暹羅芽孢桿菌菌株及其應用制造技術

本發明專利技術涉及生物防治植物病害領域，具體而言，涉及一種暹羅芽孢桿菌菌株及其應用。所述菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?NO.12903；保藏時間為：2016年8月24日。利用該菌株對水稻紋枯病進行防治，能夠避免現階段所使用的化學藥品對人類環境和稻米安全的潛在不良影響。菌株具有生長速度快、產孢量大、作用譜廣、抗逆性強，促進植物生長等特點，因此是一種極具應用前景的生物防治制劑。

Bacillus spore strain and its application in Siam

The invention relates to the field of biological control of plant diseases, in particular to a Bacillus strain of Siam and its application. The strain was preserved in the general microorganism center of the Chinese microbe preservation management committee, and the preservation number was CGMCC NO.12903; the preservation time was: August 24, 2016. The use of this strain to control rice sheath blight can avoid the potential adverse effects of chemicals used on the environment and rice safety at this stage. The strain has the characteristics of fast growth, large sporulation, broad spectrum of action, strong resistance to stress, and the growth of plant. Therefore, it is a promising biological control agent.

【技術實現步驟摘要】
暹羅芽孢桿菌菌株及其應用
本專利技術涉及生物防治植物病害領域，具體而言，涉及一種暹羅芽孢桿菌菌株及其應用。
技術介紹
水稻作為世界最重要的糧食作物之一，種植廣泛，尤以我國居多。水稻的主要病害包括水稻紋枯病、白葉枯病和稻瘟病。而水稻紋枯病作為遍布全世界的水稻重要病害對水稻安全生產和增收造成了巨大威脅。目前其發生面積、發生頻率、造成的產量損失均居我國部分稻區水稻三大病害之首。尤其是目前水稻種質資源中缺乏高抗紋枯病的品種、氮素化肥使用水平的提升、種植密度不斷加大、矮稈品種水稻和雜交品種水稻的推廣種植等因素，導致紋枯病的病害發生日漸嚴重。該植物病害不但影響水稻產量，而且還嚴重影響稻米的品質。此病主要危害水稻葉鞘和葉片，嚴重時也危害莖稈和稻穗，一般受害輕的減少5％-10％。重者可達50％-70％。水稻生長前期嚴重受害，造成“倒塘”或“串頂”可能顆粒無收。除危害水稻外，紋枯病病原菌還能侵害大麥、蕎麥、玉米、甘蔗、大豆、花生、茭白等作物。水稻紋枯病(Rhizoctoniasolani)不但是國內外最嚴重而且也是最難治理的真菌病害之一。由于紋枯病菌腐生能力強、寄主范圍廣，國內外至今尚未發現對該病的高抗品種。該病菌對國內的主要防治藥劑-井岡霉素已產生明顯的抗藥性，每季用藥次數已從10年前2次增加到現在的3～5次，用藥量也從1.5kg/hm2增加到4.5～6.0kg/hm2。因防治紋枯病而長期大量使用農藥造成自然生態環境污染及稻米農藥殘留量增加的問題也越來越突出。芽孢桿菌是一種廣泛分布于各種不同生活環境中的腐生細菌，可以產生內生耐熱抗逆性芽孢。芽孢不僅對熱有抗逆性，還對紫外線、電磁輻射及一些化學藥品有很強的抗逆性，它可以忍受各種不良環境。由于具有如此強的抗逆性，使得它有利于生防菌劑的生產和劑型加工，也利于其在環境中的存活、定殖與繁殖。由于它們生長快、營養簡單、能夠形成具有較強抗逆性能力的芽孢，在產品開發中較非芽孢桿菌有效活菌數量高、性能穩定等優勢而備受矚目。芽孢桿菌是植物病害生防微生物的重要組成部分，可用于防治多種植物病害。芽孢桿菌作為生防菌防治植物病害的機制主要有：抗生作用、營養競爭、空間競爭、重寄生作用以及誘導植物產生抗性等機制，其主要的生防機制是以產生拮抗物質抑制有害病菌的生長或殺死病原菌。這些物質絕大多數為肽類抗生素，具有高效、低殘留、與環境友好等優點。有鑒于此，特提出本專利技術。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種用于高效防治多種植物病害的新的微生物——暹羅芽孢桿菌菌株JAASHD。本專利技術的暹羅芽孢桿菌菌株具有生長速度快、產孢量大、作用譜廣、抗逆性強，促進植物生長等特點，因此具有良好的應用前景。為了實現本專利技術的上述目的，特采用以下技術方案：本專利技術涉及一株暹羅芽孢桿菌菌株，其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCCNO.12903；保藏時間為：2016年8月24日。該菌種拉丁學名為Bacillussiamensis，中文學名為暹羅芽孢桿菌，菌株名為JAASHD，從吉林省水稻主產區健康仔豬的新鮮糞樣中分離獲得。上述的經過分離純化的暹羅芽孢桿菌，采用LB培養基，恒溫37℃培養時間24小時，鏡檢菌體呈桿狀，直徑大約為0.5-0.6μm×1.3-2.9μm；平板生長出菌落呈奶白色，圓形，微凸，濕潤光滑，邊緣整齊。另外，對于該菌株，經過純化后測序，其16SrDNA序列如SEQIDNO:1所示。在實際應用的過程中，考慮到其可能需要運輸等原因，有必要將其擴大培養制成微生物菌劑的形式以擴大其應用范圍。因而本專利技術還請求保護含有如上所述菌株和/或所述菌株的代謝產物的微生物菌劑。優選的，如上所述的微生物菌劑，所述微生物菌劑為液體菌劑，且在該液體菌劑中，活菌的數量≥1×107cfu/mL，更優選的，活菌的數量為1×107～11cfu/mL，還可以選擇1×108cfu/mL，1×109cfu/mL或1×1010cfu/mL。優選的，如上所述的微生物菌劑，所述液體菌劑的制備方法包括以下步驟：將如上所述菌株的菌種接種于液體培養基中進行培養并收集菌液；其中，所述液體培養基優選為LB液體培養基。優選的，所述液體菌劑的制備方法還包括：將所述菌液進行離心，收集上清作為液體菌劑，和/或，收集沉淀配制成菌懸液作為液體菌劑。優選的，如上所述的微生物菌劑，所述微生物菌劑為固體菌劑，且在該固體菌劑中，活菌量為100～1000億/g。優選的，如上所述的微生物菌劑，所述固體菌劑由如上所述的菌株附加固態載體和/或助劑制備而成；優選的，所述固態載體包括高嶺土、輕質碳酸鈣、硅藻土、麥飯石、方解石、沸石、白炭黑、滑石粉、細沙以及粘土中的一種或多種；優選的，所述助劑包括十二烷基苯磺酸鈉、海藻糖、甘油、木質素磺酸鈉、烷基萘磺酸鈉縮聚物、煙酸、葡萄糖、氨基酸、維生素中的一種或多種。根據本專利技術的一方面，本專利技術還涉及如上所述的菌株或如上所述的菌劑在抑制植物病原菌中的應用；所述植物病原菌選自煙草赤星病菌、辣椒膠孢炭疽菌、黃瓜疫病菌、水稻白葉枯病菌以及黃瓜角斑病菌中的一種或多種。采用平板對峙培養法發現菌株JAASHD對多種真菌病原指示菌有一定的效果，例如煙草赤星病菌(A.alternata)、辣椒膠孢炭疽菌(C.gloeosporioides)、黃瓜疫病菌(P.melonis)生長的抑菌率分別為50.3％、48.9％和39.4％；采用抑菌圈法發現菌株JAASHD對細菌病原菌也存在一定的效果，例如水稻白葉枯病菌(X.oryzaepv.oryzae)、黃瓜角斑病菌(P.syringaepv.lachrymans)的抑制率分別達到28.4％和24.7％。根據本專利技術的一方面，本專利技術還涉及如上所述的菌株或如上所述的菌劑在防治植物土傳病中的應用；優選的，所述植物土傳病為水稻紋枯病。優選的，如上所述的應用，在進行水稻紋枯病防治時，施用方法為在稻叢基部噴施所述菌劑。將菌株JAASHD代謝產物或活體菌(濃度≥1×107cfu/mL)在紋枯病病原菌侵染前或侵染后1～3d，采用稻叢基部噴霧法施用于水稻作物上，能夠起到較好的防效效果，也證明了該菌株具有良好的防治水稻紋枯病的效果。與現有技術相比，本專利技術的有益效果為：本專利技術的暹羅芽孢桿菌菌株具有生長速度快、產孢量大、作用譜廣、抗逆性強，促進植物生長等特點，因此具有良好的應用前景。由該暹羅芽孢桿菌制備的生物防治制劑，不僅能夠高效的防治植物土傳病害，還能有效提高作物產量，是一種極具應用前景的生物防治制劑。該微生物制劑可以作為生物農藥或生物肥料，防治多種土傳植物病害，也可以防治作物葉部病害，包括煙草赤星病菌、辣椒膠孢炭疽菌、黃瓜疫病菌等中的一種或幾種。附圖說明為了更清楚地說明本專利技術具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本專利技術的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1為暹羅芽孢桿菌JAASHD系統發育樹。本申請提供的暹羅芽孢桿菌(Bacillussiamensis)，菌株名為JAASHD，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院本文檔來自技高網...

【技術保護點】
暹羅芽孢桿菌菌株，其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?NO.12903；保藏時間為：2016年8月24日。

【技術特征摘要】
1.暹羅芽孢桿菌菌株，其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCCNO.12903；保藏時間為：2016年8月24日。2.含有要求1所述菌株和/或所述菌株的代謝產物的微生物菌劑。3.根據權利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑為液體菌劑，且在該液體菌劑中，活菌的數量≥1×107cfu/mL。4.根據權利要求3所述的微生物菌劑，其特征在于，活菌的數量為1×107～11cfu/mL。5.根據權利要求3或4所述的微生物菌劑，其特征在于，所述液體菌劑的制備方法包括以下步驟：將權利要求1所述菌株的菌種接種于液體培養基中進行培養并收集菌液；優選的，所述液體菌劑的制備方法還包括：將所述菌液進行離心，收集上清作為液體菌劑，和/或，收集沉淀配制成菌懸液作為液體菌劑。6.根據權利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑為固體菌劑，且在該固體菌劑中...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王景會，李達，王穎，王義生，徐文靜，鄭建波，牛紅紅，遲燕平，苗欣宇，李倬林，
申請(專利權)人：吉林省農業科學院，
類型：發明
國別省市：吉林,22