J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于動(dòng)物疾病檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，公開了J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)所述J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。實(shí)驗(yàn)表明，該抗原表位對(duì)J亞群血清有反應(yīng)同時(shí)對(duì)AB亞群血清無(wú)反應(yīng)，能夠特異性識(shí)別J亞群禽白血病病毒。本發(fā)明專利技術(shù)所述融合蛋白能夠制成疫苗，刺激受體產(chǎn)生抗體，保護(hù)受體抵抗J亞群禽白血病病毒感染。本發(fā)明專利技術(shù)所述融合蛋白免疫動(dòng)物可制備J亞群禽白血病病毒特異性抗體。本發(fā)明專利技術(shù)所述J亞群禽白血病病毒特異性抗體可以與J亞群禽白血病特異性抗原表位特異性識(shí)別，開發(fā)檢測(cè)試劑盒，用于區(qū)分AB亞群和J亞群禽白血病。

J subgroup avian leukosis virus specific antigen epitope, fusion protein, specific antibody and uses thereof

The present invention belongs to the field of animal disease detection technology, and discloses J subgroup avian leukosis virus specific antigen epitope, fusion protein, specific antibody and application thereof. The invention of subgroup J avian leukosis virus specific epitopes of its amino acid sequence is shown as SEQ ID NO:1. The experiment showed that the epitope reacted with J subgroup serum and did not respond to AB subgroup serum, and could recognize J subgroup avian leukosis virus specifically. The fusion protein of the invention can be used as a vaccine to stimulate the receptor to produce antibodies, and to protect the receptor against J subgroup avian leukosis virus infection. The fusion protein immune animal of the invention can prepare J subgroup avian leukosis virus specific antibodies. The J subgroup avian leukosis virus specific antibodies of the present invention can be specifically identified with the J subgroup avian specific antigen epitope, and development detection kits are used to distinguish between AB subgroup and J subgroup avian leukosis.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應(yīng)用
本專利技術(shù)屬于動(dòng)物疾病檢測(cè)
，具體涉及J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應(yīng)用，尤其是J亞群禽白血病病毒GP85型特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及J亞群禽白血病檢測(cè)試劑盒。
技術(shù)介紹
禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)和禽肉瘤病病毒(ASV)引起的禽類腫瘤性疾病，對(duì)我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)危害重大。ALV/ASV可分為A-J10個(gè)亞群，其中A、B和J亞群為發(fā)生于田間雞的外源性病毒。目前該病尚無(wú)有效治療手段，主要通過(guò)排除陽(yáng)性雞凈化種群來(lái)控制該病傳播。J亞型ALV可水平傳播和垂直傳播，垂直傳遞可導(dǎo)致子代免疫耐受，抗體檢測(cè)表現(xiàn)為陰性。同時(shí)發(fā)病雞出現(xiàn)急性腫瘤引起死亡，一旦發(fā)現(xiàn)患病需立即處理。AB亞型ALV主要通過(guò)垂直傳播影響雞雛質(zhì)量，病雞體重增長(zhǎng)緩慢，產(chǎn)蛋量減少。對(duì)于J亞型和AB亞型ALV的診斷有助于根據(jù)不同亞群病毒引起的機(jī)理和癥狀進(jìn)行禽白血病的防控，而雞場(chǎng)也可根據(jù)成本和需求對(duì)病雞進(jìn)行分批次處理，減少經(jīng)濟(jì)損失。抗原表位是指位于抗原分子表面具有特殊結(jié)構(gòu)和免疫活性的化學(xué)基團(tuán)，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞并能被其識(shí)別的部位，又稱抗原決定簇，禽白血病病毒RNA編碼區(qū)翻譯gag-pol-env。gag基因編碼病毒內(nèi)部結(jié)構(gòu)的核衣殼蛋白主要有P27、P19、P15、P12四種蛋白，P27蛋白在禽白血病毒中高度保守，已根據(jù)P27蛋白開發(fā)出多種禽白血病檢測(cè)試劑盒。但只能用于檢測(cè)ALV病毒不能區(qū)別各病毒亞群。Env是囊膜糖基化表面蛋白，水解后形成膜表面蛋白SU(surfaceglycoprotein)(gp85基因編碼)和跨膜蛋白TM(transmembraneprotein)(gp37基因編碼)，gp85決定病毒亞群特異性和宿主范圍，是抗原表位的主要潛在區(qū)域。目前對(duì)禽白血病特異性亞群特異性抗原表位的研究工作都是基于gp85蛋白進(jìn)行。目前對(duì)亞群特異性抗原表位研究的方法局限于對(duì)所研究的特定亞群gp85蛋白進(jìn)行分析，如定位J亞群抗原表位只針對(duì)J亞群gp85蛋白進(jìn)行分析，檢測(cè)方法中待測(cè)樣品為J亞群特異性血清或ALV-J蛋白制備的鼠單抗，這種方法能找到的J亞群抗原表位但是特異性不強(qiáng)，不能排除找到的抗原表位區(qū)域包含有其他禽白血病亞群的抗原識(shí)別位點(diǎn)。在用重組蛋白對(duì)不同亞型禽白血病病毒感染血清進(jìn)行區(qū)分時(shí)，由于各亞群gp85蛋白存在一定的同源性，所以無(wú)法對(duì)禽白血病抗體亞型進(jìn)行體外診斷。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
有鑒于此，本專利技術(shù)的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供J亞群特異性抗原表位，繼而開發(fā)檢測(cè)試劑盒用于區(qū)分AB亞群和J亞群禽白血病。為實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：本專利技術(shù)提供了J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。申請(qǐng)人通過(guò)比對(duì)不同亞群gp85蛋白序列，找到AB亞群和J亞群gp85蛋白的差異性區(qū)域，從差異性區(qū)域篩選來(lái)源于AB亞群和J亞群的15個(gè)多肽進(jìn)行合成，精確找到可區(qū)分禽白血病AB亞群和J亞群的多肽，同時(shí)免疫實(shí)驗(yàn)分析15個(gè)多肽時(shí)采用AB亞群特異性血清和J亞群特異性血清為樣本，如某J亞群來(lái)源多肽對(duì)J亞群血清有反應(yīng)同時(shí)對(duì)AB亞群血清無(wú)反應(yīng)即為J亞群特異性抗原表位。相比于以前的研究來(lái)說(shuō)，可找到能區(qū)分AB亞群和J亞群的特異性抗原表位。其中，一種J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位的氨基酸序列為GTGGAEAELRDFIEKWKGDDHLRPYVNQSWTMVSPIN(J-Pep6，SEQIDNO：2)。實(shí)驗(yàn)表明，該抗原表位對(duì)J亞群血清有反應(yīng)同時(shí)對(duì)AB亞群血清無(wú)反應(yīng)，能夠特異性識(shí)別J亞群禽白血病病毒。本專利技術(shù)還提供了編碼本專利技術(shù)所述特異性抗原表位的DNA分子。由于密碼子的簡(jiǎn)并性，可以存在很多種能夠編碼本專利技術(shù)所述的特異性抗原表位的核苷酸序列。本專利技術(shù)還提供了一種重組表達(dá)載體，含有本專利技術(shù)所述的DNA分子。另一方面，本專利技術(shù)還提供了一種工程菌，其含有本專利技術(shù)所述的重組表達(dá)載體。在本專利技術(shù)中，“工程菌”通過(guò)將重組表達(dá)載體熱激轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主細(xì)胞所獲得。本專利技術(shù)中所表達(dá)的“宿主細(xì)胞”包括原核或真核細(xì)胞。所述宿主細(xì)胞選自大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌。本專利技術(shù)所述的特異性抗原表位、DNA分子、重組表達(dá)載體、或所述工程菌都有益于禽白血病的預(yù)防或治療，因此本專利技術(shù)提供了所述特異性抗原表位、DNA分子、重組表達(dá)載體、或所述工程菌在制備預(yù)防或治療禽白血病的藥物中的應(yīng)用。所述特異性抗原表位、DNA分子、重組表達(dá)載體、或所述工程菌可單獨(dú)使用，也可聯(lián)合使用，或與其它已知藥物聯(lián)合使用。進(jìn)一步的，優(yōu)選的，所述藥物為疫苗。可直接作用到患者的受影響器官，也可全身給藥。本專利技術(shù)還提供了由所述工程菌表達(dá)的融合蛋白。所述工程菌經(jīng)誘導(dǎo)后表達(dá)，分離純化可獲得表達(dá)的融合蛋白。本專利技術(shù)所述融合蛋白能夠刺激受體產(chǎn)生抗體，保護(hù)受體抵抗J亞群禽白血病病毒感染。因此，本專利技術(shù)提供的融合蛋白能夠制成疫苗用于預(yù)防J亞群禽白血病病毒的感染。本專利技術(shù)還要求保護(hù)一種疫苗，包括本專利技術(shù)所述融合蛋白。進(jìn)一步的，所述疫苗還包括佐劑。作為優(yōu)選，佐劑為氫氧化鋁佐劑、弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑。本專利技術(shù)還要求保護(hù)J亞群禽白血病病毒特異性抗體，其是由所述融合蛋白免疫動(dòng)物制備而成的單克隆抗體或多克隆抗體。本專利技術(shù)所述J亞群禽白血病病毒特異性抗體可以與J亞群禽白血病特異性抗原表位特異性識(shí)別，開發(fā)檢測(cè)試劑盒，用于區(qū)分AB亞群和J亞群禽白血病。因此本專利技術(shù)提供了所述J亞群禽白血病病毒特異性抗體在制備J亞群禽白血病檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。同時(shí)本專利技術(shù)還提供了一種J亞群禽白血病檢測(cè)試劑盒，其含有：(1)本專利技術(shù)所述的特異性抗原表位或本專利技術(shù)所述融合蛋白；和/或(2)本專利技術(shù)所述的J亞群禽白血病病毒特異性抗體。作為優(yōu)選，所述的J亞群禽白血病病毒特異性抗體可以為單克隆抗體，也可以為多克隆抗體。作為優(yōu)選，本專利技術(shù)所述的試劑盒中還包括酶標(biāo)板。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本專利技術(shù)提供的試劑盒可將融合蛋白固定于酶標(biāo)板用于J亞群禽白血病病毒特異性抗體，也可將J亞群禽白血病病毒特異性抗體包被于酶標(biāo)板，用于檢測(cè)融合蛋白。進(jìn)一步的，作為優(yōu)選，本專利技術(shù)所述試劑盒還包括包被液、封閉液、二抗、顯色液、終止液。由上述技術(shù)方案可知，本專利技術(shù)提供了一種J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位、融合蛋白、特異性抗體及其應(yīng)用。本專利技術(shù)所述J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。實(shí)驗(yàn)表明，該抗原表位對(duì)J亞群血清有反應(yīng)同時(shí)對(duì)AB亞群血清無(wú)反應(yīng)，能夠特異性識(shí)別J亞群禽白血病病毒。本專利技術(shù)所述融合蛋白能夠制成疫苗，刺激受體產(chǎn)生抗體，保護(hù)受體抵抗J亞群禽白血病病毒感染。本專利技術(shù)所述融合蛋白免疫動(dòng)物可制備J亞群禽白血病病毒特異性抗體。本專利技術(shù)所述J亞群禽白血病病毒特異性抗體可以與J亞群禽白血病特異性抗原表位特異性識(shí)別，開發(fā)檢測(cè)試劑盒，用于區(qū)分AB亞群和J亞群禽白血病。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本專利技術(shù)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。圖1示ALV-A，ALV-B，ALV-J病毒的gp85蛋白序列比對(duì)圖；圖2為多肽與特異性血清的反應(yīng)效果。具體實(shí)施方式本專利技術(shù)公開了J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位及其應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

【技術(shù)特征摘要】
1.J亞群禽白血病病毒特異性抗原表位，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。2.編碼權(quán)利要求1所述特異性抗原表位的DNA分子。3.一種重組表達(dá)載體，其含有權(quán)利要求2所述核苷酸序列。4.一種工程菌，其含有權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體。5.權(quán)利要求1所述的特異性抗原表位、權(quán)利要求2所述的DNA分子、權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體、或權(quán)利要求4所述工程菌在制備預(yù)防或治療禽白血病的藥物中的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王永強(qiáng)，曹紅，李曉齊，鄭世軍，陳福勇，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：北京,11