鹽酸阿比多爾在制備預防和治療抗二型單純皰疹病毒的藥物中的應用制造技術

本發明專利技術公開了以阿比多爾為主要成分的藥物及其在藥學上可接受的鹽在抗二型單純胞疹病毒病毒感染方面的應用。本發明專利技術發現鹽酸阿比多爾可阻斷二型單純胞疹病毒感染宿主細胞，可用作治療抗二型單純胞疹病毒感染方面的疾病治療。

Application of Abi Doll hydrochloride in preparing medicine for preventing and treating type two herpes simplex virus

The invention discloses a drug taking arbidol as main ingredient and its pharmaceutically acceptable salts in anti HSV type two virus infection in the application. The invention discloses that Dole hydrochloride can block the infection of host cells of type two herpes simplex virus, and can be used as a treatment for diseases of type two herpes simplex virus infection.

【技術實現步驟摘要】
鹽酸阿比多爾在制備預防和治療抗二型單純皰疹病毒的藥物中的應用
本專利技術是關于鹽酸阿比多爾在二型單純胞疹病毒感染方面的應用，屬于醫藥

技術介紹
單純皰疹病毒(HSV)為DNA病毒，大小約180納米，呈球形，由核衣殼及病毒包膜組成。依據抗原性不同分為一型和二型。一型主要由口唇病灶獲得，二型可從生殖器病灶分離獲得，二型主要引起生殖器部位或新生兒感染，但兩型病毒感染部位并無嚴格界限。相對而言，二型往往更難治愈。二型主要通過性接觸傳播，二型單純皰疹病毒引起的疾病即生殖器皰疹是一種復發率高，難治愈的性傳播疾病之一，因為這種病毒相當頑固，他可在感覺神經節中終身潛伏，當機體受到多種因素如紫外線、發熱、創傷和情緒緊張、細菌或病毒感染以及使用腎上腺素等影響后，在缺少預防的狀態下，約有80％的原發性病人可再次復發。所以要治愈，必須把以內的毒素徹底殺死即可不再復發。新生兒可在娩出時通過患有生殖器皰疹母親的產道也會受染，病毒亦可由子宮頸上行而感染胎兒。所以對于二型單純皰疹病毒引起的疾病不可小視。[NewEnglandJournalofMedicine,2000,342(12):844-850.]。至今為止，對治療二型單純皰疹病毒引起的疾病仍然是一個棘手的問題。以往對單純皰疹病毒臨床上的治療主要使用阿昔洛韋和西多福韋等藥物。可效果并不佳，因為原發性感染人群有80％的概率會復發。同時，有報道指出國內外已經有實驗室成功分離了阿昔洛韋的耐藥株[AntiviralResearch，2008，79:28]。對此，傳統臨床藥物阿昔洛韋對二型單純皰疹病毒可能產生耐藥性，綜上所述，對新藥研究是十分有必要的。鹽酸阿比多爾，對多種病毒具有抗病毒廣譜作用已被廣泛報道[Arbidol:abroad-spectrumantiviralcompoundthatblocksviralfusion.CurrMedChem.2008,15(10):997-1005]。其廣譜性的作用機制源于它存在膜融合抑制作用[Membranefusion.NatureStructural&MolecularBiology.2008,15(7):658-64]。但是還未有專門針對鹽酸阿比多爾對二型單純皰疹病毒的抗病毒作用及應用的相關研究與文獻報道。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供鹽酸阿比多爾在治療抗二型單純皰疹病毒的藥物中的應用。具體而言，為解決上述技術問題，本專利技術采用了如下技術方案：本專利技術提供了如結構式(1)所示的鹽酸阿比多爾在制備預防和治療抗二型單純胞疹病毒的藥物中的應用,其中：其中HO-代表羥基，Br-代表溴。所述的藥物是以結構式(II)所示的鹽酸阿比多爾作為有效成分的藥物,所述藥物為鹽酸阿比多爾及其藥學上可接受的鹽及其在藥學上可接受的載體或賦形劑。一種用于治療抗二型單純胞疹病毒的藥物組合物，所述的藥物組合物含有如式(I)所示的鹽酸阿比多爾，所述的藥物組合物以式(I)所示的鹽酸阿比多爾作為有效成份，所述的藥物組合物含有式(I)所示的鹽酸阿比多爾及其藥學上可接受的鹽及其在藥學上可接受的載體或賦形劑。所述藥物的劑型為丸劑、片劑、膠囊或口服液。本專利技術的化合物的體外半數細胞毒性評價模型為MTT法半數細胞毒性的檢測評價模型。本專利技術所述的MTT法半數細胞毒性評價模型是指使用MTT染色劑能與活細胞線粒體結合，可定量檢測出細胞的半數細胞毒性濃度(TC50)。本專利技術化合物體外抗病毒給藥模型分別是治療給藥模型和阿比多爾體外抗HSV-2作用靶點探索模型。本專利技術所述的治療給藥模型是加100μL病毒滴度為100TCID50/0.1mL的病毒液到96孔板中，吸附兩小時，去病毒液，換100μL的倍比稀釋的藥物的維持培養基，72小時后，觀察細胞病變，計算IC50，評價藥物治療指數。本專利技術所述的阿比多爾體外抗HSV-2作用靶點探索模型是HSV-2病毒在Vero細胞孵育2小時后，用PBS清洗2遍，用阿比多爾(有效濃度>IC50)處理，在37℃孵育分別3h，6h，24h，棄上清，PBS清洗2遍，加入新鮮培養基，37℃孵育72h后凍板，測定上清病毒滴度。本專利技術通過運用三種體外抗病毒藥效評價模型，評價鹽酸阿比多爾對二型單純皰疹病毒的抵制作用，首次發現鹽酸阿比多爾對二型單純皰疹病毒有抗病毒作用，可阻斷二型單純皰疹病毒感染宿主細胞，可用作治療二型單純皰疹病毒感染方面的疾病治療。具體實施方式實施例1.藥物評價原理病毒擴增將非洲綠猴腎細胞(VERO)按3X105個/孔，接種至96孔板中，置37℃，5％CO2培養，待長滿單層。將二型單純皰疹病毒100倍稀釋接種到長滿單層細胞的96孔板中,置37℃，5％CO2培養兩天(含正常對照組)。兩天后，病變程度高達75％以上，置-80℃超低溫冰箱，反復凍融一次，收集細胞擴增的病毒液，3000r/min離心30分鐘，去沉淀物，分裝小管置-80℃超低溫冰箱長期保存。二型單純皰疹病毒半數致死滴度(TCID50)測定將非洲綠猴腎細胞(VERO)按3X105個/孔，接種至96孔板中，置37℃，5％CO2培養，待長滿單層。加入十倍倍比稀釋的HSV-2病毒液，100μL/孔，37℃孵育2小時或3000轉離心1小時；棄去上清，加入新鮮培養液，100μL/孔，2日后觀察結果，記錄CPE。并用Reed-Muench計算病毒半數致死滴度(TCID50)[ReedLJ,MuenchH.Asimplemethodofestimatingfiftypercentendpoints.AmJHyg,1938,27(3):493-497]。鹽酸阿比多爾抗二型單純皰疹病毒藥效評價96孔板單層細胞以PBS洗滌1次，加入含約100TCID50的病毒稀釋液100μL/孔，37℃、5％CO2培養箱中孵育2小時，棄去病毒液，加入2倍梯度稀釋的藥物，每個濃度設置4個復孔，以最大無毒濃度為藥物起始濃度，在34℃、5％CO2培養箱中孵育2天。記錄細胞病變(CytopathogenicEffect，CPE)。細胞出現CPE按6級標準記錄。記錄CPE后，用MTT染色，進行OD值測定。用Reed-Muench法計算藥物半數有效濃度(IC50)，計算治療指數(SelectiveIndex，SI)：SI＝TC50/IC50)。[參照《藥理實驗方法學，徐叔云主編》，治療指數(SI)>1表示有效]。鹽酸阿比多爾藥物毒性評價鹽酸阿比多爾粉末用DMSO溶解后，加入培養液稀釋至20mg/mL，DMSO終濃度為1％，經0.22μm濾膜過濾后置4℃保存；過濾后置4℃保存。按每孔約2.5×104細胞接種到96孔板，24～48h后待細胞長成單層后，棄去培養液，加入不同稀釋度的藥物100μL/孔，正常細胞對照孔加入100μL/孔MEM，37℃5％CO2繼續培養2～5天，每孔加MTT溶液(5mg/mL)20μL，置37℃，5％CO2溫箱中繼續孵育4小時。吸棄培養上清液，每孔加100μL二甲基亞砜(DMSO)，低速振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值。按照下列公式計算抑制率，并用Reed-Muench法計算50％毒性濃度為藥物半數有毒濃度(TC50)。計算抑制率＝(正常組－給藥組)本文檔來自技高網...

【技術保護點】
如結構式(1)所示的鹽酸阿比多爾在制備預防和治療抗二型單純胞疹病毒的藥物中的應用,

【技術特征摘要】
1.如結構式(1)所示的鹽酸阿比多爾在制備預防和治療抗二型單純胞疹病毒的藥物中的應用,其中：其中HO-代表羥基，Br-代表溴。2.根據權利要求1的應用，其特征在于，所述的藥物是以結構式(II)所示的鹽酸阿比多爾作為有效成分的藥物,3.根據權利要求1的應用，其特征在于，所述藥物為鹽酸阿比多爾及其藥學上可接受的鹽及其在藥學上可接受的載體或賦形劑。4.一種用...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊子峰，谷臻，鄭志強，杜秋伶，江海明，李潤峰，
申請(專利權)人：廣州醫院大學附屬第一醫院，廣州呼吸疾病研究所，澳門美容博士診療中心有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東,44