中流水的流速均為0.66-0.7米/秒。所述步驟b中酒精的質量分數為75％。所述步驟b中汞溶液質量分數為0.1％。本專利技術提供的一種蘋果砧木初代培養防褐變方法,大幅度降低蘋果優良砧木初代培養中出現的褐變問題，可使蘋果砧木初代培養的褐變率減少到5%以下，同時提高了初代培養成活率,使成活率提高到90%，且操作簡單，生產成本降低，出苗率提高，短期內可獲得大量材料，在生產上體現為直接的經濟效益。具體實施方式實施例1一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，包括初代培養材料的剪取、材料的清洗、殺菌、防褐變培養基的配置、培養室溫濕度管理、轉接等方法，具體步驟如下：1、初代培養材料的剪取5-6月份，選連續晴天的第3的早晨，選取蘋果砧木1年生、健壯的春梢頂芽和頂芽下面的第一側芽，用消過毒的手術刀片切取1.5cm長的帶芽莖段，剪去葉子，放入盛有無菌水的密閉培養瓶內，備用；2、材料的清洗和殺菌：將帶芽莖段在2‰的84消毒液中浸泡5分鐘后在流速為0.66米/秒的流水中沖洗2min，放入洗潔精稀釋液中清洗5min，其中洗潔精稀釋液為1L水加入2ml洗潔精，然后放入脫脂紗布在流速為0.66米/秒的流水下沖洗3h，控干水分后裝入干凈的燒杯，在超凈工作臺上用濃度為75％的酒精浸泡20ms，無菌水沖洗2次，然后在質量分數為0.1％的汞溶液中處理5min，處理時不斷攪動使藥液均勻浸到處理材料表面，處理完成后移到無菌水中沖洗4次，然后在無菌培養皿中切0.5cm帶芽莖段，接入抗褐變培養基，每瓶接2個芽，移入培養室培養。3、防褐變培養基的配置a、培養基配方：MS+BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L+VC80mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂4.5g/L,pH為5.8。b、培養基分裝：將做好的培養基分裝到培養瓶中，每瓶25mlc、滅菌：做好的培養基放置高壓鍋中在137MPa大氣壓下滅菌20分鐘，取出放置2天接種。4、培養室溫濕度管理：移入培養室的初代培養瓶苗先進行暗培養，用黑色棉布遮光，溫度23℃，濕度72％，暗培養5天后去掉棉布，再在1500Lx的光照下培養，溫濕度不變，等新芽萌發長到0.5cm時剪取新芽0.4cm轉接，每瓶接2個芽，二次轉接后光照增加到2500Lx，溫濕度不變，20天后等新芽基部長出從生芽時進行常規擴繁轉接培養。實施例2一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，包括初代培養材料的剪取、材料的清洗、殺菌、防褐變培養基的配置、培養室溫濕度管理、轉接等方法，具體步驟如下：1、初代培養材料的剪取：5～6月份，選連續晴天的第4的早晨，選取蘋果砧木2年生、健壯的春梢頂芽和頂芽下面的第一側芽，用消過毒的手術刀片切取1.5cm長的帶芽莖段，剪去葉子，放入盛有無菌水的密閉培養瓶內，帶回實驗室備用；2、材料的清洗和殺菌：將帶芽莖段在2‰的84消毒液中浸泡5分鐘后在流速為0.7米/秒的流水中沖洗5min，放入洗潔精稀釋液中清洗10min，洗潔精稀釋液為1L水加入2ml洗潔精，然后放入脫脂紗布在流速為0.66米/秒的流水下沖洗2h，控干水分后裝入干凈的燒杯，在超凈工作臺上用質量分數為75％的酒精浸泡22ms，無菌水沖洗3次，然后在質量分數為0.1％的汞溶液中處理4min，處理時不斷攪動使藥液均勻浸到處理材料表面，處理完成后移到無菌水中沖洗5次，然后在無菌培養皿中切0.4cm帶芽莖段，接入抗褐變培養基，每瓶接2個芽，移入培養室培養。3、防褐變培養基的配置a、培養基配方：MS+BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L+VC80mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂4.5g/L，pH為5.8。b、培養基分裝：將做好的培養基分裝到培養瓶中，每瓶30mlc、滅菌：做好的培養基放置高壓鍋中在137Pa大氣壓下滅菌20分鐘，取出放置3天接種。4、培養室溫濕度管理：移入培養室的初代培養瓶苗先進行暗培養，用黑色棉布遮光，溫度23℃，濕度75％，暗培養5天后去掉棉布，再在1500Lx的光照下培養，溫濕度不變，等新芽萌發長到0.8cm時剪取新芽0.4cm轉接，每瓶接2個芽，二次轉接后光照增加到2200Lx，溫濕度不變，22天后等新芽基部長出從生芽時進行常規擴繁轉接培養。實施例3一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，包括初代培養材料的剪取、材料的清洗、殺菌、本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，其特征在于具體步驟如下：a、初代培養材料的剪取：5?6月份，選連續晴天的第3或第4天的早晨，選取蘋果砧木1?2年生、健壯的春梢頂芽和頂芽下面的第一側芽，切取1.2?1.5?cm長的帶芽莖段，剪去葉子，放入盛有無菌水的密閉培養瓶內，備用；b、材料的清洗和殺菌：將帶芽莖段在2‰的84消毒液中浸泡5?10分鐘后在流水下沖洗2?5?min，放入洗潔精稀釋液中清洗5?10?min，后放入脫脂紗布在流水中沖洗下沖洗1.5?2?h，控干水分后裝入干凈的燒杯，在超凈工作臺上用酒精浸泡20?22ms后無菌水沖洗2?3次，然后在汞溶液中處理4?5min，處理時不斷攪動使藥液均勻浸到處理材料表面，處理完成后移到無菌水中沖洗4?5次，然后切0.4?0.5cm帶芽莖段，將做好的培養基分裝到培養瓶中，每瓶25?30ml，滅菌，每瓶接2個芽，移入培養室培養；c、培養室溫濕度管理：移入培養室的初代培養瓶苗先進行暗培養，用遮光布遮光，溫度21?23℃，濕度70％?75％，暗培養5?7天后去掉遮光布，在1500?1800Lx的光照下培養，溫度21?23℃，新芽萌發長到0.5?0.8cm時剪取新芽0.4?0.6cm轉接，每瓶接2個芽，轉接后光照增加到2200?2500Lx，溫度21?23℃，20?25天后等新芽基部長出從生芽時進行常規擴繁轉接培養。...

【技術特征摘要】
1.一種蘋果砧木組培初代培養防褐變的方法，其特征在于具體步驟如下：a、初代培養材料的剪取：5-6月份，選連續晴天的第3或第4天的早晨，選取蘋果砧木1-2年生、健壯的春梢頂芽和頂芽下面的第一側芽，切取1.2-1.5cm長的帶芽莖段，剪去葉子，放入盛有無菌水的密閉培養瓶內，備用；b、材料的清洗和殺菌：將帶芽莖段在2‰的84消毒液中浸泡5-10分鐘后在流水下沖洗2-5min，放入洗潔精稀釋液中清洗5-10min，后放入脫脂紗布在流水中沖洗下沖洗1.5-2h，控干水分后裝入干凈的燒杯，在超凈工作臺上用酒精浸泡20-22ms后無菌水沖洗2-3次，然后在汞溶液中處理4-5min，處理時不斷攪動使藥液均勻浸到處理材料表面，處理完成后移到無菌水中沖洗4-5次，然后切0.4-0.5cm帶芽莖段，將做好的培養基分裝到培養瓶中，每瓶25-30ml，滅菌，每瓶接2個芽，移入培養室培養；c、培養室溫濕度管理：移入培養室的初代培養瓶苗先進行暗培養，用遮光布遮光，溫度21-23℃，濕度70％-75％，暗培養5-7天后去掉遮光布，在1500-1800Lx的光照下培養，溫度21-23℃，新芽萌發長到0.5-0.8cm時剪取新芽0.4-0.6cm轉接，每瓶接2個芽，轉接后光照增加到2200-2500Lx，溫度21-23℃，20-25天后等新芽基部長出從生芽時進行常規擴繁轉接培養。2...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊俊霞，李幗英，李毅斌，馬建芳，康曉育，王花，吳和平，李偉，楊映紅，趙新紅，謝楷文，周代琴，李海青，張豫輝，陳旭陽，
申請(專利權)人：天水市果樹研究所，
類型：發明
國別省市：甘肅,62