一種復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法，主要是提供一種保存時(shí)間長，快速降解養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮，硫化氫等有害物質(zhì)的復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法。采用紫硫光合細(xì)菌中的桃紅莢硫菌與紫色非硫光合細(xì)菌中的萬尼氏紅微菌經(jīng)種子活化培養(yǎng)，種子培養(yǎng)，厭氧發(fā)酵罐光照培養(yǎng)等培養(yǎng)步驟，得到桃紅莢硫菌與萬尼氏紅微菌的高濃度復(fù)合光合細(xì)菌制劑，該復(fù)合光合細(xì)菌制劑可以在水生和海生環(huán)境中快速降解水體中氨態(tài)氮，硫化氫，從而送減少或消除水體氨態(tài)氮，硫化氫以提高水生和海生動(dòng)物的產(chǎn)量和/或質(zhì)量。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法
本專利技術(shù)屬于一種功能性微生物制劑技術(shù)范圍，具體的說是涉及到一種保存時(shí)間長，快速降解養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮，硫化氫等有害物質(zhì)的復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法。
技術(shù)介紹
許多水生和海生的環(huán)境，諸如魚場(chǎng)，水池，池塘，湖泊，河口灣以及海洋在水柱中含有一個(gè)或者多處好氧區(qū)以及一個(gè)或多個(gè)厭氧區(qū)。在靠近水柱表面的有氧區(qū)，空氣和風(fēng)引入氧氣，而好氧細(xì)菌產(chǎn)生磷酸鹽，二氧化碳和氨氣等。在靠近水柱底部的厭氧區(qū)，厭氧微生物傾向于產(chǎn)生硫化氫，氨氣和甲烷等。在厭氧區(qū)及其下沉積物中硫化氫與氨態(tài)氮的積聚是有毒的和不受歡迎的，因?yàn)樗鼈兘o水生和海生動(dòng)物群體帶來壓力。在某些情況下，比如在商業(yè)化的魚塘和蝦塘中，群體生活在水體底部或者靠近水體底部的地方，處于厭氧區(qū)之中或者接近該區(qū)，硫化氫的積聚會(huì)減少應(yīng)該群體的產(chǎn)量和/或其個(gè)體的質(zhì)量。在本領(lǐng)域中對(duì)于與厭氧區(qū)相關(guān)的問題已知若干解決方法。例如，可將化學(xué)氧化劑，諸如臭氧、二氧化氯、各過氧化氫、過氧化鈣或過氧化鎂，添加入水體中以緩解厭氧的狀況，盡管這些方法可能有效，但是它們可能是昂貴的，迫使使用者盡可能減少添加入水體的氧化劑的量。這種對(duì)節(jié)約的需要若導(dǎo)致劑量不足，則可能是有害的。劑量不足會(huì)帶來問題，因?yàn)樗鼤?huì)造成不充分氧化或部分氧化，產(chǎn)生氣味問題。當(dāng)將二氧化氯添加至有機(jī)酸時(shí)，不充分氧化會(huì)導(dǎo)致氯乙酸的生成，氯乙酸在非常低的濃度下有可察覺的惡臭。然而這些步驟是設(shè)計(jì)有來消除氣味的，而可能對(duì)環(huán)境中的水生和海生動(dòng)物（如魚或蝦）有害。其他已知的控制硫化氫的方法包括用硫氧化細(xì)菌來處理，如專利200880020095.6公開了一種降硫化氫的硫氧化學(xué)細(xì)菌，副球菌屬中泛養(yǎng)副球菌，能降解水體中的硫化氫，以改善水生或海生動(dòng)物的產(chǎn)量與質(zhì)量，但沒有公開其具體的制備方法。而光合細(xì)菌中的紫色硫細(xì)菌也是一類具有較強(qiáng)降解硫化氫與氨態(tài)氮能力的硫氧化細(xì)菌，但現(xiàn)如今光合細(xì)菌的研究和應(yīng)用大部分集中在紫色非硫細(xì)菌上，如專利201110077489.9“一種高濃度光合細(xì)菌的簡(jiǎn)易培養(yǎng)方法”使用的菌種為沼澤紅假單胞菌，專利號(hào)200810219265.5“一種光合細(xì)菌制劑的制備工藝”，使用的菌種為沼澤紅假單胞菌進(jìn)行通氣培養(yǎng)；專利號(hào)200910039525.5“一種農(nóng)用光合細(xì)菌制劑的生產(chǎn)方法”使用的菌種為沼澤紅假單胞菌和球形紅細(xì)菌。專利號(hào)201210255225.2“高活菌數(shù)光合細(xì)菌原代菌種的制種方法”使用的菌種為沼澤紅假單胞菌。專利號(hào)200410048678.3“高濃度光合細(xì)菌制劑的制備方法”使用的菌種為沼澤紅假單胞菌，莢膜紅假單胞菌和球形紅假單胞菌，而我們一般認(rèn)為，沼澤紅假單胞菌，莢膜紅假單胞菌，球形紅假單胞菌等紫色非硫光合細(xì)菌是具有較強(qiáng)降解氨態(tài)氮的能力，但不能直接利用硫化氫，且有些對(duì)硫化氫比較敏感，盡管李秀珠分離到一株紫色非硫光合細(xì)菌在對(duì)蝦養(yǎng)殖中能對(duì)抑制硫化物的產(chǎn)生一定效果，但其分析認(rèn)為池塘底質(zhì)中乳酸，醋酸等幾種短碳鏈揮發(fā)性脂肪酸是有助于硫酸鹽還原菌生長的，由于光合細(xì)菌對(duì)這些脂肪酸的利用，可能對(duì)硫酸鹽還原菌有抑制作用，從而可以抑制硫化氫的產(chǎn)生，并不能完全證明這些紫色非硫光合細(xì)菌能直接利用，氧化硫化氫。國內(nèi)對(duì)紫色硫細(xì)菌的研究僅見于少數(shù)幾篇文獻(xiàn)，對(duì)光合細(xì)菌在水處理的研究也主要側(cè)重于氨氮和COD，而對(duì)于硫化物處理方面的研究較少，紫色非硫細(xì)菌對(duì)硫化物利用的能力很差，只有當(dāng)硫化物的濃度保持在較低水平時(shí)，硫化物才能較好的抑制，而紫色硫細(xì)菌對(duì)硫化物具有較高的耐受性，能在厭氧條件下以硫化氫等無機(jī)物作電子供體還原二氧化碳，合成有機(jī)物從而起到去除硫化物的作用。桃紅莢硫菌：細(xì)胞球形，直徑1.2-3微米，一般為1.5微米，單個(gè)細(xì)胞通常被一層粘的莢膜包住，常見有雙球形聚合體，四聯(lián)體和不規(guī)則的堆，它們通常被粘液層所包圍。厭氧的光能自養(yǎng)菌：有果糖、甘油或有機(jī)酸時(shí)所有菌株都能在微好氧到好氧的黑暗條件下生長。光合電子供體：硫化物，硫代硫酸鹽，硫和分子氫。可光合同化醋酸鹽、果糖、延胡索酸鹽、甘油、蘋果酸鹽、丙酮酸和琥珀酸鹽。大多數(shù)菌株具有同化型硫酸鹽還原作用。桃紅莢硫菌生活在光線能及的滯水和污泥中，尤其是在含硫化物豐富的環(huán)境中。環(huán)境條件對(duì)桃紅莢硫菌的影響較大，25-30℃、1000-3000lux或更強(qiáng)的光照，PH值7.0-7.5的厭氧環(huán)境最適合該菌的生長和氧化作用，在偏離最適條件下，桃紅莢硫菌也有較大的適應(yīng)范圍，10-40℃、500-6000lux和PH5-9，均能適應(yīng)生長，在微好氧黑暗狀態(tài)下也能生存，條件不適時(shí)，該菌的生長處于抑制狀態(tài)，一旦條件允許，又能繼續(xù)生長。四川大學(xué)的馮甦對(duì)紫硫細(xì)菌中的桃紅莢硫菌進(jìn)行了研究，認(rèn)為桃紅莢硫菌適于應(yīng)用到制作菌肥和處理含硫污染物方面。但要投入實(shí)際運(yùn)用，還需注意以下幾點(diǎn)：第一，桃紅莢硫菌的生長速度緩慢，一般要培養(yǎng)兩周以后才會(huì)有明顯的生長趨勢(shì)，較長的生長周期不利于大規(guī)模的應(yīng)用；第二，桃紅莢硫菌在純培養(yǎng)情況下生長不如與其它菌株混合培養(yǎng)好。當(dāng)培養(yǎng)物中同時(shí)存在其它種類的光合細(xì)菌，如紫色非硫細(xì)菌、綠硫細(xì)菌或其它菌種時(shí)，桃紅莢硫菌生長要快得多，所以在生產(chǎn)上使用時(shí)，可考慮多種菌類混合培養(yǎng)與處理。而到目前為止，還未見有關(guān)桃紅莢硫菌具體制備方法技術(shù)方案公開。而且從現(xiàn)有文獻(xiàn)上來看，大部份復(fù)合光合細(xì)菌只是對(duì)紅螺菌科內(nèi)的菌進(jìn)行混合培養(yǎng)，還未有報(bào)道紅螺菌科與著色菌科的菌之間進(jìn)行混合培養(yǎng)。另外，一般的光合細(xì)菌是營養(yǎng)態(tài)細(xì)胞，不易保存，一般常溫下，最長保存時(shí)間為3-6個(gè)月，超過保存時(shí)間，存活率很少，這也是光合細(xì)菌在水產(chǎn)應(yīng)用上一個(gè)大缺點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供一種紫硫光合細(xì)菌中的桃紅莢硫菌與紫色非硫細(xì)菌中的萬尼氏紅微菌混合培養(yǎng)，菌體生長速度快，菌體含量高，培養(yǎng)時(shí)間短，而且保存時(shí)間長，能快速降解水體硫化氫與氨態(tài)氮的復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法。本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是：采用紫硫光合細(xì)菌中的桃紅莢硫菌菌種與紫色非硫光合細(xì)菌中的萬尼氏紅微菌按以下步驟進(jìn)行培養(yǎng)：、桃紅莢硫菌半固體種子活化培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種穿刺在半固體桃紅莢硫菌培養(yǎng)基中，25-30℃光照培養(yǎng)7-10天，待穿刺的菌線變紅并長出菌苔，即可為活化的桃紅莢硫菌種；、萬尼氏紅微菌平板活化：將萬尼氏紅微菌菌種在平板上劃線活化，溫度25-35℃活化培養(yǎng)3-5天，挑取大個(gè)菌落作為活化種子；、桃紅莢硫菌種子培養(yǎng)：將活化的菌種接種至桃紅莢硫菌種子液體培養(yǎng)基中，溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-3000lux，光照厭氧培養(yǎng)7-10天，檢測(cè)種子的OD650≥1.2，活菌數(shù)≥6億cfu/ml即為種子培養(yǎng)液；、萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)：將挑取大個(gè)萬尼氏紅微菌菌落作為活化種子接種到萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)基中，溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-3000lux，光照靜置培養(yǎng)3-5天，檢測(cè)種子的OD660≥1.2，活菌數(shù)≥8億cfu/ml即為種子培養(yǎng)液；、發(fā)酵培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基以1：3-1：5的接種量接種，同時(shí)將萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基按1：6-1：10的接種量接入，在光照培養(yǎng)罐中厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-4000lux，攪拌速度為120轉(zhuǎn)/分鐘，待培養(yǎng)至第三天，開始流加300g/L的硫代硫酸鈉至硫代硫酸鈉的濃度至1-3g/L，繼續(xù)培養(yǎng)4-5天，待檢測(cè)其本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于：采用紫硫光合細(xì)菌中的桃紅莢硫菌菌種與紫色非硫光合細(xì)菌中的萬尼氏紅微菌按以下步驟進(jìn)行培養(yǎng)：A、桃紅莢硫菌半固體種子活化培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種穿刺在半固體桃紅莢硫菌培養(yǎng)基中，25?30℃光照培養(yǎng)7?10天，待穿刺的菌線變紅并長出菌苔，即可為活化的桃紅莢硫菌種；B、萬尼氏紅微菌平板活化：將萬尼氏紅微菌菌種在平板上劃線活化，溫度25?35℃活化培養(yǎng)3?5天，挑取大個(gè)菌落作為活化種子；C、桃紅莢硫菌種子培養(yǎng)：將活化的菌種接種至桃紅莢硫菌種子液體培養(yǎng)基中，溫度25?35℃，光照強(qiáng)度為：1000?3000lux，光照厭氧培養(yǎng)7?10天，檢測(cè)種子的OD650≥1.2，活菌數(shù)≥6億cfu/ml即為種子培養(yǎng)液；D、萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)：將挑取大個(gè)萬尼氏紅微菌菌落作為活化種子接種到萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)基中，溫度25?35℃，光照強(qiáng)度為：1000?3000lux，光照靜置培養(yǎng)3?5天，檢測(cè)種子的OD660≥1.2，活菌數(shù)≥8億cfu/ml即為種子培養(yǎng)液；E、發(fā)酵培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基以1：3?1：5的接種量接種，同時(shí)將萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基按1：6?1：10的接種量接入，在光照培養(yǎng)罐中厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25?35℃，光照強(qiáng)度為：1000?4000lux，攪拌速度為120轉(zhuǎn)/分鐘，待培養(yǎng)至第三天，開始流加300?g/L的硫代硫酸鈉至硫代硫酸鈉的濃度至1?3?g/L，繼續(xù)培養(yǎng)4?5天，待檢測(cè)其OD650≥7，活菌數(shù)≥60億cfu/ml，其中桃紅莢硫菌不低于25億cfu/ml，萬尼氏紅微菌不低于30億cfu/ml，即可放罐，灌裝，包裝成品。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種復(fù)合光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于：采用紫硫光合細(xì)菌中的桃紅莢硫菌菌種與紫色非硫光合細(xì)菌中的萬尼氏紅微菌按以下步驟進(jìn)行培養(yǎng)：A、桃紅莢硫菌半固體種子活化培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種穿刺在半固體桃紅莢硫菌培養(yǎng)基中，25-30℃光照培養(yǎng)7-10天，待穿刺的菌線變紅并長出菌苔，即可為活化的桃紅莢硫菌種；B、萬尼氏紅微菌平板活化：將萬尼氏紅微菌菌種在平板上劃線活化，溫度25-35℃活化培養(yǎng)3-5天，挑取大個(gè)菌落作為活化種子；C、桃紅莢硫菌種子培養(yǎng)：將活化的菌種接種至桃紅莢硫菌種子液體培養(yǎng)基中，溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-3000lux，光照厭氧培養(yǎng)7-10天，檢測(cè)種子的OD650≥1.2，活菌數(shù)≥6億cfu/mL即為種子培養(yǎng)液；D、萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)：將挑取大個(gè)萬尼氏紅微菌菌落作為活化種子接種到萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)基中，溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-3000lux，光照靜置培養(yǎng)3-5天，檢測(cè)種子的OD660≥1.2，活菌數(shù)≥8億cfu/mL即為種子培養(yǎng)液；E、發(fā)酵培養(yǎng)：將桃紅莢硫菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基以1：3-1：5的接種量接種，同時(shí)將萬尼氏紅微菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基按1：6-1：10的接種量接入，在光照培養(yǎng)罐中厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25-35℃，光照強(qiáng)度為：1000-4000lux，攪拌速度為120轉(zhuǎn)/分鐘，待培養(yǎng)至第三天，開始流加300g/L的硫代硫酸鈉至硫代硫酸鈉的濃度至1-3g/L，繼續(xù)培養(yǎng)4-5天，待檢測(cè)其OD650≥7，活菌數(shù)≥60億cfu/mL，其中桃紅莢硫菌不低于25億cfu/mL，萬尼氏紅微菌不低于30億cfu/mL，即可放罐，灌裝，包裝成品；所述的半固體...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蔣常德，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：蔣常德，
類型：發(fā)明
國別省市：湖南;43