本發明專利技術涉及一種胰蛋白酶水解魷魚皮提取膠原蛋白肽的方法，其特征在于步驟：1)原料預處理：把魷魚皮用水洗凈撈出，切碎，放入稀堿水中浸泡以去除魚皮上的雜蛋白，然后將處理好的魷魚皮放入HAc水溶液中以溶解去除魚皮上的脂肪及溶膠；2)將預處理好的脫脂魷魚皮按魷魚皮濕重的2～4倍加水，調節pH值在7.5～8.5，按原料中魷魚皮重量的4～6％加入胰蛋白酶，在45～55℃下恒溫酶解7～9h；3)酶解完畢后，滅酶、過濾，取上清液濃縮，真空干燥得魚皮膠原蛋白肽產品。以魷魚加工后的廢棄魷魚皮作為原料采用酶法提取膠原蛋白肽，不僅資源豐富、成本低，還可以減少對環境的污染，提高水產品加工利用水平，制得的魷魚皮膠原蛋白肽可作為基料應用于醫用食品、化妝品和保健品等領域。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術生物技術中蛋白質材料領域，具體涉及胰蛋白酶水解魷魚皮提取膠原蛋白肽的方法。
技術介紹
膠原蛋白在醫藥、保健、食品及美容等領域已獲得了廣泛的應用(PhanatKitfphattanabawon,Soottawat Benjakul. Characterisation of acid-soluble collagenfrom skin and bone of bigeye snapper(Priacanthus tayenus). Food Chemistry,2005,89 :363-372.)。目前所利用的膠原蛋白主要是從陸生動物的結締組織中提取。近年來瘋牛病、瘋羊病、口蹄疫、禽感感等疾病不斷出現，陸生動物來源的膠原蛋白在應用方面受至丨J了極大限制(Phanat Kitfphattanabawon, Soottawat Benjakul. Characterisation ofacid-soluble collagen from skin and bone of bigeye snapper(Priacanthus tayenus). EurJBiochem，1990，192 :33-38.)。魷魚為軟體動物門、頭足綱、槍烏賊科海產動物，分布廣泛。隨著我國海洋魷釣業的迅速發展，魷魚已成為我國主要的水產加工原料(曾慶祝，許慶陵，等.魷魚皮膠原蛋白的功能特性.水產學報.2009，33 (I) :139-144.)。魷魚年加工量約為30 40萬噸，在加工過程中會產生包括頭、足、內臟及表皮等廢棄物，其中魷魚皮占加工量的8% -13%，但大部分被制成低附加值的魚粉或者直接丟棄。本實驗鑒于魷魚皮中膠原蛋白含量豐富(約為其干重的70% -80% )和資源利用率低這一現狀，開展膠原蛋白肽的制備工藝研究，為進一步開發以魚皮膠原蛋白活性肽為基料醫用食品、化妝品和保健品提供技術支撐，并提高企業的經濟效益。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供，對提取工藝進行優化，具有提取工藝簡單、酶解效果好的特點。本專利技術解決上述技術問題所采用的技術方案為，其特征在于包括以下步驟I)原料預處理把魷魚皮用水洗凈撈出，切碎，放入稀堿水中浸泡以去除魷魚皮上的雜蛋白，然后將處理好的魷魚皮放入HAc水溶液中溶解去除魷魚皮上的脂肪及溶膠；2)將預處理好的脫脂魷魚皮按魷魚皮濕重的2 4倍加水，調節pH值在7. 5 8. 5，按原料中魷魚皮重量的4 6%加入胰蛋白酶，在45 55°C下恒溫酶解7 9h ;3)酶解完畢后，滅酶、過濾，取上清液濃縮，真空干燥得魷魚皮膠原蛋白肽產品。作為優選，所述步驟I)的稀堿水采用質量濃度為0. 8 1. 2%0 NaOH水溶液，魷魚皮在NaOH水溶液中浸泡時間20 28h，并且至少連續重復三次。優選，所述步驟I)的HAc水溶液的質量濃度為0. 8 1. 2%。,溫度為40 50°C。再優選，所述步驟2)的pH值為8，胰蛋白酶的加入量為原料中魷魚皮重量的5%，在50°C下恒溫酶解8h。最后，所述步驟3)的滅酶是在95 105°C下處理8 12min。與現有技術相比，本專利技術的優點在于以魷魚加工后的廢棄魷魚皮作為原料采用酶法提取膠原蛋白肽，不僅資源豐富、成本低，還可以減少對環境的污染，提高水產品加工利用水平；同時提取工藝簡單、酶解效果好，魷魚皮膠原蛋白肽水解度可達26. 1%，清除羥自由基率為79.8%，制得的魷魚皮膠原蛋白肽可作為基料應用于醫用食品、化妝品和保健品等領域。 附圖說明圖1是pH對水解度和清除羥自由基率的影響；圖2是溫度對水解度和清除羥自由基率的影響；圖3是加酶量對水解度和清除羥自由基率的影響；圖4是時間對水解度和清除羥自由基率的影響。具體實施例方式以下結合附圖實施例對本專利技術作進一步詳細描述。1.材料與方法1.1 原料秘魯魷魚皮(Dosidicus eschrichitii Steenstru),由浙江興業集團有限公司提供，清洗后于-18°C凍藏。1. 2 試劑指示劑甲基紅、溴甲酚綠。酶制劑木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶，購自亞太恒信生物科技(北京)有限公司；胰蛋白酶，購自無錫市雪梅酶制劑科技有限公司。試劑鹽酸、硫酸、氫氧化鈉、檸檬酸、硼酸、硫酸鉀、硫酸銅、甲醛、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、鄰二氮菲、硫酸亞鐵、乙醇、過氧化氫，以上試劑均為分析純。1. 3儀器設備DHG-9140A型電熱鼓風干燥箱上海一-〖亙科學儀器有限公司；UV-752PC型紫外分光光度計上海光譜儀器有限公司；CF16RX II型高速冷凍離心機日本日立公司；PHD200B型便攜式酸度計上海之信儀器有限公司。1. 4 方法1. 4.1原料預處理把魷魚皮用水洗凈撈出，切碎，放入1%。NaOH水溶液中，浸泡24h，至少連續三次，以去除魷魚皮上的雜蛋白。將上述處理好的魷魚皮放入裝有1%。撤(水溶液中，40-501下，至少連續三次，以去除魚皮上的脂肪并溶膠(叢日山，中國海洋大學，一種用魚皮生產膠原蛋白肽的工藝中國，200410024145.1 . 2005-02-23.)。1.4. 2魚皮膠原蛋白肽制備將預處理好的脫脂魷魚皮按魚皮濕重的3倍加水，調節到一定溫度，并調節pH值，按原料中魷魚皮重量的5%加蛋白酶，恒溫酶解7h，酶解完畢后，100°C滅酶lOmin，過濾，取上清液濃縮，真空干燥得魚皮膠原蛋白肽產品。1. 4. 3基本成分分析水分含量測定按照GB/T5009. 3-2003 (GB/T5009. 3-2003.食品中水分的測定)；灰分含量測定按照GB/T5009. 4-2003 (GB/T5009. 4-2003.食品中灰分的測定)；蛋白質含量測定按照GB/T5009. 5-2003 (GB/T5009. 5-2003食品中蛋白質的測定)；脂肪含量測定按照GB/T5009. 6-2003 (GB/T5009. 6-2003.食品中脂肪的測定)。1.4. 4水解度測定(I)總氮測定采用微量凱氏定氮法(2)氨基態氮的測定采用甲醛滴定法(趙新淮，馮志彪蛋白質水解物水解度的測定.食品科學，1994，11 :65-67.)取水解蛋白液5. OOmL于小燒杯中，加入60mL去CO2水中，磁力攪拌并用精密pH指示其pH。先用0. lmol/L標準NaOH滴定至pH8. 2,加入已中和好的甲醒溶液20mL,記錄滴至PH9. 2時所消耗的0. 05mol/L溶液的體積，計算其含氮量。(3)水解度的計算水解度的計算下式進行。權利要求1.，其特征在于包括以下步驟 1)原料預處理把魷魚皮用水洗凈撈出，切碎，放入稀堿水中浸泡以去除魷魚皮上的雜蛋白，然后將處理好的魷魚皮放入HAc水溶液中溶解去除魷魚皮上的脂肪及溶膠； 2)將預處理好的脫脂魷魚皮按魷魚皮濕重的2 4倍加水，調節pH值在7.5 8. 5，按原料中魷魚皮重量的4 6%加入胰蛋白酶，在45 55°C下恒溫酶解7 9h ; 3)酶解完畢后，滅酶、過濾，取上清液濃縮，真空干燥得魷魚皮膠原蛋白肽產品。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟I)的稀堿水采用質量濃度為0.8 1. 2% NaOH水溶液，魷魚皮在NaOH水溶液中浸泡時間20 28h，并且至少連續重復三次。3.根據權利要求1所述的方法，其本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種胰蛋白酶水解魷魚皮提取膠原蛋白肽的方法，其特征在于包括以下步驟：1)原料預處理：把魷魚皮用水洗凈撈出，切碎，放入稀堿水中浸泡以去除魷魚皮上的雜蛋白，然后將處理好的魷魚皮放入HAc水溶液中溶解去除魷魚皮上的脂肪及溶膠；2)將預處理好的脫脂魷魚皮按魷魚皮濕重的2～4倍加水，調節pH值在7.5～8.5，按原料中魷魚皮重量的4～6％加入胰蛋白酶，在45～55℃下恒溫酶解7～9h；3)酶解完畢后，滅酶、過濾，取上清液濃縮，真空干燥得魷魚皮膠原蛋白肽產品。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊會成，鄭斌，許丹，廖妙飛，周宇芳，鐘明杰，付萬冬，傅光明，
申請(專利權)人：浙江省海洋開發研究院，
類型：發明
國別省市：
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