對T細胞活化性抗原和腫瘤抗原特異性的雙特異性抗體及使用方法技術(shù)

本申請涉及對T細胞活化性抗原和腫瘤抗原特異性的雙特異性抗體及使用方法。本發(fā)明專利技術(shù)涉及特異性結(jié)合T細胞活化性抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含第一Fab片段和第二Fab片段，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不包含F(xiàn)c域；用于生成它們的方法，包含所述抗體的藥物組合物，和它們的用途。

Bispecific antibodies and methods of use of antigen and tumor antigen specific activation of T cells

The invention relates to a method of using bispecific antibody and antigen and tumor antigen specific activation of T cells. The present invention relates to specific binding to T cell activation antigen and tumor antigen (TA) bispecific antibody, which comprises a first and a second Fab fragment of Fab fragments, of which second Fab heavy and light chain variable region or any constant region is switched; and wherein the bispecific antibody does not contain a Fc domain is used to generate them; methods, pharmaceutical compositions comprising said antibodies, and their use.

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
對T細胞活化性抗原和腫瘤抗原特異性的雙特異性抗體及使用方法本申請是申請日為2012年08月21日、中國申請?zhí)枮?01280050795.6、專利技術(shù)名稱為“對T細胞活化性抗原和腫瘤抗原特異性的雙特異性抗體及使用方法”的專利技術(shù)申請的分案申請。專利
本專利技術(shù)涉及特異性結(jié)合T細胞活化性抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含第一Fab片段和第二Fab片段，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不包含F(xiàn)c域；用于生成它們的方法，包含所述抗體的藥物組合物，和它們的用途。專利技術(shù)背景在多種臨床背景中常常想要選擇性破壞個別細胞或特定細胞類型。例如，特異性破壞腫瘤細胞而使健康細胞和組織不受損害是癌癥療法的首要目標。一種辦法是選擇性誘導針對腫瘤的免疫應答，其觸發(fā)免疫效應細胞(諸如天然殺傷(NK)細胞或細胞毒性T淋巴細胞(CTL))攻擊及隨后破壞腫瘤細胞。CTL構(gòu)成免疫系統(tǒng)最有力的效應細胞，然而它們不能通過由常規(guī)治療性抗體的Fc域介導的效應器機制來激活。在此方面，能夠結(jié)合癌細胞上的表面抗原及活化T細胞受體(TCR)復合物中的不變組分的雙特異性抗體在最近幾年已變得感興趣。雙特異性抗體對其靶物二者的同時結(jié)合迫使癌細胞和T細胞之間的暫時相互作用，引起細胞毒性T細胞活化和隨后腫瘤細胞裂解。已開發(fā)出數(shù)種雙特異性抗體型式并調(diào)查了它們對T細胞介導的癌癥免疫療法的適宜性。其中，所謂的BiTE(雙特異性T細胞銜接物(engager))分子已進行非常好地表征，而且早就在臨床中顯示出一些有希望的結(jié)果(綜述見NagorsenandExpCellRes317,1255-1260(2011))。BiTE是串聯(lián)scFv分子，其中兩個scFv分子通過柔性接頭融合。針對T細胞銜接評估的其它雙特異性型式包括雙抗體(Holligeretal.,ProtEng9,299-305(1996))及其衍生物，諸如串聯(lián)雙抗體(Kipriyanovetal.,JMolBiol293,41-66(1999))。一項最近的進展是所謂的DART(雙重親和力重新靶向)分子，其基于雙抗體型式但特征在于實現(xiàn)額外穩(wěn)定化的C端二硫橋(Mooreetal.,Blood117,4542-51(2011))。所謂的triomab(其為完整雜合小鼠/大鼠IgG分子且目前亦在臨床試驗中評估)代表尺寸更大的型式(綜述見Seimetzetal.,CancerTreatRev36,458-467(2010))。然而，至今已知的為T細胞介導的癌癥免疫療法開發(fā)的雙特異性抗體具有涉及它們功效、毒性和適用性的重大缺點。小構(gòu)建物(諸如例如BiTE分子)，雖然能夠有效交聯(lián)效應器和靶細胞，但是具有非常短的血清半衰期，從而要求通過連續(xù)輸注對患者施用它們。另一方面，IgG樣形式，雖然具有長半衰期的極大好處，但是受制于與IgG分子固有的天然效應器功能有關(guān)的毒性。這種免疫原性潛力構(gòu)成IgG樣雙特異性抗體對于成功治療劑開發(fā)的另一個不利特征。最后，雙特異性抗體的一般開發(fā)中的一項主要挑戰(zhàn)仍然是以臨床充足的數(shù)量和純度生產(chǎn)雙特異性抗體構(gòu)建物。具有不同特異性的抗體重和輕鏈在共表達時的錯配降低正確裝配的構(gòu)建物的產(chǎn)率且導致許多無功能的副產(chǎn)物。鑒于與目前可獲得的用于T細胞介導的癌癥免疫療法的雙特異性抗體有關(guān)的難點和缺點，仍然存在對此類分子的新穎的改進型式的需要。現(xiàn)在已經(jīng)用本專利技術(shù)的新雙特異性抗體克服了這些缺點。由于錯配副產(chǎn)物的量減少(這顯示聚集比本領(lǐng)域已知的雙特異性抗體片段少)，能容易地以升高的產(chǎn)率生成新雙特異性抗體。使用交換辦法，能在不需要生成常規(guī)(common)輕鏈的情況下迫使正確的LC聯(lián)合。另外，新雙特異性抗體具有與許多常規(guī)雙特異性抗體片段相比更高的分子量，如此防止過度腎清除且導致改進體內(nèi)半衰期。新雙特異性抗體是完全功能性的且具有與相應常規(guī)雙特異性抗體相當或改進的結(jié)合和活性。本專利技術(shù)提供設(shè)計用于T細胞活化和重新定向的雙特異性抗原結(jié)合分子，其組合了良好的功效和生產(chǎn)能力與較低毒性和有利的藥動學特性。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)涉及特異性結(jié)合T細胞活化性抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含第一Fab片段和第二Fab片段，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不包含F(xiàn)c域。本專利技術(shù)的抗體特異性結(jié)合腫瘤細胞的表面上的腫瘤抗原且同時結(jié)合T細胞活化性抗原。由此，所述雙特異性抗體能夠在腫瘤部位特異性引發(fā)免疫應答，隨后導致靶細胞凋亡。一方面，提供特異性結(jié)合T細胞活化性抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含至少兩個Fab片段，其中第一Fab片段包含至少一個對腫瘤抗原(TA)特異性的抗原結(jié)合位點；且第二Fab片段包含至少一個對T細胞活化性抗原特異性的抗原結(jié)合位點，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不含F(xiàn)c域。特別地，本專利技術(shù)涉及如下的雙特異性抗體，其中T細胞活化性抗原為CD3T細胞共同受體(CD3)靶抗原。一方面，提供特異性結(jié)合CD3T細胞共同受體(CD3)抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含至少兩個Fab片段，其中第一Fab片段包含至少一個對腫瘤抗原(TA)特異性的抗原結(jié)合位點；且第二Fab片段包含至少一個對CD3T細胞共同受體(CD3)特異性的抗原結(jié)合位點，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不含F(xiàn)c域。在一個實施方案中，所述第一和第二Fab片段經(jīng)由肽接頭連接。優(yōu)選地，所述肽接頭為(G4S)2接頭。在一個實施方案中，所述抗體另外包含第三Fab片段。在另一個實施方案中，所述第三Fab片段包含至少一個對腫瘤抗原特異性的抗原結(jié)合位點。在一個實施方案中，所述第三Fab片段連接所述第一Fab片段的輕鏈或重鏈的N或C端。在另一個實施方案中，所述第三Fab片段連接所述第二Fab片段的輕鏈或重鏈的N或C端。在一個實施方案中，所述第三Fab片段經(jīng)由肽接頭連接所述第一或第二Fab片段。優(yōu)選地，所述肽接頭為(G4S)2接頭。依照本專利技術(shù)的雙特異性抗體至少是二價的，而且可以是三價的或多價的，例如四價的或六價的。在一個實施方案中，所述雙特異性抗體是二價的(1+1型式)，分別有一個結(jié)合位點各自靶向腫瘤抗原(TA)和T細胞活化性抗原。在另一個實施方案中，所述雙特異性抗體是三價的(2+1型式)，有兩個結(jié)合位點各自靶向腫瘤抗原(TA)且有一個結(jié)合位點靶向T細胞活化性抗原，如下節(jié)詳述的。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述T細胞活化性抗原為CD3。在第二個目標中，本專利技術(shù)涉及一種藥物組合物，其包含本專利技術(shù)的雙特異性抗體。在第三個目標中，本專利技術(shù)涉及本專利技術(shù)的雙特異性抗體，其用于治療癌癥。在另一個實施方案中，提供所述雙特異性抗體作為藥物的用途。優(yōu)選地，所述用途為用于治療癌癥。在別的目標中，本專利技術(shù)涉及包含的序列編碼本專利技術(shù)的雙特異性抗體的重鏈的核酸序列，包含的序列編碼本專利技術(shù)的雙特異性抗體的輕鏈的核酸序列，包含本專利技術(shù)的核酸序列的表達載體和包含本專利技術(shù)的載體的原核或真核宿主細胞。另外，提供生成抗體的方法，其包括培養(yǎng)所述宿主細胞，使得所述抗體生成。附圖簡述圖1a)至圖1e)：本專利技術(shù)的例示性雙特異性抗體型式的示意圖。圖1a)Fab-Crossfab分子C端，圖1b)Fab本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種特異性結(jié)合T細胞活化性抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含第一Fab片段和第二Fab片段，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不包含F(xiàn)c域。

【技術(shù)特征摘要】
2011.08.23 EP 11178410.41.一種特異性結(jié)合T細胞活化性抗原和腫瘤抗原(TA)的雙特異性抗體，其包含第一Fab片段和第二Fab片段，其中第二Fab重和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)任一是交換的；且其中該雙特異性抗體不包含F(xiàn)c域。2.權(quán)利要求1的雙特異性抗體，其中所述第一Fab片段包含至少一個對腫瘤抗原特異性的抗原結(jié)合位點；且所述第二Fab片段包含至少一個對T細胞活化性抗原特異性的抗原結(jié)合位點。3.權(quán)利要求1或2的雙特異性抗體，其中所述T細胞活化性抗原為CD3T細胞共同受體(CD3)抗原。4.權(quán)利要求1至3任一項的雙特異性抗體，其中所述第二Fab片段的N端連接所述第一Fab片段的C端。5.權(quán)利要求1至4任一項的雙特異性抗體，其另外包含第三Fab片段。6.權(quán)利要求1至5任一項的雙特異性抗體，其中所述第三Fab片段包含至少一個對腫瘤抗原特異性的抗原結(jié)合位點。7.權(quán)利要求5或6的雙特異性抗體，其中所述第三Fab片段連接所述第一Fab片段。8.權(quán)利要求7的雙特異性抗體，其中所述第三Fab片段的C端連接所述第一Fab片段的N端。9.權(quán)利要求5或6的雙特異性抗體，其中所述第三Fab片段連接...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：P布魯恩克，T福蒂，C杰格，C克萊恩，P尤馬納，
申請(專利權(quán))人：羅切格利卡特公司，
類型：發(fā)明
國別省市：瑞士,CH