本發明專利技術關于血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽及其應用，涉及藥物領域，具體涉及抑制腫瘤血管生成，治療惡性腫瘤的多肽。其序列為QARAKVCMQRTKKDAMQRSLRKQ是全新的序列，它們可以在體外特異性抑制腫瘤組織的血管內皮細胞的增殖和遷移，抑制腫瘤血管生成，并在體內試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽及其應用，具體涉及特異性抑制腫瘤組織的血管內皮細胞的增殖和迀移，抑制腫瘤血管生成，治療惡性腫瘤的多肽。
技術介紹
1971年Folkman提出腫瘤生長和轉移依賴新生血管生成。并認為實體瘤形成后，其發展可分為無血管期和血管期兩個階段。無血管期，微小腫瘤的存在依靠周圍間質彌散供血，生長速度呈線性，腫瘤限制在Imm?2mm之內，瘤細胞數少于10 5?10 6個，迫使腫瘤處于“休眠狀態”；進入血管期后，腫瘤組織為灌注性供血，瘤體呈指數性生長，2周后可增大1.6萬倍。新生血管不僅提供腫瘤所需要的營養和氧氣，排除代謝產物，而且是遠處轉移的途徑。因此，阻斷腫瘤新生血管形成就可能阻止腫瘤生長和轉移，抗新生血管療法也成為腫瘤治療的手段之一。血管內皮與基質細胞黏附分子對腫瘤血管生成的作用越來越受到關注。鈣聯蛋白是一類依賴于鈣離子的膜蛋白，是重要的細胞黏附蛋白，負責細胞與細胞的識別及細胞與組織的黏附。鈣聯蛋白的表達具有組織特異性，在血管內皮細胞表達的是血管內皮鈣聯蛋白(VE-cadherin)，這是一個潛在的腫瘤血管生成的革El標。目前報道有一個以VE_cadherin為靶標的抗體E4G10可以特異性識別腫瘤血管并抑制其生成，而不識別正常的血管。這可能是因為該抗體識別VE-cadherin的抗原表位在正常血管上被掩蓋，而在腫瘤血管上這個表位被暴露出來，預示著潛在的臨床應用價值。由此可見，抑制VE-cadherin可以有效抑制腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤生長，使腫瘤處于“休眠狀態”。目前，沒有成熟開發的血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽問世，用于治療惡性腫瘤。本專利中的血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽已證明在治療胰腺癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發的前景。
技術實現思路
專利技術目的 本專利技術提供全新的序列，該序列為血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽，特異性抑制腫瘤組織的血管內皮細胞的增殖和迀移，對惡性腫瘤具有很好的療效。技術方案血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽，其特征在于其序列為QARAKVCMQRTKKDAMQRSLRKQ。血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽在治療惡性腫瘤，如胰腺癌藥物中的應用。有益效果利用固相合成法化學合成血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可靶向識別腫瘤內皮細胞，并在體外抑制血管內皮細胞的增殖，治療惡性腫瘤，如胰腺癌。我們發現的血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽可以同時抑制血管內皮細胞迀移活力，并在體內試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發價值。【具體實施方式】實施例1 血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽人血管內皮細胞迀移的作用。采用劃痕實驗。先用marker筆在24孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5~lcm—道，橫穿過孔。每孔穿過3條線；將成對數生長的HUVEC細胞，以1.0X105加入24孔培養板中，培養24h。第二天用10 μ I槍頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕，以劃痕和背后橫線的交叉點為固定觀察位點；實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，每孔設五個復孔?’放入37°C、5%C02培養箱，培養。按0，6，12，24，36小時，拍照；測量O，6，12，24，36h劃痕寬度。以不同的時間點，記錄每孔三個固定位置處劃痕寬度的變化，即為細胞迀移距離。按照公式計算迀移率(migrat1n rate，MR):迀移率(MR)=(實驗第η小時的劃痕寬度一實驗第O小時的劃痕寬度)X 100%/實驗第O小時的劃痕寬度。結果，隨血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽濃度增加，迀移抑制率逐漸下降，說明血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽能夠抑制人血管內皮細胞迀移，抑制率為78.2%。實施例2 血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽對體外培養人血管內皮細胞的生長和存活IC50。采用MTT比色法。將對數生長的人血管內皮細胞HUVEC，以1.0X 15加入96孔培養板中，培養24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養4811，分別在011、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標儀620nm處測定吸光度A值，按公式HUVEC生長抑制率=(1-實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的IC50為2.32μΜ。實施例3 用腫瘤模型檢測血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽的體內活力。建立胰腺癌腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實驗組多肽(上海生工合成)設3個劑量:0.5,1.0,2.0mg /Kgo 21天后，觀察小鼠存活數量，計算存活率。結果顯示，血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽可有效地保護小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達到87.2%。【主權項】1.血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽，其特征在于其序列為QARAKVCMQRTKKDAMQRSLRKQ。2.血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽在治療惡性腫瘤，如胰腺癌藥物中的應用。【專利摘要】本專利技術，涉及藥物領域，具體涉及抑制腫瘤血管生成，治療惡性腫瘤的多肽。其序列為QARAKVCMQRTKKDAMQRSLRKQ是全新的序列，它們可以在體外特異性抑制腫瘤組織的血管內皮細胞的增殖和遷移，抑制腫瘤血管生成，并在體內試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發價值。【IPC分類】A61P35-00, A61K38-16, C07K14-00【公開號】CN104744571【申請號】CN201510157273【專利技術人】羅瑞雪 【申請人】蘇州普羅達生物科技有限公司【公開日】2015年7月1日【申請日】2015年4月6日本文檔來自技高網...
【技術保護點】
血管內皮鈣聯蛋白拮抗劑多肽，其特征在于其序列為QARAKVCMQRTKKDAMQRSLRKQ?。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅瑞雪，
申請(專利權)人：蘇州普羅達生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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