肽及其用途制造技術(shù)

公開了抗微生物的肽。還公開了治療細(xì)菌感染和真菌感染的方法和去除生物膜的方法。還公開了這些肽的用途。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】【專利說明】肽及其用途 相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考 本申請(qǐng)要求2012年9月7日提交的新加坡專利申請(qǐng)?zhí)?01206671-8的優(yōu)先權(quán)的 權(quán)益，其內(nèi)容為了所有目的特此通過引用以其全部?jī)?nèi)容并入。 專利
本專利技術(shù)一般涉及分子生物學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域并特別涉及抗微生物肽與它們的使 用方法及其用途。 專利技術(shù)背景 抗微生物劑為用于抑制微生物的生長(zhǎng)或殺死微生物的劑。多種抗微生物劑諸如抗 生素或抗菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑或抗寄生蟲劑為本領(lǐng)域已知的。最常見已知的抗微生物 劑是抗生素，其可應(yīng)用于醫(yī)藥部門或非醫(yī)藥部門的多種應(yīng)用。然而，由于在生活的方方面面 中的抗生素濫用，抗生素抗性細(xì)菌在增加。微生物，諸如細(xì)菌對(duì)抗生素的抗性可從基本更大 耐受性或減少的易感性到完全不受抗生素影響的范圍。當(dāng)微生物不能被抗生素或抗細(xì)菌劑 控制或殺死時(shí)，盡管存在抗生素，微生物能夠存活、繁殖并引起對(duì)宿主的疾病或損害。此抗 生素抗性微生物成為了顯著的公共健康威脅。 鑒于以上，需要提供可用于對(duì)抗微生物的可選的肽。 專利技術(shù)概述 在一個(gè)方面中，提供了包含式I (SEQ ID NO: 1)的肽： [(R)a(X1) b(X2)c(X3)a(X 4)Jn0 在一個(gè)實(shí)例中，X1、X2和X 4彼此獨(dú)立地選自由K、R、G和A組成的組；X 3為K、R、L、 V、I、G或A。在一個(gè)實(shí)例中，a和b獨(dú)立地被選擇為從1到10的整數(shù)。在一個(gè)實(shí)例中，c是 選自從0到5的整數(shù)。在一個(gè)實(shí)例中，n是至少1。 在另一個(gè)方面中，提供了包含式VIII(SEQ ID NO: 27)的肽： X7 [RGRK(Xs) (X9) (R)fJn(X10)g0 在一個(gè)實(shí)例中，X7為脂質(zhì)基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)例中，X 8和X 9彼此獨(dú)立地選自由纈氨酸 (V)、異亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、丙氨酸（A)和甘氨酸（G)組成的組。在一個(gè)實(shí)例中，X ltl選 自由賴氨酸（K)和精氨酸（R)組成的組。在一個(gè)實(shí)例中，e和f彼此獨(dú)立地為選自從0到2 的整數(shù)。在一個(gè)實(shí)例中，n是至少1。 在另一個(gè)方面中，提供了如在本文描述的肽，所述肽用于作為藥物使用。 在另一個(gè)方面中，提供了包含如在本文描述的肽的組合物。 在另一個(gè)方面中，提供了用于治療細(xì)菌感染或去除細(xì)菌的方法。所述方法包括施 用藥學(xué)上有效量的如在本文描述的肽。 在另一個(gè)方面中，提供了中和內(nèi)毒素的方法。所述方法包括施用藥學(xué)上有效量的 如在本文描述的肽。 在另一個(gè)方面中，提供了治療真菌感染或侵?jǐn)_、或去除真菌的方法。所述方法包括 施用藥學(xué)上有效量的如在本文描述的肽。 在另一個(gè)方面中，提供了去除生物膜的方法。所述方法包括施用有效量的如在本 文描述的肽。 在另一個(gè)方面中，提供了如在本文描述的肽在制造用于治療細(xì)菌感染、或去除細(xì) 菌、或中和內(nèi)毒素、或治療真菌感染或侵?jǐn)_、或去除真菌的藥物中的用途。 在另一個(gè)方面中，提供了包含如在本文描述的肽和其說明書的試劑盒。 附圖簡(jiǎn)述 參考詳細(xì)描述，同時(shí)結(jié)合非限制性實(shí)例和附圖進(jìn)行考慮，將更好地理解本專利技術(shù)，其 中： 圖1顯示了 C8V2D對(duì)抗銅綠假單胞菌（P. aeruginosa)的體外（in vitro)時(shí)間-殺 滅動(dòng)力學(xué)（time-kill kinetics)測(cè)定的點(diǎn)圖。因此，圖1顯示了本專利技術(shù)的示例性肽在殺滅 微生物中有效。 圖2顯示了局部毒性測(cè)試后的角膜的攝影圖像。在局部毒性測(cè)試中，角膜清晰度 通過裂隙燈顯微鏡術(shù)檢查，在應(yīng)用了 V2D和C8V2D之后每天追蹤，持續(xù)4天。 圖3(A)顯示了闡明肽的脂質(zhì)修飾的長(zhǎng)度對(duì)其有效地中和來自大腸桿菌（E. coli) 的脂多糖的能力的影響的點(diǎn)圖。（B)顯示了闡明肽的脂質(zhì)修飾的長(zhǎng)度對(duì)其有效地中和來自 銅綠假單胞菌的脂多糖的能力的影響的點(diǎn)圖。 圖4顯示了顯示通過本公開內(nèi)容的肽和脂質(zhì)-修飾的肽從脂多糖置換bodipy TR 尸胺（BC)熒光探針的曲線圖。圖4顯示了 BC被本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽有效地置換。 因此，說明了本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽在中和脂多糖中是有效的。 圖5顯示了從對(duì)本公開內(nèi)容的肽和脂質(zhì)修飾的肽對(duì)脂多糖透化的影響的研究中 獲得的結(jié)果的柱狀圖。內(nèi)側(cè)左柱示出了 1.5625(i!g/ml)，向X軸的右手邊遞增濃度。圖5 顯示了本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽在誘導(dǎo)脂多糖透化中是有效的。 圖6顯示了本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽在改變金黃色葡萄球菌（S. aureus) DM4001(A)或大腸桿菌ATCC8739(B)的膜電位中的作用。細(xì)菌中膜電位的變化以DiSC3-5 的熒光強(qiáng)度的變化中觀察，其以每秒計(jì)數(shù)（c.p.s.)的形式展示。因此，圖6顯示了，本公開 內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽在引起金黃色葡萄球菌和大腸桿菌兩者的膜電位變化中是有效的。 圖7顯示了如通過背光測(cè)定所觀察的，本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽對(duì)金黃色葡萄 球菌內(nèi)膜的透化程度。圖7顯示了，本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽C16-V2D有效透化金黃色 葡萄球菌內(nèi)膜。 圖8顯示了對(duì)本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾肽在引起從模擬細(xì)菌膜（A)或紅血細(xì)胞（B) 的脂質(zhì)體中的鈣黃綠素滲漏中的作用的研究的結(jié)果。因此，圖8顯示了本公開內(nèi)容的脂質(zhì) 修飾肽選擇性引起細(xì)菌膜的膜滲漏且不針對(duì)哺乳動(dòng)物紅血細(xì)胞。 圖9顯示了本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽或脂肽的設(shè)計(jì)。認(rèn)為本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修 飾的肽或脂肽通過靜電和疏水相互作用與脂多糖結(jié)合。（A)顯示了本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾 的肽的實(shí)例的結(jié)構(gòu)。（B)顯示了脂多糖的結(jié)構(gòu)。（C)顯示了本公開內(nèi)容的脂質(zhì)修飾的肽與 脂多糖之間的靜電或疏水相互作用。 圖10顯示了本公開內(nèi)容的肽聯(lián)合第二治療劑（加替沙星和B2088)對(duì)被銅綠假單 胞菌（ATCC 9027)感染的小鼠角膜的體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。圖10顯示了本專利技術(shù)的肽與抗生素 的聯(lián)合導(dǎo)致對(duì)銅綠假單胞菌的有效抑制。 圖11顯示了本公開內(nèi)容的肽聯(lián)合第二治療劑（加替沙星和B2088/99)對(duì)被銅綠 假單胞菌（ATCC 9027)感染的小鼠角膜的體內(nèi)測(cè)試的結(jié)果。圖11顯示了本專利技術(shù)的肽與抗 生素的聯(lián)合提供了導(dǎo)致對(duì)銅綠假單胞菌的最有效抑制的協(xié)同效應(yīng)。 圖12顯示了 B2088 (即V2D)和B2088_99 (即G2二聚體）對(duì)抗（a)銅綠假單胞菌 ATCC 9027和（B)銅綠假單胞菌ATCC 27853菌株的殺菌性質(zhì)。注意到B2088_99(即G2二 聚體）減少細(xì)菌細(xì)胞活力50%的肽的有效劑量（ED5tl)比B2088(即V2二聚體）低兩倍。因 此，圖12顯示了本公開內(nèi)容的肽對(duì)細(xì)菌的有效殺滅。 圖13顯示了 B2088 (即V2二聚體）和B2088_99 (即G2二聚體）對(duì)抗銅綠假單胞 菌的時(shí)間-殺滅動(dòng)力學(xué)。注意到在Ix和2x MIC下B2088_99 (即G2二聚體）表現(xiàn)對(duì)兩種 銅綠假單胞菌菌株更快的殺滅動(dòng)力學(xué)。因此，圖13顯示了，本公開內(nèi)容的肽引起了比對(duì)照 更快的殺滅細(xì)菌。 圖14顯示了 B2088 (即V2二聚體）和B2088_99 (即G2二聚體）的外膜（OM)滲透 性測(cè)定的結(jié)果。測(cè)量了引起NPN熒光強(qiáng)度50%增加所需的肽濃度（PC5tl)。B2088_99(即G2 二聚體）的PC50比B2088 (即V2二聚體）更高，表明B2088 (即V2D)具有與B2088_99 (即 G2二聚體）相比更高的透化作用。 圖15顯示了 B2088 (即V2二聚體）和B2本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種肽，所述肽包含式I(SEQ?ID?NO:1)：[(R)a(X1)b(X2)c(X3)a(X4)b]n，其中，X1、X2和X4彼此獨(dú)立地選自由K、R、G和A組成的組；X3為K、R、L、V、I、G或A其中，a和b獨(dú)立地被選擇為從1到10的整數(shù)，c是選自從0到5的整數(shù)，且n是至少1。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：韋爾馬·錢德拉謝卡爾，李建國，拉克斯米尼亞拉揚(yáng)·拉詹瑪尼，羅杰·威爾默·博伊爾曼，劉守平，許俊杰，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：新加坡科技研究局，新加坡保健服務(wù)集團(tuán)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：新加坡;SG