雙特異性T細胞活化性抗原結(jié)合分子制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)一般涉及用于T細胞活化和對特定靶細胞重定向的新穎雙特異性抗原結(jié)合分子。另外，本發(fā)明專利技術(shù)涉及編碼此類雙特異性抗原結(jié)合分子的多核苷酸，和包含此類多核苷酸的載體和宿主細胞。本發(fā)明專利技術(shù)進一步涉及用于生成本發(fā)明專利技術(shù)雙特異性抗原結(jié)合分子的方法，以及在疾病治療中使用這些雙特異性抗原結(jié)合分子的方法。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】雙特異性T細胞活化性抗原結(jié)合分子專利
本專利技術(shù)一般涉及用于活化T細胞的雙特異性抗原結(jié)合分子。另外，本專利技術(shù)涉及編碼此類雙特異性抗原結(jié)合分子的多核苷酸，以及包含此類多核苷酸的載體和宿主細胞。本專利技術(shù)進一步涉及用于生成本專利技術(shù)雙特異性抗原結(jié)合分子的方法，以及在疾病治療中使用這些雙特異性抗原結(jié)合分子的方法。專利技術(shù)背景在多種臨床背景中常常期望選擇性破壞個別細胞或特定細胞類型。例如，特異性破壞腫瘤細胞而使健康細胞和組織保持完整且不受損是癌癥療法的首要目的。實現(xiàn)這點的一種有吸引力的方式是通過誘導(dǎo)針對腫瘤的免疫應(yīng)答，使得免疫效應(yīng)細胞諸如天然殺傷(NK)細胞或細胞毒性T淋巴細胞(CTL)攻擊并破壞腫瘤細胞。CTL構(gòu)成免疫系統(tǒng)最有力的效應(yīng)細胞，然而它們不能通過由常規(guī)治療性抗體的Fc域介導(dǎo)的效應(yīng)器機制來激活。在此點上，最近數(shù)年對雙特異性抗體變得感興趣，其設(shè)計為用一個“臂”結(jié)合靶細胞上的表面抗原，而用第二個“臂”結(jié)合T細胞受體(TCR)復(fù)合物的活化性的、不變的組分。此類抗體對其兩種靶物的同時結(jié)合會迫使靶細胞和T細胞之間的暫時相互作用，引起任何細胞毒性T細胞活化和隨后的靶細胞裂解。因此，免疫應(yīng)答重定向于靶細胞，而且不依賴于靶細胞的肽抗原呈遞或T細胞的特異性，其對于CTL的正常MHC限制性活化會是相關(guān)的。在此背景中，至關(guān)重要的是CTL僅在靶細胞向其呈遞雙特異性抗體時活化，即模擬免疫突觸。特別期望的是不需要淋巴細胞預(yù)條件化或共刺激來引發(fā)靶細胞有效裂解的雙特異性抗體。已開發(fā)出數(shù)種雙特異性抗體形式并研究了它們對調(diào)查中的T細胞介導(dǎo)的免疫療法的適宜性。其中，所謂的BiTE(雙特異性T細胞銜接物(engager))分子已得到非常好的表征，而且在臨床中已顯示出一些前景(綜述見Nagorsen和ExpCellRes317,1255-1260(2011))。BiTE是串聯(lián)scFv分子，其中兩個scFv分子通過柔性接頭融合。針對T細胞銜接評估的其它雙特異性形式包括雙抗體(Holliger等,ProtEng9,299-305(1996))及其衍生物，諸如串聯(lián)雙抗體(Kipriyanov等,JMolBiol293,41-66(1999))。一項最近的進展是所謂的DART(雙重親和力重靶向)分子，它們基于雙抗體形式但特征在于實現(xiàn)額外穩(wěn)定化的C端二硫橋(Moore等,Blood117,4542-51(2011))。所謂的triomab(它們是完整雜合小鼠/大鼠IgG分子，而且目前亦在臨床試驗中進行評估)代表了尺寸更大的形式(綜述于Seimetz等,CancerTreatRev36,458-467(2010))。正在開發(fā)的多種形式顯示免疫療法中歸因于T細胞重定向和活化的極大潛力。然而，生成對此合適的雙特異性抗體的任務(wù)絕不是微不足道的，而是牽涉到許多必須滿足的與抗體功效、毒性、適用性和生產(chǎn)能力有關(guān)的挑戰(zhàn)。小構(gòu)建體諸如例如BiTE分子(盡管能夠有效交聯(lián)效應(yīng)器和靶細胞)具有非常短的血清半衰期，從而需要通過連續(xù)輸注對患者施用它們。另一方面，IgG樣形式(盡管具有長半衰期的極大益處)受制于與IgG分子固有的天然效應(yīng)器功能有關(guān)的毒性。它們的免疫原性潛力構(gòu)成了成功治療性開發(fā)的IgG樣雙特異性抗體(尤其是非人形式)的另一個不利特征。最后，雙特異性抗體的一般開發(fā)中的一項主要挑戰(zhàn)是以臨床充足的數(shù)量和純度生產(chǎn)雙特異性抗體構(gòu)建體，原因自傲與具有不同特異性的抗體重和輕鏈在共表達后的錯配，這降低了正確裝配的構(gòu)建體的產(chǎn)率且導(dǎo)致許多無功能的副產(chǎn)物，而期望的雙特異性抗體可能難以與之分開。鑒于與目前可獲得用于T細胞介導(dǎo)的免疫療法的雙特異性抗體有關(guān)的難點和缺點，仍然存在對此類分子的新的改進形式的需要。本專利技術(shù)提供設(shè)計用于T細胞活化和重定向的雙特異性抗原結(jié)合分子，其組合了優(yōu)良的功效和生產(chǎn)能力與較低的毒性和有利的藥動學(xué)特性。專利技術(shù)概述在第一個方面，本專利技術(shù)提供一種T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其包含(i)第一抗原結(jié)合模塊，它是能夠特異性結(jié)合CD3的Fab分子，包含至少一個選自SEQIDNO:4，SEQIDNO:5和SEQIDNO:6的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個選自SEQIDNO:8，SEQIDNO:9和SEQIDNO:10的輕鏈CDR；(ii)第二抗原結(jié)合模塊，它是能夠特異性結(jié)合靶細胞抗原的Fab分子。在一個實施方案中，所述第一抗原結(jié)合模塊(它是能夠特異性結(jié)合CD3的Fab分子)包含包含與選自SEQIDNO:3，SEQIDNO:32和SEQIDNO:33的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含與選自SEQIDNO:7和SEQIDNO:31的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在一個實施方案中，所述第一抗原結(jié)合模塊(它是能夠特異性結(jié)合CD3的Fab分子)包含包含與SEQIDNO:3的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含與SEQIDNO:7的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在一個特定的實施方案中，所述第二抗原結(jié)合模塊能夠特異性結(jié)合癌胚抗原(CEA，CEACAM5)且包含至少一個選自SEQIDNO:24，SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個選自SEQIDNO:28，SEQIDNO:29和SEQIDNO:30的輕鏈CDR。在另一個特定的實施方案中，所述第二抗原結(jié)合模塊能夠特異性結(jié)合CEA且包含包含與SEQIDNO:23的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含與SEQIDNO:27的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在另一個特定的實施方案中，所述第二抗原結(jié)合模塊能夠特異性結(jié)合MCSP(CSPG4)且包含至少一個選自SEQIDNO:14，SEQIDNO:15，SEQIDNO:16，SEQIDNO:35，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38和SEQIDNO:40的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個選自SEQIDNO:18，SEQIDNO:19，SEQIDNO:20，SEQIDNO:44，SEQIDNO:45，SEQIDNO:48，SEQIDNO:49和SEQIDNO:50的輕鏈CDR。在另一個特定的實施方案中，所述第二抗原結(jié)合模塊能夠特異性結(jié)合黑素瘤相關(guān)硫酸軟骨素蛋白聚糖(MCSP，CSPG4)且包含至少一個選自SEQIDNO:14，SEQIDNO:15和SEQIDNO:16的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個選自SEQIDNO:18，SEQIDNO:19和SEQIDNO:20的輕鏈CDR。在另一個特定的實施方案中，所述第二抗原結(jié)合模塊能夠特異性結(jié)合MCSP且包含包含與選自SEQIDNO:13，SEQIDNO:34，SEQIDNO:36，SEQIDNO:39和SEQIDNO:41的氨基酸序列至少約95％，96％，97％，98％，99％或100％相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含與選自SEQIDN本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其包含(i)第一抗原結(jié)合模塊，它是能夠特異性結(jié)合CD3的Fab分子，包含至少一個選自SEQ?ID?NO:4，SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個選自SEQ?ID?NO:8，SEQ?ID?NO:9和SEQ?ID?NO:10的輕鏈CDR；(ii)第二抗原結(jié)合模塊，它是能夠特異性結(jié)合靶細胞抗原的Fab分子。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2013.02.26 EP 13156686.11.一種T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其包含(i)第一抗原結(jié)合模塊，它是能夠特異性結(jié)合CD3的Fab分子，包含SEQIDNO:4的重鏈互補決定區(qū)(CDR)1，SEQIDNO:5的重鏈CDR2，SEQIDNO:6的重鏈CDR3，SEQIDNO:8的輕鏈CDR1，SEQIDNO:9的輕鏈CDR2和SEQIDNO:10的輕鏈CDR3，其中所述第一抗原結(jié)合模塊是交換Fab分子，其中Fab輕鏈和Fab重鏈的可變或恒定區(qū)任一是交換的；(ii)第二和第三抗原結(jié)合模塊，它們各自是能夠特異性結(jié)合CEA的Fab分子，包含SEQIDNO:24的重鏈CDR1，SEQIDNO:25的重鏈CDR2，SEQIDNO:26的重鏈CDR3，SEQIDNO:28的輕鏈CDR1，SEQIDNO:29的輕鏈CDR2和SEQIDNO:30的輕鏈CDR3；和(iii)由能夠穩(wěn)定聯(lián)合的第一和第二亞基構(gòu)成的Fc域，其中所述第二抗原結(jié)合模塊在Fab重鏈的C端融合至所述第一抗原結(jié)合模塊的Fab重鏈的N端，且所述第一抗原結(jié)合模塊在Fab重鏈的C端融合至所述Fc域的第一亞基的N端，且其中所述第三抗原結(jié)合模塊在Fab重鏈的C端融合至所述Fc域的第二亞基的N端。2.權(quán)利要求1的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述第一抗原結(jié)合模塊是交換Fab分子，其中Fab輕鏈和Fab重鏈的恒定區(qū)是交換的。3.權(quán)利要求1或2的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述第一抗原結(jié)合模塊包含包含與SEQIDNO:3的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含與SEQIDNO:7的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或其中所述第二和第三抗原結(jié)合模塊各自包含包含與SEQIDNO:23的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含與SEQIDNO:27的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。4.權(quán)利要求1或2的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述第一抗原結(jié)合模塊包含包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，和/或其中所述第二和第三抗原結(jié)合模塊各自包含包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQIDNO:27的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。5.權(quán)利要求1的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其包含(i)第一抗原結(jié)合模塊，它是能夠特異性結(jié)合CD3的Fab分子，包含包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，其中所述第一抗原結(jié)合模塊是交換Fab分子，其中Fab輕鏈和Fab重鏈的恒定區(qū)是交換的；和(ii)第二和第三抗原結(jié)合模塊，它們各自是能夠特異性結(jié)合CEA的Fab分子，包含包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQIDNO:27的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。6.權(quán)利要求1至5中任一項的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述Fc域是IgGFc域。7.權(quán)利要求6的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述Fc域是IgG1Fc域。8.權(quán)利要求1至7中任一項的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述Fc域是人Fc域。9.權(quán)利要求1至8中任一項的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述Fc域包含促進所述Fc域的第一和第二亞基聯(lián)合的修飾。10.權(quán)利要求9的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中在所述Fc域的第一亞基的CH3域中，一個氨基酸殘基用具有更大側(cè)鏈體積的氨基酸殘基替換，由此在第一亞基的CH3域內(nèi)生成隆起，所述隆起可安置于第二亞基的CH3域內(nèi)的空腔中，且在所述Fc域的第二亞基的CH3域中，一個氨基酸殘基用具有更小側(cè)鏈體積的氨基酸殘基替換，由此在第二亞基的CH3域內(nèi)生成空腔，所述空腔內(nèi)可安置第一亞基的CH3域內(nèi)的隆起。11.權(quán)利要求1至10中任一項的T細胞活化性雙特異性抗原結(jié)合分子，其中所述Fc域是人IgG1Fc域...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：M·巴卡克，T·霍弗，R·霍斯，C·耶格，C·克萊因，E·默斯納，P·烏馬納，T·魏因齊爾，
申請(專利權(quán))人：羅切格利卡特公司，
類型：發(fā)明
國別省市：瑞士;CH