生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用技術

本發明專利技術是關于一種生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用，該生防菌株制劑及其粗毒素的制備方法包括以下步驟：1)將活化后的生防菌株接種于種子培養基中，在25?30℃振蕩培養20?30h，得到種子培養液；2)將所述的種子培養液接種于發酵培養基中在25?30℃振蕩培養5?7天，得到培養后的發酵液，即為防治田旋花的生防菌株制劑；3)將發酵產物離心后收集上清液，用乙酸乙酯溶液萃取后旋蒸濃縮，最后用甲醇定容即為茄葡柄霉粗毒素；其中，所述的生防菌株分離于自然發病的田旋花葉片。本發明專利技術的生防菌株制劑和粗毒素對田旋花具有較強的致病力，對棉花無抑制作用，可以作為一個田旋花的潛在生防資源。本發明專利技術制劑和粗毒素的制備方法簡單，適用于大規模生產。

The preparation method of biocontrol agents and toxin and Application

The present invention relates to a preparation method of biocontrol agents and crude toxin and application, preparation method of the biocontrol strains of crude toxin preparation and comprises the following steps: 1) will be activated after biocontrol strains were inoculated in the seed culture medium, cultured for 20 30h in 25 30 DEG C to get oscillation. The seed medium; 2) the seed medium inoculated in fermentation medium in 25 30 C 5 shaking culture for 7 days, get the fermentation liquid after culture, namely the biocontrol strains preparation of Convolvulus arvensis; 3) the fermentation supernatant was collected after centrifugation, steam condensed with ethyl acetate solution after extraction with methanol and spin, constant volume is eggplant Portuguese by toxin which handle; the biocontrol strains were isolated from naturally infected field bindweed leaves. The invention of biocontrol agents and crude toxin has strong pathogenicity of field bindweed, had no inhibitory effect on cotton, can be used as a potential field bindweed prevention resources. The preparation of the invention and the preparation method of crude toxin are simple and suitable for large-scale production.

【技術實現步驟摘要】
生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用
本專利技術涉及一種生防菌株制劑，特別是涉及一種生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用。
技術介紹
近年來棉田雜草嚴重威脅棉花生產，造成嚴重經濟損失，我國每年因其危害造成皮棉損失約為25.5萬t，均減產14.8％，重者達50％。近些年來新疆棉田雜草防治以播種前使用土壤封閉劑進行土壤封閉為主，有效的控制雜草的爆發，但其一直未能有效控制惡性雜草田旋花的危害，因為田旋花對化學除草劑具有天然耐受能力。隨著種植業結構的不斷調整、機械化程度的不斷提高及化學除草劑的大面積使用，棉田雜草群落結構隨之發生變化，但田旋花一直是新疆棉田優勢種群，嚴重制約著新疆棉花早熟、優質、高產及低耗。田旋花(ConvolvulusarvensisL.)是一種世界范圍內的多年生惡性雜草，被世界糧農組織列為世界上危害最為嚴重的雜草之一，田旋花以根芽及種子進行繁殖，每10cm的地下根可產生9-21個不定根和7個不定芽，其結種量大，種皮堅硬，抗逆能力強，根部斷開后仍能進行生長。田旋花靠根部與作物爭奪水和養分資源，憑借強有力纏繞能力，與作物爭奪光照和空間資源，一旦進入農田，農作物生長發育嚴重受阻，最終導致作物品質和產量下降。田旋花在棉花吐絮期危害時，其纏繞棉株棉株，嚴重影響機械化采收質量。目前對棉田中田旋花的防治措施主要以出苗后人工拔除及定向噴施滅生性除草劑為主，人工拔除不僅費時費力，且大大增加了生產成本，定向噴施滅生性除草劑難度較大且極易對棉株造成藥害，難以大面積的在新疆棉田中應用。
技術實現思路
本專利技術的主要目的在于，提供一種新型生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用，所要解決的技術問題是使其能夠抑制田旋花的生長，從而更加適于實用。本專利技術的目的及解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。依據本專利技術提出的一種生防菌株制劑的制備方法，包括以下步驟：1)將活化后的生防菌株接種于種子培養基中，在25-30℃振蕩培養20-30h，得到種子培養液；2)將所述的種子培養液接種于發酵培養基中在25-30℃振蕩培養5-7天，得到培養后的發酵液，即為防治田旋花的生防菌株制劑；其中，所述的生防菌株分離于自然發病的田旋花葉片。本專利技術的目的及解決其技術問題還可采用以下技術措施進一步實現。優選的，前述的生防菌株制劑的制備方法，其中所述的種子培養基為：去皮馬鈴薯煮沸濾液180-220g/L，葡萄糖15-20g/L，蒸餾水定容至1L。優選的，前述的生防菌株制劑的制備方法，其中所述的發酵培養基的為：酵母膏15～20g/L，碳水化合物120～150g/L，含氮化合物0.8～2g/L，玫瑰紅0.1～0.5g/L，氯霉素0.08～0.1g/L，蒸餾水定容至1L，pH為7.0～7.5；其中所述的含氮化合物為氯硝胺和可溶性銨鹽中的一種。優選的，前述的生防菌株制劑的制備方法，其中所述的種子培養液和發酵培養基中培養前的發酵液體積比為2％-5％。優選的，前述的生防菌株制劑的制備方法，其中所述的步驟1)和步驟2)中的振蕩的速度均為150-250r/min。優選的，前述的生防菌株制劑的制備方法，其中所述的碳水化合物為葡萄糖、蔗糖或淀粉。本專利技術的目的及解決其技術問題還采用以下的技術方案來實現。依據本專利技術提出的一種生防菌株制劑的應用，本專利技術所述的生防菌株制劑用于抑制田旋花的生長。本專利技術的目的及解決其技術問題還采用以下的技術方案來實現。依據本專利技術提出的一種生防菌株粗毒素的制備方法，將本專利技術所述的培養后的發酵液離心，收集上清液，將所述的上清液萃取，濃縮，得到生防菌株粗毒素。本專利技術的目的及解決其技術問題還采用以下的技術方案來實現。依據本專利技術提出的一種生防菌株粗毒素的應用，用甲醇將本專利技術所述的生防菌株粗毒素溶解后再用清水配成濃度為50-800mg/L的溶液，將所述的溶液用于抑制田旋花的生長。借由上述技術方案，本專利技術生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用至少具有下列優點：本專利技術的生防菌株制劑和粗毒素對田旋花具有較強的致病力，對棉花無抑制作用，可以作為一個田旋花的潛在生防資源，本專利技術的生防菌株制劑對田旋花的致死率為86.87％-91.23％，濃度為400-800mg/L生防菌株粗毒素對田旋花的抑制作用較高，對田旋花的致死率為88.00％-96.67％。本專利技術制劑和粗毒素的制備方法簡單，適用于大規模生產。上述說明僅是本專利技術技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本專利技術的技術手段，并可依照說明書的內容予以實施，以下以本專利技術的較佳實施例并詳細說明如后。具體實施方式為更進一步闡述本專利技術為達成預定專利技術目的所采取的技術手段及功效,以下結合較佳實施例，對依據本專利技術提出的生防菌株制劑和粗毒素的制備方法以及應用其具體實施方式、特征及其功效，詳細說明如后。在下述說明中，不同的“一實施例”或“實施例”指的不一定是同一實施例。此外，一或多個實施例中的特定特征或特點可由任何合適形式組合。本專利技術的一個實施例提出的一種生防菌株制劑的制備方法，包括以下步驟：1)將活化后的生防菌株接種于種子培養基中，在25-30℃振蕩培養20-30h，得到種子培養液；較佳的，本專利技術實施例生防菌株制劑的制備方法中的種子培養基為：去皮馬鈴薯煮沸濾液180-220g/L，葡萄糖15-20g/L，蒸餾水定容至1L；2)將所述的種子培養液接種于發酵培養基中在25-30℃振蕩培養5-7天，得到培養后的發酵液，即為防治田旋花的生防菌株制劑；其中，所述的生防菌株分離于自然發病的田旋花葉片。生防菌株從新疆自然發病的田旋花葉片上分離得到，具體的分離方法為：將自然發病的田旋花葉片置于無菌水中漂洗3次，在無菌工作臺上用滅菌濾紙吸取多余水分，用無菌刀取病健交接處組織，置于體積濃度為75％酒精中消毒30s，再置于體積濃度為0.1％的HgCL溶液中30s，再用無菌水漂洗5次，最后置于滅菌濾紙上晾干，置于PDA培養基上28℃培養，用單菌絲分離法純化，將其保存于PDA斜面上。較佳的，本專利技術實施例生防菌株制劑的制備方法中的發酵培養基的為：酵母膏15～20g/L，碳水化合物120～150g/L，含氮化合物0.8～2g/L，玫瑰紅0.1～0.5g/L，氯霉素0.08～0.1g/L，蒸餾水定容至1L，pH為7.0～7.5；其中所述的含氮化合物為氯硝胺和可溶性銨鹽中的一種；其中碳水化合物提供碳源，含氮化合物提供氮源。較佳的，本專利技術實施例菌株制劑的制備方法中的種子培養液和發酵培養基中培養前的發酵液體積比為2％-5％。較佳的，本專利技術實施例生防菌株制劑的制備方法的步驟1)和步驟2)中的振蕩的速度均為150-250r/min。較佳的，本專利技術實施例生防菌株制劑的制備方法中的碳水化合物為葡萄糖、蔗糖或淀粉。實施例1將活化后的生防菌株接種于種子培養基中，在28℃、250r/min培養24h，得到種子培養液，種子培養基配方為：去皮馬鈴薯煮沸濾液200g，葡萄糖20g，蒸餾水定容至1000mL；將20mL的該種子培養液接種于發酵培養基中在25C、180r/min振蕩培養5天，得到培養后的發酵液，即為防治田旋花的生防菌株制劑，發酵培養基配方：酵母膏15g，蔗糖120g，氯硝胺0.8g，玫瑰紅0.1g，氯霉素0.08g，蒸餾水定容至1000mL，pH7.0。實施例2將活化后的生防菌株接種本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種生防菌株制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)將活化后的生防菌株接種于種子培養基中，在25?30℃振蕩培養20?30h，得到種子培養液；2)將所述的種子培養液接種于發酵培養基中在25?30℃振蕩培養5?7天，得到培養后的發酵液，即為防治田旋花的生防菌株制劑；其中，所述的生防菌株分離于自然發病的田旋花葉片。

【技術特征摘要】
1.一種生防菌株制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)將活化后的生防菌株接種于種子培養基中，在25-30℃振蕩培養20-30h，得到種子培養液；2)將所述的種子培養液接種于發酵培養基中在25-30℃振蕩培養5-7天，得到培養后的發酵液，即為防治田旋花的生防菌株制劑；其中，所述的生防菌株分離于自然發病的田旋花葉片。2.根據權利要求1所述的生防菌株制劑的制備方法，其特征在于，所述的種子培養基為：去皮馬鈴薯煮沸濾液180-220g/L，葡萄糖15-20g/L，蒸餾水定容至1L。3.根據權利要求1所述生防菌株制劑的制備方法，其特征在于，所述的發酵培養基的為：酵母膏15～20g/L，碳水化合物120～150g/L，含氮化合物0.8～2g/L，玫瑰紅0.1～0.5g/L，氯霉素0.08～0.1g/L，蒸餾水定容至1L，pH為7.0～7.5；其中所述的含氮化合物為...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張學坤，惠慧，劉政，林克劍，趙靜，孫艷，郭甜甜，陳兵，馮麗凱，王振輝，
申請(專利權)人：新疆農墾科學院，石河子農業科學研究院，
類型：發明
國別省市：新疆,65